[商检标准]-SNT 2099-2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法.pdf
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1、书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口食品中绿脓杆菌检测方法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犘 狊 犲 狌 犱 狅 犿 狅 狀 犪 狊 犪 犲 狉 狌 犵 犻 狀 狅 狊 犪犻 狀犳 狅 狅 犱犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 食品伙伴网http:/ 书书书 前 言 本标准的附录、 附录均为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国福建出入境检验检疫局、 中国检
2、验检疫科学研究院。 本标准主要起草人: 郑晶、 黄晓蓉、 赵贵明、 翁国柱、 吴芸芸、 郑麟毅、 陈彬、 邵碧英。 本标准系首次发布的出入境检验检疫标准。 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 食品伙伴网http:/ 进出口食品中绿脓杆菌检测方法 范围 本标准规定了食品中绿脓杆菌的定性和定量检测方法。 本标准适用于各类食品中的绿脓杆菌检测, 可参考此法检测水的绿脓杆菌。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这
3、些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 食品微生物学检验 染色法、 培养基和试剂 分析实验室用水规格和试验方法 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 绿脓杆菌属假单胞菌属( 狆 狊 犲 狌 犱 狅 犿 狅 狀 犪 狊) 亦名为铜绿假单胞菌, 具荚膜、 鞭毛, 为无芽胞的革兰氏阴性杆菌, 能分解蛋白质, 发酵糖类能力较低, 能产生两种水溶性色素: 一种是绿脓菌素, 为蓝绿色的吩嗪类化合物, 无荧光性, 另一种为荧光素, 呈绿色。 设备和材料 恒温培养箱: 、 。 显微镜: 带油镜头。 均质器。 高压灭菌器。 天平: 精度 。 全自动微生物鉴定系统或类似设备。 注
4、: 是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者, 并不表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果, 则可使用这些等效产品。 吸管: , 分刻度 ; , 分刻度 。 可调移液器: , 。 试管: 。 灭菌平皿: 直径 , 底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。 灭菌的样品处理器具: 镊子、 剪刀、 勺子。 质控菌株: 绿脓杆菌标准菌株 , 恶臭假单胞菌 或其他经过验证的具有 相同生物学特征的同类菌株。 培养基和试剂 除另有规定外, 所用试剂均为分析纯, 试验用水应符合 的规定。 增菌液: 见第 章。 磷酸盐缓冲稀释液: 见第 章。 犛 犖犜 版权所有
5、禁止翻制、电子传阅、发售 食品伙伴网http:/ 假单胞菌 选择性培养基: 见第 章。 假单胞菌 选择性培养基: 见第 章。 氧化酶试验: 按 中 规定。 乙酰胺培养基: 见第 章。 葡萄糖酸盐培养基: 见第 章。 精氨酸双水解酶培养基: 见第 章。 硝酸盐蛋白胨水培养基: 见第 章。 明胶培养基: 见第 章。 赖氨酸脱羧酶培养基; 见第 章。 营养琼脂: 见第 章。 测试条。 测试卡。 注: 测试条和 测试卡是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便 本标准的使用者, 并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果, 则可使用这些等效产品。 检验程序 方法提要
6、食品中绿脓杆菌的检验方法是通过选择性增菌、 分离、 生化鉴定等方法对食品中可能存在的绿脓杆 菌进行定性和定量的检验。 检验程序 绿脓杆菌的检验程序见图。 图 绿脓杆菌检验程序示意图 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 食品伙伴网http:/ 检验步骤 样品的存放 如为冷冻样品, 应于 解冻, 且不超过 , 若不能及时检验, 应置于小于 保存。 非冷冻的易腐样品应尽可能及时检验, 若不能及时检验, 应置于冰箱保存, 并在 内检验。 绿脓杆菌定性检验 按无菌操作取检样 ( ) 至 增菌液中, 充分摇匀, 于 培养 。 接种 增菌培养物按 进行分离鉴定。 绿脓杆菌定量检验( 犕犘 犖法)
7、无菌操作取样品 ( ) , 放入灭菌均质杯或均质袋中, 加 灭菌生理盐水或磷酸盐 缓冲稀释液, 均质混匀, 制成 稀释液。 用 灭菌吸管吸取 稀释液 , 加入装有 灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲稀 释液的广口瓶中, 混合均匀, 制成 稀释液。 每一稀释度换取一支 灭菌吸管, 按上述操作进行 倍递增稀释。 根据对样品污染情况的估计, 选择三个连续适宜的稀释度。每个稀释度接种三管 肉 汤, 每管接种 。样品的最高稀释度应达到能获得阴性终点, 置 培养 。如有 绿脓杆菌生长, 培养液表面通常有一层薄菌膜, 培养液常呈黄绿色或蓝绿色。 分离鉴定 分离培养 每份增菌液用接种环分别划线接种于 平板和 平板, 置
8、 培养 , 观察菌 落形态。绿脓杆菌在这两种平板上通常呈现圆形、 平滑、 湿润的黄绿色菌落, 在紫外光照射下可观察到 荧光。少数不形成黄绿色菌落, 但有特殊芳香气味。从每个平板上挑取个可疑菌落, 分别接种到营养 琼脂斜面上, 培养 , 取纯培养物进行鉴定。 氧化酶试验 挑取斜面上的纯培养物, 按 中 进行氧化酶试验, 绿脓杆菌氧化酶试验 呈阳性。 革兰氏染色 挑取斜面上的纯培养物, 按 中 进行革兰氏染色, 绿脓杆菌为革兰氏阴性 杆菌。 鉴定 革兰氏染色阴性、 氧化酶阳性的培养物应用 测试条、 生化鉴定系统或按 进行生化鉴定。 乙酰胺试验 挑取斜面上的纯培养物, 接种到乙酰胺培养基中, 置 培
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