两种凝血酶原提取方法的比较.pdf
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1、4 6 J 成o u r n 雾ao fC 医h e n g d 学uM e 院d i c a l 学C o l l e g 报e 2 0 0 9M a r 。4 ( 1 ) ll “、“ d d :1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 6 7 4 - - 2 2 5 7 2 0 0 9 0 1 0 1 3 两种凝血酶原提取方法的比较 赖 翼,吴民泸,代娟,陈曼,段佳慧, 刘 阳。 ( 成都医学院医学检验系,成都6 1 0 0 8 3 ) 论著 【摘要】目的比较等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原的纯度。方法分别采用等 电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原,
2、凝血酶原经单独钙离子激活得到凝血酶,通过凝血酶效 价测定、蛋白质浓度测定,计算出凝血酶的比活性。结果采用等电点沉淀法提取的凝血酶原经激活后得到的凝 血酶比活性为1 1 0 1 1 5 4U r n g ,采用柠檬酸钡吸附法提取的凝血酶原经激活后得到的凝血酶比活性为1 3 0 1 7 1 2 3 0U m g ,经配对T 检验,P 0 0 1 结论与等电点沉淀法相比,采用柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取得到 的凝血酶原纯度更高。 【关键词】 凝血酶原;凝血酶;等电点沉淀法;柠檬酸钡吸附法 【中图分类号】R - 3 3【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 4 2 2 5 7 ( 2 0 0 9 )
3、0 1 - 0 0 4 6 - 0 3 C o m p a r a t i v eA n a l y s i so fT w oE x t r a c t i o nM e t h o d so fP r o t h r o m b i n L A JY ,W U M i n - l u ,D A I J u a n ,C H E N M a n ,D U A N J i a - h u i 。L I U Y a n g 。 ( D e p a r t m e n to fL a bM e d i c i n e ,C h e n g d u M e d i c a lC o l l e g
4、e ,C h e n g d u6 1 0 0 8 3 ,C h i n a ) A b s t r a c t O b j e c t i v eT oc o m p a r et h ep u r i t yo fp r o t h r o m b i np u r i f i e db ym e t h o do fp r e c i p i t a t i n ga ti s o e h c t r i c p o i n ta n da d s o r p t i o nm e t h o dw i t hb a r i u mc i t r a t ef r o mb l o o
5、dp l a s m ao fp i g M e t h o d sP r o t h r o m b i nw a sp u r i f i e db y m e t h o do fp r e c i p i t a t i n ga ti s o e l e c t r i c p o i n ta n da d s o r p t i o nm e t h o dw i t hb a r i u mc i t r a t ef r o mb l o o dp l a s m ao fp i ga n d a c t i v a t e db yC a z + o n l yt Ot h
6、 r o m b i n T h e nt h et i t e ro ft h r o m b i na n dt h ec o n c e n t r a t i o no fp r o t e i nw e r em e a s u r e dt Og e t t h es p e c i f i ca c t i v i t yo ft h r o m b i n R e s u l t sn l es p e c i f i ca c t i v i t yo ft h r o m b i na c t i v a t e db yC a z + f r o mp r o t h r
7、 o m b i np u r l - f l e db ym e t h o do fp r e c i p i t a t i n ga ti s o e l e c t r i c p o i n tw a s1 1 0 1 1 5 4U m g T h es p e c i f i ca c t i v i t yo ft h r o m b i na c t i v a t e d b yC a 2 + f r o mp r o t h r o m b i np u r i f i e db ya d s o r p t i o nm e t h o d 耐t hb a r i u
8、mc i t r a t ew a s1 3 0 1 7 士1 2 3 0U m g T h es p e c i f i ca c t i v i t i e sw e r ea n a l y z e db yp a i r e dT - t e S t P 0 0 1 C o n c l u s i o nT h ep u r i t yo fp r o t h r o m b i np u r i f i e db ya d s o r p t i o n m e t h o dw i t hb a r i u mc i t r a t ei sh i g h e rt h a np
9、u r i f i e db ym e t h o do fp r e c i p i t a t i n ga ti s o e l e c t r i c p o i n t K e yw o r d s p r o t h r o m b i n ;t h r o m b i n ;m e t h o do fp r e c i p i t a t i n ga ti s o e l e c t r i c p o i n t ;a d s o r p t i o nm e t h o dw i t h b a r i u mc i t r a t e 凝血酶是参与机体凝血过程的一个重要
10、的凝血 因子,在体内以凝血酶原形式存在 1 。2 0 世纪中期 开始人们将凝血酶应用于临床,由于其疗效显著,应 用也越来越广泛。之后美英日等国从牛血浆中分离 出凝血酶应用于临床,并证明将动物凝血酶应用于 人体未出现凝血酶抗原性,口服和局部外用时无过 敏反应和其他不良反应等,因而目前所使用的凝血 酶制剂大多来源于动物血浆,国内采用猪血浆制备 收稿日期2 0 0 8 1 0 2 0 修回日期2 0 0 8 1 1 3 0 作者简介赖翼( 1 9 8 1 - ) ,女,四川省泸州市人,硕士,从事血液检验 学研究。T e l :0 2 8 - 6 8 2 8 9 2 7 1 ,E - m a i l
11、:s c u l y 9 2 6 1 2 6 c o r n * 通讯作者刘阳E m a i l :s c u n n 5 1 8 1 2 6 c o r n 凝血酶的报道较多 2 。等电点沉淀法和柠檬酸钡吸 附法是两种主要的凝血酶原提取方法 3 ,凝血酶原 经单独的钙离子激活可得到凝血酶。目前,国内尚 无研究比较应用等电点沉淀法和柠檬酸钡吸附法所 得到的凝血酶原纯度的差异,哪种方法得到的凝血 酶原纯度更高? 更适合用于提取凝血酶原? 本文对 这两种方法从猪血浆中提取凝血酶原的纯度进行了 比较。为相关实验中选择合适的凝血酶原提取方法 提供参考。 1 材料与方法 1 1 材料 万方数据 赖翼,等
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- 凝血酶原 提取 方法 比较
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