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1、8 9 8实用预防医学 2 0 0 4 年1 0 月 第1 1 卷 第5 期 P r a c t ic a l P r e v e n t iv e M e d i c i n e , O c t . 2 0 0 4 , V o l 1 1 , N o . 5 文章编号: 1 0 0 6 一 3 1 1 0 ( 2 0 0 4 ) 0 5 一 0 8 9 9 一 0 2【 论著 】 三氯乙烯的遗传毒性实验研究 吴 泰顺, , 吴 礼康, , 张 勤 2 , 肖 锦晖 , 聂绍发3 , 陈 伟3 摘要: 目的检测三氯乙烯的遗传毒性作用。 方法以不同剂量的三氯乙烯用染毒柜对雌、 雄昆明小鼠分别 进
2、行染毒, 染毒后雌雄合笼进行自 然交配, 观测子代鼠的生长发育状况及脏器情况, 并与空白对照组进行比 较分析。结 果染毒组子鼠体重低于对照组, 存在发育迟缓和缺肢畸形。结论三氯乙烯可导致昆明小鼠子代发育迟缓和缺肢 畸形, 表明其具有遗传毒性作用。 关键词: 三氯乙烯; 遗传毒性; 研究 中图分类号: R - 3 3文献标识码: A A n E x p e r i m e n t a l S t u d y o n G e n o t o x i c i t y i n Mi c e E x p o s e d t o T IC E WU T a i 一s h u n ,WU L i 一k a
3、n g , Z H A N G q i n , e t a l . ( C e n t e r f o r D i s e a s e C o n t r o l a n d P r e v e n t i o n o f B a o a n D i s t r i c t , S h e n z h e n C i ty , S h e n z h e n 5 1 8 1 0 1 ) A b s t r a c t : O b j e c t i v e T o e v a lu a t e t h e g e n o t o x ic it y o f t r ic h lo r o e
4、t h y le n e ( T C E ) t o m ic e . M e t h o d s A ft e r b e in g a d m in is - t e r e d w it h d iff e r e n t d o s e o f T C E f e m a le a n d m a le m i c e w e r e p u t t o g e t h e r f o r t h e i r n a t u r a l c o p u la t io n in d iff e r e n t d o s e g r o u p . T h e g r o w t h
5、o f t h e f i l ia l g e n e r a t i o n m ic e w a s o b s e r v e d a n d c o m p a r e d b e t w e e n t h e e x p o s u r e g r o u p a n d t h e c o n t r o l g r o u p . R e - s u i t s T h e w e ig h t o f t h e e x p o s u r e g r o u p a r e le s s t h a n t h a n t h a t o f t h e c o n t
6、r o l g r o u p . T h e r e a ls o e x is t s d e f o r m i t y . i n t h e e x p o - s u r e g r o u p . C o n c l u s i o n T C E m ig h t c a u s e d e v e l o p m e n t a l r e t a r d a t i o n a n d d e f o r m it y o f m ic e , s h o w i n g t h e g e n o t o x ic it y o f T C E. K e y Wo r d
7、 s : T r ic h l o r o e t h y le n e ( T C E ) ; G e n o t o x ic it y ; S t u d y 基金项目: 深圳市宝安区科技计划题目( 2 0 0 1 0 7 9 ) 作者单位: 1 深圳市宝安区疾病预防控制中心( 广东深圳5 1 8 1 0 1 ) ; 2 深圳市宝安区人民医院; 2华中科技大学公共卫生学院 作者简介: 吴泰顺( 1 9 6 3 一) , 男, 湖北鄂州人, 硕士, 主任医师, 硕导, 主要从事疾病控制和流行病学研究工作。 中 9 , 10 1 , 支持A 8 3 变异是免疫选择的 结果。 H B V基因变
