七叶皂苷精氨酸盐抗炎作用的量效、时效关系及对NO合成的影响.pdf
《七叶皂苷精氨酸盐抗炎作用的量效、时效关系及对NO合成的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《七叶皂苷精氨酸盐抗炎作用的量效、时效关系及对NO合成的影响.pdf(4页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、6 7 2 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8M a y ;2 4 ( 5 ) :6 7 2 - 5 七叶皂苷精氨酸盐抗炎作用的量效、 时效关系及对N O 合成的影响 孙芳1 ,傅风华1 2 ,何杰2 ,董秋菊2 ,李振2 ,苟海涛2 ( 1 烟台大学药学院,山东烟台2 6 4 0 0 5 ;2 山东省天然药物工程技术研究中心,山东烟台2 6 4 0 0 3 ) 中国图书分类号:R - 3 3 2 ;R2 8 4 1 ;R3 2 2 4 9 2 ;R9 1 4 3 ; R9 7 1 1
2、文献标识码:A 文章编号:1 0 0 1 1 9 7 8 ( 2 0 0 8 ) 0 5 0 6 7 2 0 4 摘要:目的研究七叶皂苷精氨酸盐( A e s e i n e - A r g i n i n e , A C A ) 抗炎作用的量效关系及时效关系,并探讨A C A 对脂多 糖( L P S ) 诱导的巨噬细胞一氧化氮( N O ) 合成的影响。方法 7 0 只6 小鼠随机分成7 组,即生理盐水组、双氯芬酸钠 ( 1 0I I l g k g 。) 组、A C A ( 0 5 、1 、2 、4 和8m g k g “) 组,采用 小鼠腹腔毛细血管通透性模型,以小鼠腹腔渗出液中伊文思
3、 兰的渗出量为指标,观察A C A 抗炎作用的量效关系;9 0 只6 小鼠随机分成9 组,即生理盐水组、双氯芬酸钠( 1 0m g k g 。1 ) 组及A C A ( 2m g k 9 1 1 ) 给药,1 、2 、4 、8 、1 2 、1 6 和2 4h 组,采用小鼠腹腔毛细血管通透性模型,以小鼠腹腔渗出液 中伊文思兰的渗出量为指标,观察A C A 抗炎作用的时效关 系;用脂多糖( L P S ) 作为巨噬细胞( R A W 2 6 4 7 ) 的N O 合成 诱导剂,加入不同浓度的A C A ,培养后取上清液,用G r i e s s 试 剂测定N O 产生量。结果A C A 的2 ,4
4、 和8m g k g 。3 个 剂量皆能明显降低腹腔渗出液中伊文思兰的渗出量,且具有 收稿日期:2 0 0 7 1 1 0 r 7 ,修回日期:2 0 0 8 0 2 2 4 基金项目:国家自然科学基金资助项目( N o3 0 7 7 2 7 6 0 ) 作者简介:孙芳( 1 9 7 9 一) ,女,硕士生,T e l :0 5 3 5 - 6 7 0 6 0 3 0 - 8 0 0 5 ,E m a i l :s u n f a n 9 1 6 3 1 2 6 c o r n ; 傅风华( 1 9 6 3 一) ,男,硕士,教授,研究方向:乙酰胆碱酯 酶( A C h E ) 及其抑制剂的药
5、理学与毒理学,通讯作者,T e l : 0 5 3 5 - 6 7 0 6 0 6 0 E m a i l :f u f e n g h u a s o h u c o r n 明显的剂量依赖关系;A C A 在给药后4 ,8 ,1 2 ,1 6 和2 4h 能 够明显降低腹腔渗出液中伊文思兰的渗出量;L P S 在lm g - L “浓度作用于R A W2 6 4 7 细胞,可诱导大量N O 合成。 A C A 对L P S 诱导的N O 合成有明显的抑制作用,其抑制作用 具有明显的量效关系。结论A C A 的抗炎作用在4h 起效, 药效可持续2 4h ,且具有明显的剂量依赖性;A C A
6、降低L P S 诱导的炎性因子N O 的产生,可能是A C A 减轻炎症反应机 制之一。 关键词:七叶皂苷精氨酸盐;抗炎作用;时效关系;量效关系; N 0 七叶皂苷精氨酸盐( A e s e i n e A r g i n i n e ,A C A ) 是 七叶树科欧马栗或中药娑罗子的主要活性成分七叶 皂苷与精氨酸反应生成的盐,属于三萜皂苷类衍生 物。近年来文献报道七叶皂苷具有抗炎、抗水肿、增 强静脉张力、抑制胃排空、抑制胃酸分泌、清除活性 氧和协同抗肿瘤作用。J ,但关于A C A 的抗炎作用 及其机制尚未见系统报道。本实验旨在对A C A 的 抗炎作用的量效、时效关系进行研究,并对其机制进
