[商检标准]-SNT 1086-2002 胎儿弯杆菌的分离鉴定方法1.pdf
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1、SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 s N / T 1 0 8 6 -2 0 0 2 胎儿弯杆菌的分离鉴定方法 P r o c e d u r e o f i s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n f o r c a mp y l o b a c t o r f e t u s 2 0 0 2 一 0 3 门 5 发 布2 0 0 2 一 0 9 一 0 1实施 中华人民共和匡 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 肩 s N/ T 1 0 8 6 -2 0 0 2 前言 本标准是按照G B / T 1 . 1 -1
2、9 9 3 标准化工 作导则 第1 单元: 标准的起草与表述规则 第1 部分: 标准编写的基本规定 的要求编写的。 本标准依据国际动物流行病管理局( O I E ) 标准手册, 在加拿大国家动物疾病研究所实验室操作规 程的基础上, 根据国内实验室条件, 在不影响检验结果的条件下, 对上述规程进行了部分修改而制定的。 本标准的附录A是标准的附录, 附录 B是提示的附录。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国天津出人境检验检疫局。 本标准主要起草人: 秦贞奎、 侯艳梅、 张碧波、 张立怀。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 中华人 民共
3、和国出入境检验检疫行业标准 胎儿弯杆菌的分离鉴定方法 s N / T 1 0 8 6 -2 0 0 2 P r o c e d u r e o f i s o l a t i o n a n d i d e n t i f ic a t i o n f o r c a mp y l o b a c t o r f e t u s 范 围 本标准规定了胎儿弯杆菌的分离鉴定方法。 本标准适用于牛、 绵羊、 冷冻精液、 流产胎儿、 胎衣等的胎儿弯杆菌的检验。其他动物可参照使用。 2引用标准 下列标准所包含的条文, 通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时, 所示版本均 为有效。所有标准都
4、会被修订, 使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 G B 4 7 8 9 . 2 8 -1 9 9 4 食品卫生微生物学检验染色法、 培养基和试剂 G B / T 6 6 8 2 -1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法 设备和材料 混合气体( 质量比为 3 . 5 %氧气、 1 0 %二氧化碳, 8 6 . 5 %氮气) 。 厌氧培养罐。 采样棒及吸球。 2 mL注射器、 5 号针头、 2 0 号针头。 1 0 m L灭菌瓶及生理盐水。 供常规细菌分离鉴定用的基本设备与材料. 培养基和试剂 月八了1月qJCU . IJIJ伪J口J几工J,J伪JJ叼 增菌运输培养基( T
5、 E M)配制方法见附录A之 A1 , 半脆氨酸牛心浸膏培养基( C H) : 配制方法见附录 A之 A 2 , M u e ll e r H i n t o n A g a r ( M H) : 配制方法见附录A之A 3 o 琉基乙酸盐肉汤( T h io g l y C o l l a t e B r o t h ) : 配制方法见附录A之A4 , 各种相应生化培养基( 配制方法见 G B 4 7 8 9 . 2 8 ) , ,Ln可 : : 5 样品采集与处理 51 母牛站立或六柱栏保定, 用 5 %来苏儿消毒牛的外阴部, 将无菌采样棒一端的吸球压扁, 将采样端 插人阴道中并来回抽动.
6、吸取阴道粘液。取出采样棒后, 插人盛有 3 m l灭菌生理盐水的小瓶中吹吸数 次, 即为冲洗液。冲洗液静置 1 mi n -2 mi n , 用灭菌注射器吸取上清液2 ml 分别注人两瓶增菌运输培 养基中, 每瓶 1 m l , ,振荡混匀。尽快送至实验室。接种样品的丁 E M 培养基运输途中应保存在 1 8 C且 不超过 4 8 h . 5 . 2 公牛六柱栏保定, 用绳子固定采样侧的后肢, 剪短阴筒外部的阴毛, 用 5 %的来苏儿消毒公牛的尿 道口, 将无菌采样棒的采样端插人阴筒内, 将另一端的吸球压扁并来回抽动, 吸取包皮粘液。 取出采样棒 中华人民共和国国家质,监督检验检疫总局2 0
7、0 2 - 0 3 - 1 5 批准2 0 0 2 - 0 9 - 0 1 实施 工 S N / T 1 0 8 6 -2 0 0 2 迅速插人盛有 3 mL灭菌生理盐水的无菌瓶中吹吸数次, 即为冲洗液。冲洗液静置 1 min -2 mi n , 用灭 菌注射器吸 取上清液2 m L , 分别注人两瓶增菌 运翰培养基中, 每瓶1 m l , 。 振荡混匀。 尽快送至实验室。 接种样品的T E M 培养基运输途中应保存在 1 8 且不超过 4 8 h o 5 . 3 冷冻精液: 精液尽可能在无菌条件下采取, 将精液装人无菌瓶中, 密封后送往实验室。 5 . 4 流产胎儿、 胎衣; 流产胎儿胃内容
8、物用棉拭子直接接种到含抗菌素的MH或CH琼脂平板上; 胎 衣、 流产胎儿的肺、 肝, 表面火焰消毒后用生理盐水匀浆, 制成匀浆液。 6 分离培养 6 . , 取样品做革兰氏染色并做湿涂片镜检。 6 . 2 可用棉拭子蘸取冲 洗液 或匀浆液直接涂布于含抗菌素的M H或C H琼脂平板上。 6 . 3 已接种样品的增菌运输培养基置 3 7 C培养7 2 h 。用直径 3 mm的接种环将增菌液分别划线于两 个 MH或C H平板培养基上。 6 . 4 将所有 MH或C H平板放置厌氧培养罐中, 密闭后将罐内空气抽出, 达到一5 . 5 k P a时停止, 充人 经 。 . 2 2 JA M滤膜过滤的混合
9、气体至气压为零 再将气体抽出和充人反复两次。将培养罐置 3 7 C 培养 7 2 h, 6 . 5 观察 MH, C H培养基上有无疑为胎儿弯杆菌的菌落, 如无可弃之。将典型或可疑菌落划线于 MH 或 C H琼脂平板培养基上培养7 2 h , 胎儿弯杆菌在MH或C H平板培养基上的菌落特征为: 不溶血、 半透明、 光滑、 周边整齐、 圆整、 直径 为 1 mm左右 。 了 鉴定 7 . , 筛选试验 7 . 1 . 1 取典型或可疑纯培养物做革兰氏染色、 湿涂片动力观察、 氧化酶试验及过氧化氢酶试验( 见 GB 4 7 8 9 . 2 8 ) , 胎儿弯杆菌为革兰氏染色阴性, 呈螺旋状或“ S
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