8、异的检测, 经典方法是基因测序法, 但由于基 因测序的技术要求高, 成本也高, 不适合大范围的推广应用, 扩 增抗拒突变系统( A R M S ) 分析方法可以区分正常和突变的 D N A碱基。我们同时用基因测序法和A R MS 法检测了6 2 例 临床标本, 基因测序法检测出4 1 例, A R M S 法检测出3 5 例, 二 种方法检测例数没有显著性差异, 基因测序法由于采取的是巢 式P C R 技术, 灵敏度较高, 对基因测序法检测阳性而A R M S 检 测阴性的病例, 我们采用了荧光定量P C R检测, 这些患者血清 中H B V D N A浓度均低于1 0 0 拷贝/ 毫升, 可
9、以看出A R M S 方法 可以替代基因测序法用于临床标本A 8 3 突变株的分析。 关于A 8 3 变异与临床病情的关系, 我们用A R M S 对不同临 床类型的1 3 9 例临床标本进行了检测, 结果显示, 随着病情的 加重, A 8 3 变异株检出率明显升高, 表明A 8 3 变异与乙型肝炎 病毒感染后肝炎慢性化和病情加重有关, 与文献 6 j 报道结果一 致, 检测A 8 3 变异对乙型肝炎病毒感染后预后判断具有一定的 意义。我们的研究结果还显示, 不同H B e A g 表达状态下A 8 3 突变株分布具有明显的差异, H B e A g 阴性患者A 8 3 突变明显 高于H B
10、e A g 阳性患者, 表明H B V D N A前C区A 8 3 的突变与 H B e A g 表达状态明显相关, 同时也说明了H B e i地阴性并不能 表示乙型肝炎病毒复制的终止, H B V D N A检测才能真正反映 病毒在体内的存在状况。 参考文献 1 P o c h O , S a u v a g e t 1 , D e la r u e M, e t a l . I d e n t i f ic a t io n o f f o u r c o n s e r v e d m o t i f is a m o n g t h e R N A 一 d e p e n d e n
11、t p o ly m e r a s e e n c o d in d e le m e n t s J . E MB O J , 1 9 8 9 , 8 : 3 8 6 7 一3 8 7 4 . 2 中华医学会传染病与寄生虫学分会和肝病学分会联合修汀. 病毒性 肝炎防治方案 Z . 传染病信息, 2 0 0 0 . 1 3 : 1 4 1 一1 5 0 . 3 C . R . N e w t o n , A . G r a h a m , L . E . H e p t i n s t a ll , e t a l . A n a l y s is o f a n y p o i n t m
12、 u t a t i o n i n D N A, T h e a m l i f i c a t io n r e f r a c t o r y m u t a t io n s y s t e m ( A R M S ) J . N u c le i c A c id s R e s e a r c h , 1 9 8 9 , 1 7 : 2 5 0 3 一 2 5 1 6 . 4 王永忠, 周国平, 李夏亭, 等. 乙型肝炎病毒基因分型及临床应用研 究 J J . 中 华实验和临床病毒学杂志, 2 0 0 2 , 1 6 : 3 6 7 一 3 6 9 . 5 C a r m a n
13、WF , J a c y n a M R , H a n z iy a n n is , e t a l . M u t a t io n p r e v e n t in g f o r - m a t i o n o f h e p a t i t i s B e a n t ig e n i n p a t i e n t s w i t h c h r o n i c h e p a t i t i s B v i r u s in f e c t io n J. L a n c e t , 1 9 8 9 , 2 : 5 8 8 一 5 9 2 . 6 C h u a n g WL
14、, O m a t a , E h a t a T , e t a l . C o 一 i n f e c t io n s t u d y o f p r e c o r e m u t a n t a n d w i ld 一 t y p e h e p a t i t i s B lik e v i r u s in d u c k l in g s J I . H e p a t o lo - g y , 1 9 9 4 , 1 9 : 5 6 9 一5 7 6 . 7 l 武力, 闻玉梅. 乙型肝炎病毒变异株生物学特性及其临床意义【 J . 肝脏, 2 0 0 0 , 5 : 2 4
15、 6 一 2 4 7 . 8 朱江, 张树林. H B V前 C区 A 1 8 9 6 变异株产生和 Mk转换时相的 关系 J . 中华肝脏病杂志, 2 0 0 2 . 8 : 2 1 7 . 9 王永忠, 周国平, 赵红霞, 等. H B e A g , H B e A b 双阳性患者血清中病 毒前C区基因序列分析 J .中国煤炭工业医学杂志, 2 0 0 2 , 5 : 9 8 5 一9 8 7 . 1 0 王永忠, 赵红霞, 周国平, 等. 乙肝病毒E抗原和抗体双阳性者中病 毒X及前C基因变异热点研究 J . 江西医学检验, 2 0 0 2 , 2 0 : 2 5 7 - 2 5 8 .
