一种新的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2同源物的分离纯化及其对HEP3B细胞基因谱的影响.pdf
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1、收稿日期:2005_09_30 基金项目:广东省重点课题(2005B30101006) Supported by Key Research Project of Guangdong Province (2005B 30101006) 作者简介:马安德(1961_),男,在读博士研究生,副教授,电话:020_ 61648173,E_mail: 通讯作者:吴曙光,电话:020_61648530,E_mail: 一种新的蝮蛇蛇毒磷脂酶 P2 同源物的分离纯化及其对 Qep3B 细胞基因 谱的影响 马安德 1,吴少瑜2,张嘉杰2,李志琴2,徐 伟2,文晓芸2,余 乐2,吴曙光2(南方医科大学1 分析
2、测试中心,2药学 院,广东 广州510515) 摘要:目的 从中国蝮蛇蛇毒中分离纯化出一种新的磷脂酶P2(PRP2)同源物,并研究其对Qep3B细胞基因谱的影响。 方法 用S18反相高效液相层析从蛇毒粗毒中分离纯化出PRP2同源物,并检测其纯度。 用电喷雾质谱仪测定PRP2同 源物分子量。 体外培养Qep3B细胞,以139 !gTml PRP2同源物处理12 h,应用基因芯片检测基因表达的改变。 结果 从 蛇毒粗毒中分离纯化出一种新的PRP2同源物,纯度为97.2U,相对分子质量为13 900。139 !gTml PRP2同源物处理 Qep3B细胞12 h 后, 19个基因表达下调,20个基因
3、表达上调。 表达改变的基因按功能分主要为以下6类:细胞周期控 制和VPW损伤修复类、细胞调亡和衰老类信号转导分子和转录因子、细胞黏附类、血管生成类以及肿瘤细胞入侵和转 移类。 结论PRP2同源物作用于Qep3B细胞后,可影响细胞多种基因的表达,表达改变的基因主要参与肿瘤细胞的生 长和转移。 本研究为进一步深入研究PRP2对肿瘤细胞的作用机制提供线索和依据。 关键词:蛇毒,蝮蛇;PRP2同源物;Qep3B细胞;基因芯片 中图分类号:R996 文献标识码:P 文章编号:1673_4254(2006)01_0075_05 !“#$%$+-11/ XP Pn_de1Y Z Shao_yu2Y QPWG
4、 ia_jie2Y R hi_in2Y Zei2Y ZEW iao_yun2Y a Re2Y Z Shu_guang2 1nstrumental Pnalysis and Research SenterY 2School of Pharmacological SciencesY Southern Xedical niversityY Guangbhou 510515Y Shina 2?/(6 B: The genes of Hep3B cells exposed to 139 g/ml PLA2 homologue for 12 h and their measurement on the m
5、icroarray 图5 基因在芯片上的表达 Fig.5 Expression of genes on the mi roarray A: Control Hep3B cells. B: Hep3B cells with 139 g/ml PLA2 homologue exposure for 12 h 图3 组分5质谱图 Fig.3 Mass spe trometry of the fra tion 5 whi h has a relative mole ular mass of 13 900 as measured by Mi romass KL ProteinSequenceSimila
6、ritySpecies 5th fractionHLLQFRKMIKKMTKK(1_15)Agkistrodon PLA2HLLQFRKMIKKMTGK(1_15)14/15(93%) Agkistrodon PLA2HLLQFRKMIKKMTGK(1_15)14/15(93%) Gloydius blomhoffi PLA2HLLQFRKMIKKMTGK(17_31)14/15(93%) Trimeresurus 表1 蛇毒蛋白第5组分N端1_15个氨基酸与其他已知蛇毒 蛋白N端1_15个氨基酸序列的比较 Mab.1 Nomparison of the 15 amino a ids at t
7、he O_terminal between the 5th omponent and the Pnown proteins from snaPe venom 2.3 组分5N末端序列分析 组分5N末端序列分析结果为HLLQFRKMIKK MTKK, 通过GenBank的protein_protein BLAST软 件进行同源性分析,结果表明,组分5N端的15个氨 基酸与已知的其他蛇毒PLA2具有较高的同源性,见 表1,因此初步推测该组分为PLA2同源物。 2.4 PLA2同源物对Hep3B细胞基因谱的影响 选择的SuperArray基因芯片包括112个基因, 这些基因的名称与测定的数值见图4和
8、图5。 图中的 方块颜色越深,表示基因表达水平也越高。 在112个 基因中,表达下调的基因有19个,见表2,按基因功 能分为以下6 类( 1)细胞周期控制和DAN损伤修复 类,FANCB, Cyclin E1, p16INK4,CHK2;(2 )细胞调亡 和衰老类,Apaf_1, Bax, Bck_x;(3)信号转导分子和转 录因子类,IKBA, RasGAP, c_Src(4)细胞黏附类,I_ CAM_1, Integrin a1, LFA1b, Integrin a4;(5)血管生成 类, HGF, Tie_2, TNFA;(6)肿瘤细胞入侵和转移类, Collagenase_1, MMP
9、_2。 表达上调的基因有20个,见 表3,按基因功能也可分为以下6类(1)细胞周期控 制和DAN损伤修复类,p27Kip1;(2)细胞调亡和衰老 类, Bcl_2, CASPER, Fas;(3)信号转导分子和转录因 子类,c_Ets2, MEK1, p38MAPK, KBF1, p85 alpha;(4) 细胞黏附类,CD44, Integrin a6, Integrin aV;(5)血管生 成类, FGF2, IFNA1, ALK_5, TSP1, Thrombospondin2; (6)肿瘤细胞入侵和转移类,MTS1,PAI_2。 3 讨论 作者首次从中国蝮蛇蛇毒中分离提纯出一种 PLA
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