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1、 中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准 孢孢 子子 数数 测测 定定 法法 SB/T 10315-1999 Enumeration of spore 本方法适用于酿造酱油半成品菌种的孢子数测定。本方法适用于酿造酱油半成品菌种的孢子数测定。 1 仪器与试剂仪器与试剂 a. 显微镜、血球计数板、盖片显微镜、血球计数板、盖片; b. 95%酒精、稀硫酸酒精、稀硫酸 (110); c. 平天平天: 感量感量 0.001g 。 2 操作方法操作方法 2.1 样品稀释样品稀释:精确称取种曲或二级菌种精确称取种曲或二级菌种 1g (称淮至称淮至 0.002g),倒入盛有玻璃珠的倒入盛有玻璃珠的 25
2、0mL 锥形瓶内锥形瓶内,加加 95%酒精酒精 5mL,加无菌水加无菌水 20mL,加稀硫酸加稀硫酸 10mL,充分振摇充分振摇,使分生孢子个个分散使分生孢子个个分散, 然后用多层纱布过滤、冲洗然后用多层纱布过滤、冲洗,务使滤渣不含孢子务使滤渣不含孢子,稀释至稀释至 500mL。 2.2 制片制片:取稀释液取稀释液 1 滴滴,滴于血球计数板的计算格上滴于血球计数板的计算格上,然后将盖片轻轻由一边向另一然后将盖片轻轻由一边向另一 边压下边压下,使盖片与计数板完全密合使盖片与计数板完全密合,液中无气泡液中无气泡,用滤纸吸干多余的溢出悬浮孢子液用滤纸吸干多余的溢出悬浮孢子液,静置静置 数分钟数分钟,
3、待孢子沉降。待孢子沉降。 2.3 观察计数观察计数:用低倍镜头或高倍镜头观察。由于稀释液中的孢子用低倍镜头或高倍镜头观察。由于稀释液中的孢子,在血球计数板上在血球计数板上 处于不同的空间位置处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到要在不同的焦距下才能看到,因而计数时必须逐格调动微细螺旋因而计数时必须逐格调动微细螺旋, 才能不使遗漏。孢子常位于大格的划线上才能不使遗漏。孢子常位于大格的划线上,应一律取二边计数应一律取二边计数,而弃另二边而弃另二边,以减少误差。以减少误差。 使用使用 1625 的计数板时的计数板时,只计板上四个角上的只计板上四个角上的 4 个大格个大格(即即 100 个小格个
4、小格)。如果使用。如果使用 25 16 的计数板的计数板,除计四个角的除计四个角的 4 个大格外个大格外,还需要计中央一大格的数目还需要计中央一大格的数目(即即 80 个小格个小格)。每。每 个样品重复观察计数不少于个样品重复观察计数不少于 2 次次,然后取其平均值。即为该样品种曲的孢子数。然后取其平均值。即为该样品种曲的孢子数。 3 计算计算 3.1 1625 的计数板的计数板 n V 孢子数(个克)孢子数(个克) =40010000 100 G nV =410*4 (1) G 式中式中:n100 小格内孢子总数小格内孢子总数,个个; V孢子稀释液体积孢子稀释液体积,mL; G样品重量样品重
5、量,g。 3.2 2516 的计数板的计数板 n V 孢子数(个克)孢子数(个克) =40010000 80 G nV =510*4 (2) G 式中式中:n80 小格内孢子总数小格内孢子总数,个个; V孢子稀释液体积孢子稀释液体积,mL; G样品重量样品重量,g。 4 注意事项注意事项 4.1 称样要尽量防止孢子的飞扬。称样要尽量防止孢子的飞扬。 4.2 测定时测定时,如果发现有许多孢子结集成团或成堆如果发现有许多孢子结集成团或成堆,说明样品稀释未能符合操作要求。说明样品稀释未能符合操作要求。 因此必须重新称重、振摇、稀释。因此必须重新称重、振摇、稀释。 4.3 生产实践中应用时生产实践中应用时,种曲以干物质计算。因而需要同时测定种曲水分种曲以干物质计算。因而需要同时测定种曲水分,计算时样计算时样 品重量则改为绝干重量。品重量则改为绝干重量。 样品绝干重量样品绝干重量G(1-W)(3) 式中式中:G样品重样品重,g; W样品水分的百分比含量样品水分的百分比含量,%。 附加说明附加说明: 本标准由商业部副食品局提出。本标准由商业部副食品局提出。 本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准由上海市酿造科学研究所起草。 本标准主要起草人须凤高。本标准主要起草人须凤高。 中华人民共和国商业部中华人民共和国商业部 1987-11-20 批准批准 1988-07-01 实施实施
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