X-J超级化心脏保存液的研制及作用效果.pdf
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1、第1 4 卷第2 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月 中国现代医学杂志 C h i n a I o a r n a l 成M o d e rn M e d i c i n e V o l . l 4 N o . 2 0 Oc t . 2 0 0 4 文章编号:1 0 0 5 - 8 9 8 2 ( 2 0 0 4 ) 2 0 - 0 1 3 6 - 0 3 X - J 超级化心脏保存液的研制及作用效果 王红兵 , 段大为 , 刘维永 , 付 勇2 , 朱海龙2 ( 1 . 第四 军医 大学西京医 院 心脏外科, 陕西 西安 7 1 0 0 3 2 ; 2 . 第2 9 军医大学基础部病理学
2、教研室, 陕西 西安 7 1 0 0 3 3 ) 摘要: 目 的 研究和 探讨含尼可地尔 的x 刁超级化心胜保存液对离 体兔心低温 保存的有效时限和保存 效 果 。 方 法 将3 2 只 健 康 成 年 兔平 均 分成4 组, 每 组 动 物 摘取 心 脏 后用x J超 级 化 液 进 行 低温 保 存离 体 供 心; I 组, 离 体 供心 低温保存4 h ; 1 1 组低温保存6 h ; l l l 组低温保存8 h ; I V 组低温保存1 0 h 。采用离 体工作心 模 型, 观察保存前后离 体兔心的心功能、 心肌细胞C e, C a - A T P - 活 性, 心 肌肌钙蛋白I 、
3、 心脏冠脉流贵、 心肌 含水黄及超橄结构的变 化。 结果 随着离 体心脏低温保存时间 的延长心功能速渐减弱, 心肌细胞C a p 浓度升 高, C a “ - A T P - 活 性降低, 心肌含水量增加。在低温保存卜6 h 心肌超橄结构均呈轻度损伤; 在低温保存8 h 和1 0 h 心 肌 超很结构变 化呈中 度损伤。结论 x 一超级化 保存液汁离 体心 脏 低温4 h , 6 h 保存效果与 保存前 无差异。8 h , 1 0 h 组分别与6 h 组相比 保存效果有明显差异。 关键词: 心胜保存; 低温保存; 离 体供心; 超级化液 中圈分类号: A - 3 3 2文献标识码: B 目 前
4、心脏移植的临床工作中, 对离体供心的保 存主要是采用低温保存液灌注后冷藏保存。由 于国 外的脏器保存液价格昂贵, 并且在心脏移植中这些 保存液对心脏的低温保存仍有一定的损伤作用, 研 究适应于心脏移植的 专用心 脏保存液对于我国 心脏 移植已 迫在眉睫。 本实验用自 行研制的西京X 一保 存液观察对离体心脏低温保存的效果。 1 材料与方法 , . , 灌注保存液配制 X 一超级化心脏保存液的 组成为: N i c o r s n d i l 浓 度为 1 . 6 0 m m o l / L , 甘露醇6 0 .0 0 m m o l / L , 乳酸8 0 .0 0 二 。 I/ L , 谷氨
5、酸2 0 .0 0 m m o l / L ,氢氧化钠 1 0 0 . 0 0 m m o U L , 抓化钙0 . 2 5 m n lo l/ L , 氛化钾4 . 5 0 m m o l / L , 抓 化镁 1 3 .0 0 m m o l / L , 组氨酸3 0 .0 0 m m o l / L , 谷胧甘肤 3 .0 0 m m o U L ; 渗透 压3 2 0 m o s m o ag I p H 7 .3 - 7 .4 0 1 .2 动物分组 实验用大白 兔3 2 只, 随机分为4 组, 每组8 只 雌雄各半。 根据离体心 脏的 保存时间 不同 各分为: I 组, 低温保存4
6、 h 沮组低温保存6 h ; m组低温保存 8 h ; I V 组低温 保存1 0 h . 1 .3 模型的建立和实验程序 大白 兔称重后, 仰卧固 定于手术台上, 戊巴比妥 钠( 6 0 m g/ k g ) 经腹腔注射麻醉, 肝素( 3 m g l k g ) 经 耳缘静脉注人进行抗凝。麻醉满意后, 正中开胸, 于 主动脉和右锁骨下动脉交界处离断主动脉, 切取的 心脏立即 放人。 - 4 C K - H 液中, 冲洗残存在主动脉 内的 血液, 插主动脉灌注管, 迅速移至L a n g e n e d o r ff 灌注装置上, 并用K - H液灌注( H - K 液用9 5 % 氧 及 5