7、 行初步探讨。 1 材料与方法 1 1 动物1 6 0 只6 昆明种小鼠,体重1 8 2 2g , 山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提 I C A M 一1 、V C A M ,1a n dV E G Fe x c i t e db yO X L D Li n U 9 3 7c e l l M e t h o t i s D i f f e r e n t i a t e dU 9 3 7c e l l sw e r e c u l t u r e di nv i t r o e x c i t e db yo x L D La n di n t e r v e n e db y d
8、 i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fT S G t h e nt h el e v e lo fS O D a n dM D Aw e r ed e t e r m i n e d I C A M l 、V C A M 1a n d V E G Fp r o t e i nw e r ed e t e r m i n e db yW e s t e r nb l o ta n d I C A M 1m R N Aa n dV C A M lm R N Aw e r em e a s u r e db y r e v e r s et r
9、a n s c r i p t a s e p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nfR T P C R ) R e s u l t sI nc o m p a r i s o nw i t ht h o s eo ft h ec o n t r 0 1 t h el e v e lo fS O Dr e m a r k a b l yd e c r e a s e da n dt h e l e v e lo fM D Ar e m a r k a b l yi n c r e a s e di nm o d e lg r o u p ; t h
10、 el e v e lo fS O Di n c r e a s e dm a r k e d l ya n dt h el e v e lo f M D Ad e c r e a s e dm a r k e d l yi nS i m v a s t a t i ng r o u pa n d T S G1 2 0m g L 。g r o u p ( P 0 0 5 ) C o m p a r e dw i t h t h a to ft h ec o n t r o l ,t h ee x p r e s s i o no fm R N Aa n dp r o t e i no fI C
11、 A M 一1a n dV C A M 一1 s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d , a n dt h ee x p r e s s i o no fp r o t e i no fV E G Fi nm o d e lg r o u p s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e di nm o d e lg r o u p ( P 0 0 5 ) ;t h e e x p r e s s i o no fm R N Aa n dp r o t e i n o fI C A M 一1a n d V C A
12、 M - 1 ,a n dt h ee x p r e s s i o no fV E G Fp r o t e i nw e r er e d u c e dm a r k e d l yi nS i m v a s t a t i ng r o u pa n dT S G1 2 0m g L 。1g r o u p ( P 0 0 5 ) C o n c l u s i o nT h eT S Gh a d a n t i - o x y d a t i o ne f f e c ta n di n h i b i t e d t h ee x c r e t i o no fa d h
