三肽化合物酪丝缬肽对人肝癌BEL7402细胞增殖抑制作用的实验研究.pdf
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1、was measured using Western blot. The sensitivity of cells to doxorubicin was measured using MTT assay. Results The sorcin level was significantly higher in K562/ A02 cells than in K562 cells . Transfection of K562/ A02 cells with ASODN targeted to sorcin re- duced the level of sorcin expression and
2、increased the sensitivity of K562/ A02 cell to doxorubicin. Conclu- sion Sorcin,an important gene involved in MDR in leukemia cells,may be a potential target for MDR modulators investigation in the future. Key words: leukemia;multidrug resistance;sorcin; antisense oligonucleotide;transfection 三肽化合物酪
3、丝缬肽对人肝癌 BEL-7402 细胞增殖抑制作用的实验研究 贾 静1, 朱智彤1, 陆 融2, 赵 茜1, 李国力1, 金孟珏3, 李会强1, 姚 智1 (1.天津医科大学免疫教研室, 天津 300070; 2.深圳康哲药业有限公司, 深圳 518029; 3.天津医科大学实验动物部, 天津 300070) 中国图书分类号: R 329. 26, R 730. 5, R 979. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001 -1978 (2005) 12 -1433 -05 摘要: 目的 观察三肽化合物酪丝缬肽 (tyroservaltide, YSV) 对体外培养人肝癌 BEL-7402
4、细胞增殖的抑制作用。方法 建立人肝癌 BEL-7402 及 Chang 氏肝细胞体外培养体系, 用 BrdU 法、 MTT 法及 LDH 法, 观察 YSV 对体外培养的 BEL- 7402 细胞、 Chang 氏肝细胞 DNA 分裂指数、 MTT 代谢率、 LDH 释放量的影响, 用琼脂糖凝胶电泳观察药物对体外培 养 BEL-7402 细胞 DNA 片段化的影响。结果 YSV 对 BEL- 7402 细胞作用 48 h、 72 h 时药物浓度为1 mgL -1和0. 1 mg L -1组与阴性对照组比较: 能显著抑制肿瘤细胞 DNA 的 合成 (P 0. 05, 见 Tab 7 9) 。 T
5、ab 6 The effects of YSV on metabolism activation of normal hepatic cell and hepatocarcinoma BEL-7402 cells(n =4, 72 h) Dose BEL-7402 OD Inhibitory rate/ % Changs liver OD Inhibitory rate/ % YSV 100 mgL -1 0.190 0.017-1.123 0.048- 10 mgL -1l 0.195 0.013-1.179 0.045- 1 mgL -1 0.162 0.011*16.941.110 0.
6、065- 0.1 mgL -1 0.157 0.015*19.121.015 0.056- 0.01 mgL -1 0.189 0.016-1.114 0.016- Control0.195 0.018-1.075 0.085- *P 0. 05 vs control group,One-Way ANOVA,Student Newman- Keuls(SNK) Tab 7 The effects of YSV on cytotoxicity reaction of normal hepatic cell and hepatocarcinoma BEL-7402 cells(n =4, 24 h
7、) Dose BEL-7402 OD Inhibitory rate/ % Changs liver OD Inhibitory rate/ % YSV 100 mgL -1 0.472 0.016-0.387 0.035- 10 mgL -1 0.474 0.023-0.490 0.066- 1 mgL -1 0.481 0.028-0.382 0.031- 0.1 mgL -1 0.483 0.023-0.415 0.043- 0.01 mgL -1 0.494 0.071-0.369 0.025- Control0.423 0.067-0.378 0.026- Tab 8 The eff
8、ects of YSV on cytotoxicity reaction of normal hepatic cell and hepatocarcinoma BEL-7402 cells(n =4, 48 h) Dose BEL-7402 OD Inhibitory rate/ % Changs liver OD Inhibitory rate/ % YSV 100 mgL -1 0.547 0.022-0.675 0.027- 10 mgL -1 0.818 0.025*17.440.698 0.041- 1 mgL -1 1.027 0.036*39.020.657 0.014- 0.1
9、 mgL -1 0.897 0.012*25.610.715 0.026*11.61 0.01 mgL -1 0.532 0.013-0.584 0.061- Control0.649 0.095-0.640 0.037- *P 0. 05 vs control group,One-Way ANOVA,Student Newman- Keuls(SNK) 2. 4 YSV 诱导体外培养 BEL-7402 肝癌细胞 DNA 片段化 由 Fig 2 可观察到 10、 1、 0. 1 mgL -1YSV 能诱导体外培养 BEL-7402 肝癌细胞 DNA 片段化成 低分子量 DNA (LMW DNA
10、) , 经1%琼脂糖电泳后显 示为 DNA Ladder, 而沉淀中为未出现片段化的大分 子量 DNA (HMW DNA) , 不能经 1% 琼脂糖电泳分 5341中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2005 Dec; 21 (12) 离。 Tab 9 The effects of YSV on cytotoxicity reaction of normal hepatic cell and hepatocarcinoma BEL-7402 cells(n =4, 72 h) Dose BEL-7402 OD Inhibitory rate/ %
11、Changs liver OD Inhibitory rate/ % YSV 100 mgL -1 0.828 0.040-0.799 0.040- 10 mgL -1 1.036 0.038*14.380.871 020- 1 mgL -1 1.346 0.047*36.130.857 0.049- 0.1 mgL -1 1.214 0.013*26.830.796 0.050- 0.01 mgL -1 0.725 0.041-0.783 0.049- Control0.831 0.076-0.805 0.028- *P 0. 05 vs control group,*P 0. 01 vs
12、salinecontrol group, One-Way ANOVA,Student Newman-Keuls(SNK) Fig 2 DNA ladder induced by 10 mgL -1, 1 mgL-1, 0. 1 mg L -1CMS024-02 and positive control TNF-, contrasted with nega- tive control in the LMW DNA contained suspension Lane 1: Negative control-LMW DNA contained in the suspension; Lane 2: 1
13、0 mgL -1-LMW DNA contained in the suspension; Lane 3: 1 mgL -1-LMW DNA contained in the suspension; Lane 4:0. 1 mg L -1 LMW DNA contained in the suspension; Lane 5: TNF-LMW DNA contained in the suspension; Lane 6: Marker; Lane 7: Negative control- HMW DNA contained in the precipitant 3 讨论 本研究从细胞活力及增
14、殖等方面观察了 YSV 对体外培养肿瘤细胞生长情况的影响。细胞活力大 多通过检测两个特征参数来反映, 即细胞代谢活力 和细胞膜的完整性。代谢旺盛的细胞可以将四唑盐 (如 MTT, XTT, WST-1) 代谢为紫色的产物, 用代谢 产物的 OD 值可以定量反映细胞的代谢活力 2。在 细胞毒研究中, 濒死细胞内的某些分子 (如乳酸脱 氢酶 LDH 或预先标记的 51Cr ) 经细胞膜裂隙释 放出来, 通过检测释放产物的量来反映细胞的活 力 3, 4。与细胞活力分析相比, 细胞增殖可以检测 分裂活跃的细胞, 而处于静止期的活细胞不能被检 测到。它可以用增殖细胞的数量或其所占的比例表 示, 也可以用
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