[轻工标准]-QB 2525-2001 食品添加剂 α-葡萄糖转苷酶1.pdf
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1、分类号X4 1 备案号 9 4 8 9 -2 0 0 1 中 华 人 民 共 和 国 轻 二 二 行 业 标 准 Q B 2 5 2 5 一2 0 0 1 食 品 添 加 剂 a 一葡 萄 糖 转 普 酶 2 0 0 1 - 1 1 - 1 5 发布 2 0 0 2 - 0 5 - 0 1 实施 中国轻工业联合会发布 QB 2 5 2 5 -2 0 0 1 前言 本标准的全部技术内容为强制性。 食品 添加剂a - 葡萄 糖转 普酶是由黑曲 霉 ( A s p e r g i l l u s n i g e r ) 发 酵法生产, 经热处理、 过滤、浓缩提纯制取.供食品工 业生产作加 工助剂用。
2、 本标准由 中国轻工业联合会综 合业务部提出。 本标准由 全国食品发酵标准化中 心归口 。 本标准由 中国食品发酵工业研 究所、北京 凯赛生物技术有限公司负 责起草。 本标准主要起草人:张启先、吴玉宏、刘莲芳。 中华人民共和国轻工行业标准 食 品 添 加 剂 QB 2 5 2 5 -2 0 0 1 a-葡 萄 糖 转 昔 酶 范 围 本标准规定了食品添 加剂a - 葡萄糖转昔酶 ( F o o d a d d it i v e 一 a - G l u c o s i d a s e ) 的 技术要求、 试验方法、检验规则和标志、包装、运输、贮存。 本标准适用于由 黑曲 霉 ( A s p e
3、r g i l l a s n ig e r ) 发酵法生产, 经热处理、 过滤、浓 缩提 纯制取而得的食品添加剂a - 葡萄糖转昔酶。供食品工业生产作加工助剂用。 2 引用 标准 下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时, 所示版本均为有效。所有 标准都会被修订,使用 本标准的 各方应探 讨使用下列标准最新版本 的可能性。 G B /T 8 4 4 9 -1 9 8 7 食品 添加剂中铅的测定方法 G B / T 8 4 5 0 -1 9 8 7 食品 添加剂中砷的测定方法 G B / T 8 4 5 1 一1 9 8 7 食品 添加剂中重金属限量试 验方法
4、 G B 4 7 8 9 . 2 -1 9 9 4 食品 卫生微生物学检验 菌落总 数测定 G B 4 7 8 9 . 3 -1 9 9 4 食品 卫生微生物学检验 大肠 菌群测定 G B 4 7 8 9 . 4 -1 9 9 4 食品 卫生微生物学检验 沙门氏 菌检验 G B 4 7 8 9 . 6 -1 9 9 4 食品 卫生微生物学检验 致泻大 肠埃希氏 菌检 验 Q B / T 1 8 0 3 - 1 9 9 3工 业 酶 制 剂 通 用 试 验 方 法 3 技术要求 3 . 1 性状 本品为褐色液体。 3 . 2 理化指标 理化指标应符合表 1 的规定。 3 . 3 微生 物指标 微
5、生物指标应符合表2 的规定。 中国轻工业联合会2 0 0 1 - 1 1 - 1 5 批准2 0 0 2 - 0 5 - 0 1 实施 1 OB 2 5 2 5 -2 0 0 1 表 1 项目指标 a - 葡萄糖转普酶活力,U MIL 3 0 00 0 0 糖化酶活力, U / m L3 0 0 p H 4. 5 05 . 5 0 砷 ( A s ) , m g / k g3 铅 ( P b ) . m g / k g 5 重金属 ( 以P b 计) ,m g / k g( 3 0 表 2 项目 指标 菌落总数,c fu / M L共1 x1 了 大肠菌群,MP N / 1 0 0 m L-3
6、 0 0 0 沙门氏菌 不得检出 埃希氏大肠杆菌 不得检出 4 试验方法 本试验所 用的试剂和水,在没有其他特殊要求时,均使用分析纯 试剂和蒸馏水或相当 纯度的水。 4 . 1 a - 葡萄糖 转普酶活力的 测定 4 . 1 . 1 原理 用a - 葡萄糖转普酶作用底物a 一 甲基一 D- 葡萄糖昔生成葡萄糖,所生成的葡萄糖与含有 葡萄 糖氧化酶、过 氧化酶的 4 - 氨基安替比 林 ( 4 - A m i n o a n ti p y ri n )和酚 试剂进 行显 色反应来 定量测定。其化学反应式如下: a 一 甲 基一 D - 葡 萄 糖进 登 生令 D - 葡 萄 糖十 甲 醇 D -
7、 葡 萄 糖 一 卫 壑 鲤 些 竺 叶葡 萄 糖 酸 十 H 2 0 2 H 2 O : 十 4 - 氨 基 安 替 比 林十 酚- 丝 丝塑 V , 苯 醒 4 . 1 . 2 试 剂和溶液 a ) 0 . 1 m o V L乙 酸溶液: 将乙 酸 ( C H ; C O O H ) 6 . 0 g 溶于 水, 稀释至1 0 0 0 M L ; b ) 0 . 1 m o U L 乙 酸 钠 溶 液: 将乙 酸 钠( C H 3 C O O N a ) 8 . 2 0 g 溶 于 水. 稀 释 至1 0 0 0 M L ; c ) 0 . 0 2 m o l/ L乙酸一 乙 酸钠缓冲液 (
8、 p H 5 . 0 ) 将0 . 1 m o l/ L乙酸溶液2 0 m L 溶于水, 稀释至1 0 0 M L( 试剂A ) ; 将 0 . 1 m o l/ L乙酸钠溶液2 0 m L溶于水,稀释至 1 0 0 M L( 试剂 B ) : 将A和B混合, 调p H至5 . 0 . d ) T ri s - 磷 酸 缓 冲 液 ( p H 7 . 2 ) : 将T ri s ( 径 甲 基) 氨 基甲 烷C H 2 N C ( C H 2 0 H ) 3 l 3 6 . 3 g OB 2 5 2 5 -2 0 0 1 和二水 磷酸二氢钠 ( N a H Z P O 4 , 2 H , 0
9、) 5 0 . 0 g 溶于9 0 0 M L水, 用2 m o l/ L 盐酸溶 液调p H至 7 . 2 ,用水稀释至 1 0 0 0 M L ; e ) 0 . 4 % 4 - A ,基安替比 林溶液: 将 4 - I ,基安替比林 ( C H H t a O N a ) 2 0 0 m g溶于水, 稀 释 至5 0 M L ; f ) 5 % 苯酚溶液:将苯酚 ( Q H , O H ) 5 g 于 6 0 溶于5 0 M L水, 将溶液冷却至 室温, 用水稀 释至1 0 0 m L ; 幻 4 - 氨基安替比林一 苯酚显 色剂: 在 T ri s - 磷 酸缓冲液 ( p H7 .