16、 ( 收稿日期: 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 ) 万方数据 实用预防医学 2 0 0 4 年1 0 月 第1 1 卷 第5 期 P r a c t i c a l P r e v e n t i v e M e d ic i n e , O c t . 2 0 0 4 , V o l 1 1 , N o . 58 9 9 三氯乙烯( T C E ) 是一种易挥发的卤代烃类有机溶剂, 被广 泛用于金属脱脂以及许多工业生产过程。近年来, T C E职业中 毒时有发生川, 中 毒的主要靶器官是肝脏、 肾脏、 皮肤和神经系 统, 但对其遗传毒性的研究较少。由于T C E的接触者以青年工 人
17、为主, 青年工人正是孕育子代的主体, 故对其遗传毒性的研 究显得尤为重要。 宝安区职业中毒调查资料显示, 涉外企业有机溶剂职业危 害以T C E 等含“ 氯” 溶剂最为严重 2 1 。我们进行的病例对照研 究的结果表明孕期接触有机溶剂与先天性畸形的发生有显著 性关联。为此, 本研究以不同剂量的 T C E对实验动物进行染 毒, 观察实验动物子代的生长发育情况, 并与空白对照组进行 比 较分析, 以检测T C E 对受试动物的遗传毒性, 从而为采取干 预措施和减少先天性畸形的发生提供依据。 1 材料与方法 1 . 1 试剂和材料T C E ( 分析纯) , 自 制半密封染毒柜( 1 . 8 x
18、0 . 8 x 0 . 7 ) 体积为1 耐。 1 . 2实验动物选择健康昆明种小鼠, 鼠龄3 月, 体重3 0 - 3 5 g , 共2 4 只, 雌雄各半。 1 . 3 方法 1 . 3 . 1 实验条件室温在 1 8 C -2 2 之间。 1 . 3 . 2 染毒方式雌雄分开进行染毒, 各分为三组, 每组 4 只。对照组: 空白 对照; I 组: 染毒6 0 m IT C E / 耐 染毒柜x 4 8 h ; II 组: 染毒6 0 m I T C E / m 3 染毒柜x 7 2 h o 1 . 3 . 3 遗传毒性实验方法染毒后按各组雌、 雄合笼, 每组 共8 只进行自 然交配, 观
19、察子代鼠生长发育及脏器情况。 1 . 4 统计分析对实验结果采用t 检验进行分析。 属表面去油污、 干洗和植物油、 矿物油的提取等。它可经呼吸 道、 消化道和皮肤吸收, 属于蓄积麻醉剂, 对中枢神经系统有强 烈的抑制作用, 也可累积周围神经系统和心、 肝、 肾等实质脏 器, 对皮肤和粘膜有刺激作用。长期接触T C E可诱发小鼠肝肿 瘤和大、 小鼠的肾 脏损伤和肿瘤;3 - -5 1 许多研究表明, T C E代谢产物与 D N A等大分子发生共价 结合, 可导致D N A分子的损伤或基因突变。T C E及其代谢产 物( 三氯乙酸、 三氯乙醇、 环氧化物) 在A m e s 试验中被确认为强 突
20、变剂( 诱导框移和碱基置换突变) 6 1 0 T C E 还能诱导小鼠骨 髓细胞分裂作用, 提示它能诱导非整倍体的产生 ”。有研究报 告, T C E 对小鼠 后代有致畸作用 a , T C E具有遗传作用, 长期 接触高浓度T C E 可导致染色体断裂和D N A损伤“ , T C E 精子 畸形试验结果阳 性, 说明其对雄性生殖细胞具有遗传毒性8 一 。 也有研究报告, T C E 对妊娠期的雌性小鼠 后代有致畸作用4 .5 1. 本研究对生育期的雌、 雄小鼠进行染毒, 观察第一代子鼠 的生长发育及脏器情况, 结果显示, T C E可导致子鼠体重偏低, 发育迟缓, 缺肢畸形。研究结果表明,
