[烟草标准]-YCT 202-2006 烟草及烟草制品 多酚类化合物绿原酸、莨菪亭和芸香苷的测定.pdf
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1、I CS 6 5 . 1 6 0 X 8 7 备案号 :1 7 2 9 6 -2 0 0 6 Y口 中 华 人 民 共 和 国 烟 草 行 业 标 准 Y C/ T 2 0 2 -2 0 0 6 烟草及烟草制品多酚类化合物 绿原酸、 菌著亭和芸香普的测定 T o b a c c o a n d t o b a c c o p r o d u c t s -D e t e r mi n a t i o n o f p o l y p h e n o l s - C h l o r o g e n i c a c i d , s c o p l e t i n a n d r u t i n 2
2、0 0 6 - 0 2 - 2 3发布2 0 0 6 - 0 3 - 0 1实施 国 家 烟 草 专 卖 局发 布 YC / T 2 0 2 -2 0 0 6 oU吕 本标准的附录A、 附录B为资料性附录。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由 全国烟草标准化技术委员会( T C 1 4 4 ) 归口。 本标准起草单位: 中国烟草总公司郑州烟草研究院、 中国烟草标准化研究中心。 本标准 主要 起草 人 : 谢复炜 、 李栋 、 王异、 吴鸣 Y C/ T 2 0 2 -2 0 0 6 烟草及烟草制品多酚类化合物 绿原酸、 蓖著亭和芸香昔的测定 范围 本标准规定了烟草和烟草制品中三种多酚( 绿
3、原酸、 蓑营亭和芸香普) 的测定方法。 本标准适用 于烟 草和烟草制品。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是 否 可 使 用 这 些 文 件的 最 新 版本 。 凡 是 不注日 期的 引 用文 件, 其 最 新 破 本 适 用 于 本 标准 。 G B / T 5 6 0 6 . 1 卷烟第 I 部分: 抽样 G B / T 1 9 6 1 6 烟草成批原料取样的一般原则( G B / T 1 9 6 1 6 -2 0
4、 0 4 , I S O 4 8 7 4 : 2 0 0 0 , MO D ) YC/ T 3 1烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法 原理 用 5 。 %甲醇水溶液萃取烟草和烟草制品中的多酚类化合物, 萃取液经 。 . 4 5 V m滤膜过滤后, 通过 高效液相色谱( H P L C ) 定量分析检测其中三种多酚类化合物的含量。 4试荆 除特别要求以外, 均应使用分析纯级试剂, 水应为蒸馏水或同等纯度的水去离子水( R 5 Mn, 使用前经 。 . 4 5 ri m滤膜过滤) 4 . 1 去离子水( R5 Mn) . 4 . 2 甲醇: 色谱纯。 4 . 3 乙酸: 分析纯 4 . 4
5、绿原酸( 纯度9 7 %) , 4 . 5 蓑若亭( 纯度9 7 ) 。 4 . 6 芸香普( 纯度9 7 环) 。 4 . 7 萃取溶液: 制备 I +l ( 体积分数) 的甲醇( 4 . 2 ) +水( 4 . 1 ) 溶液。 4 . 8 多酚标准溶液 4 . 8 . 1 一级标准溶液 在 5 0 mL烧杯中称量 1 0 0 mg左右绿原酸( 4 . 4 ) , 5 m g左右蓖若亭( 4 . 5 ) , 1 0 0 mg左右芸香普 ( 4 . 6 ) , 准确至 。 . 1 mg , 加人约 3 0 ml甲醇( 4 . 2 ) 完全溶解后, 转移到 1 0 0 m工 _ 的容量瓶中, 加
6、萃取溶液 ( 4 . 7 ) 稀释至刻度( 一级标准溶液贮存条件: 4 冰箱内可保存 3 个月) 。 4 . 8 . 2 二级标准溶液 将 1 0 ml一级标准溶液( 4 . 7 . 1 ) 移至 1 0 0 m工容量瓶中用萃取溶液( 4 . 7 ) 稀释至刻度 4 . 9 多酚校准溶液: 分别准确移取 1 ml , , 2 m工 、 5 ml二级标准溶液( 4 . 8 . 2 ) , 了 mL , 2 m L , 5 ml一级 标准溶液( 4 . 7 . 1 ) 至1 0 0 n i l . 容量瓶中用萃取溶液( 4 . 7 ) 稀释至刻度, 此六个标准溶液以及二级标准溶 液( 4 . 8
7、. 2 ) 为系列标准校准溶液( 多酚校准溶液应在使用前配制, 不能长时间保存) 。 YC / T 2 0 2 -2 0 0 6 5仪器 : _ ; : . : 常用实验仪器以及下述各项。 分析天平: 感量。 . 1 m g , 高效液相色谱仪: 具有柱温箱、 梯度洗脱功能、 紫外检测器和自 动进样器( 自动进样器为可选件) 。 推荐色谱柱: 2 5 0 mmX4 . 6 mm色谱柱, 固定相 C , 。 填料粒度5 K m, 水相滤膜: 。 . 4 5 K m 超声波振荡器。 6分析步骤 6 . 1 抽样 按 G B / T 5 6 0 6 . 1和GB / 丁1 9 6 1 6 抽取样品
8、6 . 2烟草样品制备 按 Y C / T 3 1 制备试样, 测定水分含量 6 . 3 测定次数 每个样品应平行测定两次。 6 . 4 样品分析 6 . 4 . 1 样 品萃取 称取 1 0 0 mg 左右样品, 准确至0 . 1 mg , 置于5 0 ml锥形瓶内, 再准确加人2 0 . 0 mL 5 0 %甲醇+水 溶液, 置于超声波振荡器( 5 . 4 ) 超声( 频率: 4 o k Hz ) 提取 2 0 m i n 。取约 2 mL萃取液经 0 . 4 5 W m的水相 滤膜过滤 。 6 . 4 . 2 高效液相色谱仪 按照仪器说明书对高效液相色谱仪进行操作。较适合的色谱条件如下:
9、 流动相 A: 水+甲醇+乙酸=8 8 +1 0 +2 ( 体积分数) 流动相 B : 水+甲醇+乙酸=1 0 +8 8 +2 ( 体积分数) 柱温: 3 0 0C 柱流量: 1 M I . / mi n 进样体积: 1 0 川 梯度: 。m i n : A: 1 0 0 0 o 1 6 . 5 mi n : A: 8 0 %, B : 2 0 % 3 0 mi n : A: 2 0 %, B : 8 0 % 检测器:检测波长: 3 4 0 n m参比波长: 4 8 0 n m 分析时间约为4 0 m i n . 典型烟草样品色谱图参见图A. 2 . 6 . 4 . 3测定 用高效液相色谱测定
10、一系列多酚校准溶液( 4 . 9 ) , 得到三种多酚的积分峰面积, 用峰面积作为纵坐 标, 多酚浓度作为横坐标分别建立三种多酚的校正曲线。对校正数据进行线性回归( r0 . 9 9 ) 。然后 测定烟草萃取样品, 从样品中多酚的峰面积计算每一个烟草萃取样品中三种多酚的浓度( m g / mL ) , 结果计算 以干基计的三种多酚的含量, 按式( 1 ) 计算: c义 2 0 - X ( 1一 w) . . . . . . . . . . . . . 。 (1) YC / T 2 0 2 -2 0 0 6 式 中: P 每克试样的多酚含量, 单位为毫克每克( mg / g ) ; c 萃取样品
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