10、2 ) 4 0 m L中. 加入 葡萄 糖 氧 化 酶 ( 5 m g 葡 萄 糖 氧 化 酶“ A m a n o “ 2 ) 5 5 0 单 位 和 过 氧 化 物 酶 ( 0 . 7 6 m g , 1 6 5 U / m g 的过氧化 物酶 “ A m a n o “ 2 ) 1 2 5 单 位, 再加入0 , 4 %4 - 氨基安替比林溶液I M L和5 %苯酚 溶液1 . 4 m L ,用T ri s - 磷酸缓冲液 ( 叫 7 . 2 ) 稀释至5 0 M L( 随配随用): h ) 底物溶 液: 将“ 一 甲 基葡萄搪 ( C , H ,4 0 6 ) 2 . 0 g 溶解 于
11、水5 0 M L中. 用水稀释至1 0 0 M L ( 5 0C-1 5 可稳定二星期) . 41 , 3 测定方法 4 . 1 . 3 . 1 样品溶液的 制备 用酶制剂配 制酶溶液使其0 . 5 M L 的A b s 一 A 。 介于。 . 1 5 和0 . 3 2 之间: 吸取酶制剂1 M L I 加到一个 适当 大小的 容量瓶中, 用经 冷却 的水稀释至 刻度, 混匀。 示例: 。 一 葡萄糖转普酶L “ A m a n o “ . n = 3 0 0 稀释1 m l ) 一3 0 0 tn L . 4 . 1 . 3 . 2 测定 吸取底物溶液 ( 4 . 1 .2 h ) 1 m
12、L 和0 . 0 2 m o l/ L乙 酸一 乙 酸钠缓冲液 ( p H 5 . 0 ) ( 4 .1 . 2 c ) 1 m L 加入试管 ( 1 5 m m X 1 5 0 m m)内,在 ( 4 0 土0 .5 ) 的恒温水浴箱中保温 1 0 mi n 。加入样品 稀释酶液 ( 4 . 1 .3 .1 ) 0 . 5 m L , 混匀, 于 ( 4 0 1 0 . 5 )的恒 温水浴箱中 准确保温6 0 m i n 后, 将试管转移至沸水浴中 加热 5 m in ,然后 用流 水快速冷 却。 冷却后, 吸此溶液 0 . 1 M L到试 管中, 并 加入4 - 氨基安替比 林一 苯酚显色
13、剂( 4 . 1 .2 g ) 3 m L , 混匀。 将此试管 放入 ( 4 0 1 0 . 5 ) 的 恒温水浴中, 保温2 0 m i n ,测定5 0 0 n m处的吸光度A 6 o 。 空白 对照:吸 0 . 0 2 m o U L乙酸一 乙 酸钠缓冲 液 ( p H 5 . 0 ) ( 4 . 1 . 2 c ) 1 m L和样品稀释酶 液( 4 . 1 . 3 . 1 ) 0 . 5 m L加入试管( 1 5 m m X 1 5 0 m m ) 内, 混 匀。 将试管转移至 沸水浴中 加热s m i n , 然后 用流水快速冷却。 冷却后,加 入底物溶液 ( 4 . 1 . 2
14、h ) 1 m L , 混匀。吸 此溶液 0 . 1 M L至 空 试管 ( 1 5 m m x 1 5 0 m m)内, 加入 4 - 氨基安替比 林一 苯酚显色剂 ( 4 .1 .2 g ) 3 m l ,混匀。 将此 试管放入 ( 4 0 1 0 . 5 )的 恒温水浴中, 保温2 0 m i n , 测定5 0 0 n m处的吸光度A o 。 精 确称取1 0 5 下干燥6 h 的 葡萄糖( C 6 H ,= 0 6 ) 1 . 0 0 0 g , 溶于1 0 0 M L水中, 分 别取1 M L , 2 m L , 3 m L , 4 m L , 5 m L , 用水 定 容 至1
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