7、 % n C O : 平 衡) , 灌注 液温 度维 持在3 7 C , 灌注 压为 9 .3 k P a ( 1 0 0 C M H jO ) : 在平衡灌注中, 切开 左心房, 经 左心房、 二尖瓣将带有测压导管的 球囊送人左心室, 侧压导管的 另一端连接八导电生理记录仪。 在灌注 中 切开 肺 动脉 根部, 使冠状动 脉回 流液充分引 流;灌 注1 0 m i n , 待工作心稳定后测定离体心脏血流动力 学的 基 础 值 ( 左 室 发 展 压 ( D P ) 和 左 室 压 力 微 分 ( L V t d p i d t ) 。在离体心脏血流动力学的基础值测 试完毕后, 经主动脉灌注管
8、近端的 三通用连有测压 装置的注射器注人超级化液, 保护液的灌注压力维 持 在7 0 - 7 5 c m H z O , 温度为4 9 C , 灌注 量为3 0 m l/ k g , 灌 注 完 毕 后 将 在 心 室内 气 囊 抽 成 负 压(- 1 0 m m h g ) , 并将离体心脏置人0 - 4 C X - J 超级化保存液中 进 行低温保存。 达到保存时间后, 将心脏重新连于 L a n g e n e d o r ff 灌注 模型上, 用3 7 的H - K 液 灌注, 并 用9 5 % 的0 2 及5 % 的C 0 2 平衡。向 左心室内 气囊注 人和停跳前相同量的水,灌注
9、3 0 m i n 后记录D P , 收稿日 期 2 0 0 3 - 1 2 - 0 9 万方数据 第 ? A期王红兵, 等: X 超级化心脏保存液的研制及作用效果 + d p /d t m a x , - d p / d tm a x 和C F , 计算恢复率( 恢复率= 保存后数值二 保存前数值x 1 0 0 %) 。测定心功能、 冠状动脉血流量及留取冠状静脉液。取左心室相同 部位心肌组织, 分切成数块, 放人液氮中 保存以 备做 心肌C a “ - A T P 酶活性和心肌线粒体钙离子浓度的 检测。 在实验中 要求从开胸到开始灌注的 时间 保持 在7 0 s 以内, 以 尽量缩短心肌缺血
10、的时间, 对超出 此时间 段的 实验标本予以放弃。 1 . 4 检测方法 参照N a k a n i s h i T 和S o r d a h l L A方法分离心肌 线粒 体, 蛋白 含量测定 参照L - - - Y 法, 用原 子吸收 分 光光度 法测定心肌线 粒体钙含量, 结果以n m o U m g p r o t e in 表示, 即 线粒体钙含量( n m o U m g p ro te in ) 二 线粒体钙( n m o l ) / 蛋白含量( m g ) ; S R C a p * - A T - P a s e 活性测定参照7 o n e s A法。心肌细胞 A T P含量
11、 检测: 将液氮中保存的心肌组织经匀浆、 低温离心、 调 节p H 值后, 取上清液 用虫荧光素酶 测定心 肌细 胞A T P 含量。 单位N , m o 崛。 心 肌含 水量= ( 1 一 烘干 后心肌重量/ 湿重) x 1 0 0 % . 1 .5 统计学处理 四组检测和记录数值用S P S S 1 0 .。 软件处理, 组 内数值用均数士 标准差表示, 组间比 较用: 检验, t 检验行两两比较, P 0 .0 5 ) , 低温保存再灌注3 0 m i n 后, 心功能的 恢复 率随 着 保存时间的 延长而降 低。 I - IV 组再灌注 后心脏复跳率分别为8 / 8 , 8 / 8 ,
12、 6 / 8 和4 / 8 。 各组心功 能指标恢复率。 见表 2 。 2 . 3 心肌细胞C a p 含,, C a 2l - A 下 P a s e活性及心 肌组织A T P含f的变化 表3 心肌细 胞C a m 含f C a l - A T P a s e 活性及心肌组织 A T P 含.的变化 组别例数 A T P ( t, -V p1 C a b - A T P - 活性 S R C a z 4 .4 1 t 0 56 3 . 2 1 t 0 .7 4 0 3 .6 8士0 . 8 3 3 . 1 3士住1 7 ( 卜m 山的) 4 .9 7士公1 7 4 05士0 . 1 8 ,
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