【SN商检标准大全】SNT 0184.3-2008 进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法 免疫磁珠法.pdf
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1、书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口食品中单核细胞增生 李斯特氏菌检测方法 第部分: 免疫磁珠法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犔 犻 狊 狋 犲 狉 犻 犪犿 狅 狀 狅 犮 狔 狋 狅 犵 犲 狀 犲 狊犻 狀犳 狅 狅 犱犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犘 犪 狉 狋 :犐 犿犿 狌 狀 狅 犿 犪 犵 狀 犲 狋 犻 犮犫 犲 犪 犱 狊犪 狊 狊 犪 狔 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 免费标准网( w w w . f r e e
2、 b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 书书书 前 言 本部分的附录 、 附录均为规范性附录。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位: 中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。 本部分主要起草人: 吴斌、 李振荣、 胡传伟、 王玉萍、 蒋维旗。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n
3、 e t ) 无需注册 即可下载 进出口食品中单核细胞增生 李斯特氏菌检测方法 第部分: 免疫磁珠法 范围 的本部分规定了进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌取样、 制样和免疫磁珠检测 方法。 本部分适用于进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本部分, 然而, 鼓励根据本部分达成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本部分。 实验室生物安全通用要求 进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方
4、法 方法概述 将直径 具有磁性的微珠的表面化学修饰, 并与李斯特氏菌特异性抗体结合, 制成 免疫磁珠, 它能与食品中李斯特氏菌抗原结合, 从而检出食品中的李斯特氏菌。样品经 增 菌后, 分别取 增菌液和 免疫磁珠加入带盖塑料管中, 在磁板背景下混合, 如果有李斯特氏 菌抗原存在, 免疫磁珠就会将其捕获, 然后利用磁性将免疫磁珠聚集, 经清洗后接种到显色培养基和任 选一种培养基( 或 琼脂) , 对于选择性分离平板上典型李斯特氏菌菌落进行确认, 最终 通过系列试验确定是否存在单核细胞增生李斯特氏菌。 设备和器具 培养箱: ; 。 水浴锅: 。 微量移液器: , , 。 刻度移液管: 、 。 灭菌
5、玻璃器具: 量筒、 三角烧瓶、 培养皿( 直径 ) 、 试管。 灭菌管( 管) : 。 抗李斯特氏菌免疫磁珠: 该磁珠可以通过商业途径获得。应准确地按照生产商的说明书进行 操作。 旋涡混合器。 带有磁架的磁性分离器。 培养基和试剂 除另有规定外, 所用试剂均为分析纯, 水为蒸馏水。 胰酪大豆肉汤( ) : 见第 章。 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 胰酪大豆琼脂( ) : 见第 章。 肉汤增菌液( ,
6、) : 见第 章。 琼脂: 见第 章。 琼脂: 见第 章。 显色培养基。 注:本部分使用的培养基为 公司产品, 其他公司的等效显色培养基应验证后使用。 磷酸盐缓冲溶液( ) : 见第 章。 参考菌株: 单核细胞增生李斯特氏菌( ) 。 检验步骤 样品制备 在均质袋中加入 样品, 再加入 增菌肉汤( 见 ) , 培养 。 增菌 取 中制备好的样品, 加到 增菌液( 见 ) 中, 培养 后, 进行免 疫磁珠分离。 免疫磁珠分离( 犐 犕 犛) 免疫捕获 混合 增菌培养液, 沉淀所有的粗糙食物残渣, 从增菌培养液中移取 上层液体( 要尽可能 避免移取到食物颗粒和脂肪颗粒) 加入 管( 见 ) 中,
7、加 准备好的免疫磁珠( 见 ) 。 在旋涡混合器( 见 ) 上混合该悬液。 分离 将 管固定在磁架( 见 ) 的管孔中, 轻缓摆动磁架次次, 使免疫磁珠聚集到 磁极。小心地打开磁架上的 管管盖, 从磁极对面一侧慢慢吸出液体, 注意不要接触管壁上的 磁珠, 每一个样品换一次枪头; 加 灭菌的 ( 见 ) , 并重新盖好盖子, 将磁极从支架上移走, 轻缓摆动磁架次次, 使管内各成分混合, 然后重新将磁极放回到支架上。重复该清洗步骤几 次。将离心管从磁性分离器上移开, 并加 灭菌的 ( 见 ) 到管中, 重悬磁珠。如果实验室 没有磁性分离器, 也可以用手摇代替。 分离培养 分离培养 吸取 免疫磁珠悬
8、液, 加到显色培 养 基 ( 见 ) 及 任 一 选 择 性 培 养 基 ( 见 ) 、 ( 见 ) 琼脂平板上, 用无菌接种环划线, 培养 。 筛选 李斯特氏菌在 显色培养基上菌落为蓝色, 且在其周围形成一个晕环。李斯特氏菌在 琼脂平板上生长 后菌落呈现黑色, 直径为, 在其周围形成一个黑色环, 培养 , 菌落 仍呈黑色, 直径, 除在菌落周围有一环外, 在菌落中心部位的深层也形成黑点。李斯特氏 菌在 琼脂平板上与在 琼脂平板上菌落相似。在 显色培养基及 或 琼脂平板上挑取个或更多可疑菌落, 接种于 琼脂( 见 ) 平板上, 纯培养后进 鉴定。 鉴定和确认 单核细胞增生李斯特氏菌的鉴定和确认
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