β-淀粉样蛋白和载脂蛋白E4升高神经元胞内游离钙.pdf
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1、!淀粉样蛋白和载脂蛋白 “# 升高神经元胞内游离钙! 田映红姚志彬周丽华谢瑶 (中山医科大学解剖学教研室脑研究室, 广州!“#$%) , 实验组分别加入 0!K,8O) 的主要成分, 由 +% 6 (+ 个氨基酸组 成, 分子量大约为 ( H9, 来自其前体蛋白 0OO 的裂 解。0!在 脑 内 的 产 生 和 沉 积 与 老 年 性 痴 呆 (0FPQK?K1 (WX3Y 公司) ; :; (.*ZQK 公司) ; 1W0 (东京化成工业株式会社) ; 小牛血清 (杭州四 季青生物工程公司) ; 其它试剂均为国产分析纯。 $T%神经元悬液的制备 $ 新生 # 6 + 7 的 89 大 鼠 (
2、清洁级, 中山医科大学动物中心提供) ,$ 只, 剥 离全脑, 立即置于冰 9Q4AM 液 (?*F C G “:)43F “+-; H3F !; )4) 洗一次, 最后悬浮于 *+ 液 中。“4? 台盼蓝排斥试验检查, 细胞成活率达 “?以上。 !A“#$%$0C!D E5 (终浓度 )!%,- . ( # ) , #“ 6. ( #牛血 清白蛋白 (终浓度 “4#?) , 2=F恒温振荡 “ %$0C!。 将负载上 B;$0C! 的细胞悬液分为 组, 分别是 对照组, E“!) G 2)组, E9, I 组, E“!) G 2)J E9, I 组, KLC)“ 型荧光双波长分光光度计 (日
3、本岛津) 测荧 光强度, 激发波长为 2“ 和 2M“ %, 发射波长为 )“) %, 峡缝均为 #“ %, 激发波长变换时间 ! :。实验 组经过 # %$0C! 被 10! J完全饱和时 (加入 !“? R$0C! 完全游离时 (加入 )“!%,- . ( # ITRE, !“ %- . ( #) 的 L2“D L2M“ 值; L:和 L“分别为 B;$0C! 与 10! J结合达饱和 状态时及 B;$0C! 完全游离时, 在 2M“ % 波长测得的 荧光强度; !P: B;$0C! 与 10! J结合的平衡解离常数, 2=F时为 ! %,- . ( #。在计算 10! J 3/ $) ,
4、3?:,“:3 “: -“) ,%!/0 1 20$“((2A 3/ $) ,3?:,“:3 “: -“) ,%!/0 1 20$“((2A ( 去极化诱导的海马 及皮层神经元 ;3/ ?; $I (.) !“# $% “ ! ! “#“$,! ! “#“% “# “.) 6“.,2-:$%!/0 1 $0及 %. 45 对海马和皮层神经元膜流 动性的影响海马和皮层神经元对照组的频移线宽 #值分别为 3“#?% 4 $#7, 3“#A1 4 $#%$, 加入 % “ !-+ . / % 0“1$ 2 3$作用 $ -9( 后, 海马和皮层神经元 对照组的频移线宽#分别降为 17#66 4 ?#
5、AA, 1#“% 4 $#7“ (! ! “#“$) ; 加入 “#$!-+ . / % 0: B? 作用 $ -9( 后, 海马和皮层神经元对照组的频移线宽# 分别降为 1A#66 4 $#“1 (! ! “#“%) , 17#67 4 ?#3% (! ! “#“$) , 表明 0“1$ 2 3$和 0: B? 均能降低海马和皮 层神经元膜流动性。 $讨论 免疫组化研究结果显示, 老年性痴呆病人脑中 的老年斑有 0“和 0:B 沉积, 提示 0“和 0:B 与 老年性痴呆的病理过程密切相关, 可能有一定的神 经毒性。本实验室以往的研究结果表明: 老化的 0“3% 2 3$对培养的海马和隔区神
6、经元的存活和突起 生长均有明显的抑制作用, 0: B? 对神经元的存活 和生长的生物效应不明显, 但 0: B? 和 0“3% 2 3$共 同作用时则能加强 0“3% 2 3$对海马和隔区神经元的 胞体和突起生长的毒性作用, 提示 0: B? 可能对 0“3% 2 3$神经毒性效应有协同作用 ?, $ 。但 0“及 0: B? 神经毒性的作用机制如何目前还不很清楚, 本研究则试图通过研究 0“1$ 2 3$、 0: B? 及其共同 作用对神经元 C;1 D 9的影响以及 0“1$ 2 3$、 0: B? 对神经元膜流动性的影响来探讨两者的神经毒性机 制。 本研究的结果发现: 未经老化的 0“1
7、$ 2 3$和 0: B? 单独作用及其共同作用不仅升高急性分离的新 生 EF 大鼠海马和皮层神经元静息 C;1 D 9, 并且均 能增强 GC+ 去极化诱导的 C;1 D 9 增加, 与 H;*)I -;(、 J;)=(、 J5.2? 6:4.;.A2;8 36B; IJ,J24KBL6:4 M8 C:4.;4.-L2B $6? 6:4.5.2?!-4.;:26:4:N:4K$5 O ;$BLF2626 6:4.-:- R/,M;:N:6 VI8 /;L$6.5 26L2O2;K CWG5.2? 6:4.;.A2B2;8 *#.“/$0 *#.1/2- ,$- 3.004%, !DD0;“$
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