三种甾体皂苷元对心肌细胞M受体的影响.pdf
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1、三种甾体皂苷元对心肌细胞 M 受体的影响 包照日格图1,胡雅儿2,夏宗勤2,易宁育2 (1. 云南中医学院中药系, 云南 昆明 650200; 2. 上海第二医科大学细胞调控研究室, 上海 200025) 收稿日期: 2005 -01 -19, 修回日期: 2005 -02 -14 作者简介: 包照日格图 (1957 - ) , 男, 博士, 副教授, 硕士生导师, 研究方 向: 临 床 中 药 学, Tel: 0871-6960307, Fax: 0871- 6212252, E-mail: rigdan126. com 中国图书分类号: R-332; R 284. 1; R 322. 11
2、; R 339. 38; R 392. 11; R 977. 9 文献标识码: A 文章编号: 1001 -1978 (2005) 09 -1140 -03 摘要: 目的 观察 3 种甾体皂苷元对大鼠心肌细胞自然减少 的 M 胆碱受体的调节作用。方法 培养大鼠原代心肌细 胞, 观察其 M-胆碱受体数量随培养时间变化情况; 知母皂苷 元 (ZMS) , 其 C-25 甲基立体异构体 (XMS) 和薯蓣皂苷元 (DIO) 的终浓度分别为 10 -7, 10-6, 10-5 molL -1, 培养 d 12 开始给药, 连续 4 d。放射配基结合分析 M 受体的数量。结 果 心肌细胞 M 受体数时相
3、曲线显示, 培养心肌细胞 M 受 体数在培养时间的 d 10 开始下降,到 d 16 达低水平。放射 配基结合分析表明 DIO 未呈现 M 受体上调作用;ZMS 和 XMS 均显示明显的对 M 受体的上调作用, 并且呈现浓度依 赖性。XMS 的作用强度比 ZMS 更强, 即 XMS 在浓度为 10 -7, 10-6, 10-5 molL -1时都显示对 M 受体显著的上调作 用 (P 0. 05) , 见 Tab 1。 Tab 1 The effect of DIO on muscarinic cholinergic receptors of rat myocardiac cells cult
4、ured d16 (-x s) Group Number of cases RT / pmolg -1 Pro t-test Control6190 53.7 DIO/10 -7 molL -1 6247.5 34.62 vs 1 P 0.05 DIO/10 -6 molL -1 6237.7 39.33 vs 1 P 0.05 DIO/10 -5 molL -1 6224.5 32.44 vs 1 P 0.05 2. 3 3 种浓度 ZMS 对培养 16 d 心肌细胞 M 受体 影响 心肌细胞培养时间,分组情况及 ZMS 给药 剂量和时间同上, 单点法测定心肌细胞 M 受体 RT 值。结果表
5、明: ZMS 对长期培养心肌细胞自然减少 的 M 受体数有明显的上调作用, 这一作用呈现浓度 依赖性。与对照组相比较, ZMS 10 -7、 10-6 mol L -1两组的 RT 值升高不明显 (P 0. 05, P 0. 05) ; ZMS 10 -5 molL -1组心肌细胞 M 受体数高于对照 组 (P 0. 01) , 结果见 Tab 2。 2. 4 3 种浓度 XMS 对培养 16 d 心肌细胞 M 受体 的影响 心肌细胞培养时间,分组情况, XMS 给药 组给药浓度和给药时间同上。培养 d 16 收集细胞, 用单点法测定心肌细胞 M 受体 RT 值实验结果显 示, 与对照组相比,
6、 XMS 10 -7、 10-6和 10-5 molL -1 3 个浓度组心肌细胞 M 受体 RT 值均明显提高。 XMS 的这一作用亦表现为浓度依赖性, 即 XMS 10 -7 molL -1组 RT 值升高较明显 (P 0. 05) ; XMS 10 -6 molL -1组 RT 值升得更高 (P 0. 01) ; XMS 10 -5 molL -1组 RT 值最高 (P 0. 01) 。随着 XMS 浓度的增加,用药组的 RT 值呈梯度上升,结果见 Tab 3。 Tab 2 The effect of ZMS on muscarinic cholinergic receptors of
7、rat myocardiac cells cultured d16(-x s) GroupNumber of casesRT/ pmolg-1Pro Control6188. 8 44. 4 ZMS/10 -7 molL -1 6238. 3 41. 1 ZMS/10 -6 molL -1 6205. 7 24. 9 ZMS/10 -5 molL -1 6313. 7 84. 9* *P 0. 01 vs control Tab 3 The effect of XMS on muscarinic cholinergic receptors of rat myocardiac cells cul
8、tured d16(-x s) GroupNumber of casesRT/ pmolg-1Pro Control6197. 5 44. 7 XMS/10 -7 molL -1 6269. 5 30. 6* XMS/10 -6 molL -1 6289. 8 66. 9* XMS/10 -5 molL -1 6317. 2 67. 4* *P 0. 05,*P 0. 01 vs control 3 讨论 离体培养的心肌细胞 M 受体数随着培养时间 的延长,经历逐渐上升, 在高水平上持续一段时间, 再逐渐下降的过程。Galper 等 11研究心肌细胞的 特性, 发现 M 受体数在 d 4 到
9、d 8 保持稳定。Lane 等 9采用放射自显影分析法测定培养心肌细胞 M 受体和3H-QNB 结合位点数, 结果表明 M 受体结合 位点数在培养的 d 2 为 400 结合点um -2, 到 d 7 增加到 800 以上, 而且 M 受体数量的变化与胎鼠或 乳鼠的年龄无关, 只与培养的时间长短有关。我们 在实验中发现心肌细胞 M 受体数在培养的 d 4 到 d 12 保持稳定, 以后就逐渐下降, 这和以往的研究结 果是一致的 8。M 受体数的自然下降推想可能和 细胞本身的功能下降, 受体蛋白的合成减少有关。 因为镜下观察细胞搏动变得微弱,搏动细胞数占总 细胞数的百分率减少, 细胞形态变得枯萎
10、, 处在一种 衰老状态。所以本实验将此种 M 受体数自然减少 的细胞做为衰老细胞模型, 用来研究 ZMS、 XMS 和 DIO 对 M 受体的调节作用。实验结果表明 ZMS 和 XMS 对 M 受体数有明显的上调作用, 但 DIO 对 M 受体的上调作用不明显。ZMS 和 XMS 对 M 受体上 调作用的机制可能为使衰老心肌细胞 M 受体分子 1411中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2005 Sep; 21 (9) 合成与降解速率失平衡恢复正常, 即促进受体的合 成并减缓受体的降解 5, 8。 ZMS、 XMS 和 DIO 均属甾体皂苷元,其中
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