21、 T C E 具有致畸作用, 并且 对其后代的生长发育有一定影响。其机制可能是 T C E分别作 用于雌、 雄鼠, 导致常染色体和雌、 雄鼠的性染色体断裂或D N A 损伤所致。这与其它研究结果一致。说明在工业大量使用 T C E 等有机溶剂的情况下, 应该加强防毒措施, 不仅要防治急 慢性中毒, 更要预防下一代畸形的发生。 本研究观察的子鼠为第一代子鼠。建议对有畸形子鼠还 需进行2 , 3 代以上的观察, 以进一步了解T C E的遗传毒性。 参考文献 2 结果 2 . 1 T C E对子代生长发育的影响在染毒鼠雌、 雄合笼 2 8 - 3 0 d 后, 各组第一代子鼠 情况见表 1 。结果显
22、示染毒组 I 、 染毒 组n与对照组子代鼠的体重间差异具有显著性意义( P 0 . 0 1 ) ; 染毒组 I 有 1 只发育迟缓, 染毒组ff 有1 只缺肢畸形。 表1 T C E遗传毒性试验结果( 牙士; ) 仁 划李岳桓, 卫建平, 蔡向挺, 等. T C E引起全身性皮疹和严重肝损害的 调查 J . 中华劳动卫生职业病杂志, 1 9 9 4 , 1 2 ( 1 ) : 4 0 一 4 1 . 2 林炳杰. 宝安区2 1 0 0 家涉外企业有机溶剂职业危害分析仁 1 . 职业 医学, 1 9 9 9 , 1 : 5 4 一 5 5 . 3 1 唐国彗, 庄志雄, 张锦周. T C E诱发
23、小鼠及人外周血淋巴细胞D N A 链断裂 J . 中国 药理学和毒理学杂志, 1 9 9 7 , 2 : 1 1 3 一 1 1 5 . 4 1 F a h r ig 一 R , M a d l e 一 S , 13 a u m a n n 一 H . G e n e t ic t o x ic o lo g y o f t r ic h lo r o e t h - y le n e J 、 Mu t a t 一 R e s , 1 9 9 5 , 1 : 1 一 3 6 . 1飞. 气了0 rL厂JJ仁 组别子代动物数( 只)体重( 动 C a n d u r a一S M, F a u s
24、 t m a n一E M. T r i c h l o r o e t h y l e n e : t o x i c o lo g y a n d 了n6CU 门j气哎 对照组 染毒组 I 染毒组n 1 4. 3 9士2. 1 7 1 2 . 8 6士2 . 6 5 2 . 8 9 0 . 0 1 h e a l t h h a z a r d s J . G一 I t a l 一 Me d 一 L a v , 1 9 9 1 , 6 : 1 7 一 2 5 . Mo t o h a s h i N, N a g a s h i m a H, Mo l n a r J , e t a l .
25、 T r i c h lo r o e t h u l e n e , HPr e - 1 2 . 6 0士2 . 5 3 3 . 4 3 0 . 0 1 2 . 2 T C E 时子代主要脏器的影响本实验中, 在实验小鼠产 仔后2 7 d , 处死子代鼠观察其心、 肝、 肺、 肠道、 生殖器畸形, 各 组均未见明显内脏畸形。 3 讨论 T C E 为不饱和脂肪族卤 代烃化合物, 工业上广泛应用于金 d ic t io n o f c a r c i n o g e n ic i t y o f in v e s t ig a t e d c o m p o u n d s i n c l u d in g t u i c h lo r o - e t h y le n e J . I n V iv o , 1 9 9 9 , 1 3 ( 3 ) : 2 2 -1 一 2 2 4 . 7 1 王家骥, 练海泉, 胡明霞, 等. T C E对职业人群的细胞遗传性效应 J . 癌变 畸变 突变, 2 0 0 3 , 1 5 ( 1 ) . 8 黄海雄, 张锦周, 黄钮, 等 T C E精子畸形试验研究 J . 中国职业医 学, 2 0 0 2 , 2 9 ( 4 ) . ( 收稿日期: 2 0 0 4 - 0 6 - 0 1 ) 万方数据
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