13、e s i o nm o l e c u l e si nm a c r o p h a g e K e yw o r d s :t e t r a h y d r o x y s t i l b e n eg l u c o s i d e ;O X L D L ; U 9 3 7c e l l ;I C A M 1 ;V C A M 1 ;V E G F 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8M a y ;2 4 ( 5 ) 。6 7 3 供,合格证号:S Y X K ( 鲁
14、) 2 0 0 3 0 0 2 0 。动物给药前在 饲养观察室内观察3d ,动物随机分组,平均每笼1 0 只群养,室温2 0 2 5 ,相对湿度为3 0 一 7 0 ,光暗周期为1 2h 。 1 2 药物和试剂A C A 由山东绿叶制药有限公司 提供,批号:2 0 0 4 1 0 0 4 ;双氯芬酸钠注射液为重庆莱 美药业有限公司产品,批号:2 0 0 5 0 5 0 8 ;冰醋酸为济 南试剂总厂产品,批号:2 0 0 3 1 0 2 4 ;伊文思兰( E v a n s b l u e ) 为国药集团化学试剂有限公司( 进口分装) 产 品,批号:F 2 0 0 4 0 2 1 3 ;脂多糖(
15、 来源于E s c h e r i c h i ac o l i 0 1 1 1 :B 4 ) 购自美国S i g m a 公司;R A W 2 6 4 7 细胞为 鼠性巨噬细胞系,购自中国医学科学院药物研究所 药理室;G r i e s s 试剂( 使用前将磺胺与萘乙二胺等体 积混合即得) 。 1 3 仪器酶标仪( B i o T E KS y n e r g yH T ,U S A ) , T G L 1 6 G 型台式高速离心机( 上海医用分析仪器 厂) ,A R A 5 2 0 型电子精密天平( A d v e n t u r e r ) ,C 0 2 培 养箱( F o r m a3
16、 1 1 0 ,U S A ) ,超净工作台( B C N 一1 3 6 0 ,哈 尔滨东联) ,倒置显微镜( N i k o nT E - 2 0 0 0 ) ,细胞培养 瓶( C o s t a r ,U S A ) ,9 6 孔细胞培养板( C o s t a r ,U S A ) 。 1 4 方法 1 4 1A C A 抗炎作用的量效关系研究 昆明种小 鼠,6 ,体重1 8 2 2g ,7 0 只。随机分为7 组,即生 理盐水组、双氯芬酸钠组( 1 0m g k g 以) 和A C A 不 同剂量组( 0 5 ,1 ,2 ,4 ,8m g k g 。1 ) 。各组尾静脉 给药,双氯芬酸
17、钠注射液组于给药后2h ,其他各组 给药后1 2h ,尾静脉注射质量分数为0 0 1 伊文斯 兰( O 4n d 只) ,同时腹腔注射体积分数为0 0 0 7 冰 醋酸( 0 2m l 只) ,2 0m i n 后颈椎脱臼处死,并于小 鼠腹腔注入5l I l l 生理盐水,抽取腹腔液,3 0 0 0r m i n 一离心5m i n ,取上清液,用酶标仪在5 9 0n m 波 长处测定吸光度值,比较各组差异,按下式计算抑制 率,进行统计学t 检验哺1 。 抑制率= ( 对照组伊文斯兰渗出量一给药组伊文斯兰渗 出量) 对照组伊文斯兰渗出量1 0 0 。 1 4 2A C A 抗炎作用的时效关系研
18、究 昆明种小 鼠,6 ,体重1 8 2 2g ,9 0 只。随机分为9 组,即生 理盐水组、双氯芬酸钠组( 1 0m g k g 。1 ) 、A C A ( 2m g k g “) 给药1 ,2 ,4 ,8 ,1 2 ,1 6 和2 4h 组。各组尾静 脉给药,生理盐水组和双氯芬酸钠注射液组于给药 后2h ,受试药组于给药后1 ,2 ,4 ,8 ,1 2 ,1 6 和2 4h , 尾静脉注射质量分数为0 0 1 伊文斯兰( 0 4n d 只) ,同时腹腔注射体积分数为0 0 0 7 冰醋酸( 0 2 m l 只) ,2 0m i n 后颈椎脱臼处死,并于小鼠腹腔注 入5I I l l 生理盐水
19、,抽取腹腔液,3 0 0 0r m i n “离心 5m i n ,取上清液,用酶标仪在5 9 0a m 波长处测定吸 光度值,比较各组差异,进行统计学t 检验,按下式 计算抑制率。 抑制率= ( 对照组伊文斯兰渗出量一给药组伊文斯兰渗 出量) 对照组伊文斯兰渗出量1 0 0 。 1 4 3 A C A 对L P S 诱导的鼠性巨噬细胞系 R A W 2 6 4 7 细胞N O 合成的影响 1 4 3 1 巨噬细胞培养及N O 诱导R A W 2 6 4 7 细胞为鼠性巨噬细胞系,用R P M I l 6 4 0 完全培养基 传代培养,实验时用0 2 5 胰酶消化,收集细胞,用 R P M l
20、 l 6 4 0 培养液洗涤,然后将细胞浓度调成1 1 0 9 L ,加入到9 6 孔培养板,每孔0 1m l ,于5 C 0 2 和3 7 条件下培养1h ,然后加入L P S2m ( 控 制其在孔中的终浓度为1m g L 一) ,R P M I1 6 4 0 溶 解试药1 0 0p 1 ,于C O :孵化( 3 7 ) 中培养2 4h 。吸 取培养上清液,测定N O 的代谢产物亚硝酸盐浓度。 1 4 3 2N O 测定 样品1 0 0 山加入到9 6 孔板 中,然后加入G r i e s s 试剂( S u f f a n i l a m i d e1 ,N 一1 一 n a p h t
21、h y l e t h y l n e d i a m i n e 2 H C l0 1 ,H 3 P 0 42 5 ) 1 0 0 斗l 与之混匀,室温避光静置1 0m i n ,用酶标仪于 5 4 0n m 波长处测吸光度值,用亚硝酸钠绘制标准曲 线,计算样品中的N O 含量一o 。 1 5 统计学分析所有数据均以菇s 表示,组间 比较采用t 检验。 2 结果 2 1 A C A 抗炎作用的量效关系研究结果显示 ( T a b1 ) ,与生理盐水组比较,A C A 在2 ,4 ,8m g k g 一剂量组能明显降低腹腔渗出液中伊文思兰的渗 出量( P 0 0 1 ) 。 2 2A C A
22、抗炎作用的时效关系研究 结果显示 ( T a b2 ) ,与生理盐水组比较,A C A 给药4 ,8 ,1 2 ,1 6 和2 4h 组能够明显降低腹腔渗出液中伊文思兰的 渗出量( P 0 0 1 ) 。 T a b1T h ed o s e - e f f e c tr e l a t i o n s h i pO n a n t i - i n f l a m m a t i o no fA C A ( x 5 = 1 0 ) D o s e I n h i b i t i o n G r o u p 0D ! 咝:虹!堡型丝 C o n t r o l1 00 8 0 0 2 0一 D
23、i e l o f e n a cs o d i u m 1 00 5 l 士0 1 2 3 6 4 A C AO 50 7 0 0 1 01 1 7 l0 6 7 0 1 01 6 O 20 5 1 士0 1 2 3 5 9 40 4 9 0 1 33 8 3 80 4 8 0 0 8 3 9 9 万方数据 6 7 4 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8M a y ;2 4 ( 5 ) T a b2T h e m e - e f f e c tr e l a t i o n s h
24、i po n a n t i - i n f l a m m a t i o no fA C A ( 互4 - j ,n = 1 0 ) + P 0 0 5 + P 0 0 1 c o n t r o l 2 3 A C A 对L P S 诱导的鼠性巨噬细胞系 R A W 2 6 4 7 细胞N O 合成的影响用S R B 法证明, 当A C A 浓度等于或低于2 0m g L 一1 时,对巨噬细 胞无毒性作用,故试验中所用的A C A 浓度2 0m g L 。对照孔的细胞培养上清液中未测到明显的 N O 产生,L P S1 0m g L 。1 作用于R A W 2 6 4 7 细胞, 对其N
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 皂苷 精氨酸 盐抗炎 作用 时效 关系 NO 合成 影响
链接地址:https://www.31doc.com/p-3697218.html