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1、 基础研究 两种方法保存人体透明软骨行异种移植的实验研究 ! 栾保华薛文君王永前薛峰吕仁荣张健初晓莲马晓东禚莹莹 山东省立医院山东大学临床医学院美容整形外科 (济南, !“#!$) 【摘要】 目的探讨不同方法保存的人体透明软骨, 异种移植后软骨存活的动态变化及在整形外科应 用的可行性。方法选择 %, 6 ?A BCA ADDAG?FB HABIAAF BI; JKFLE ;D =ABC;LE KF AE ?FL;=GNP T?E AAEAMAL HN =ABC;LE ;D $(.;F AEAMBK;F ; *“+ ?G?AL A?A?BK;FP:CA A ?FL AGAA ?FL BCA .?
2、MKBN IAA IAK.CB A?G?FB ( 6 #7#“) P:CA IAK.CBE ;D B?FEG?FBAL CN?GKFA AEAM?BK;F ?FL A?A ?DBA 8 =;FBCEP:CA IAK.CBE C?L F; AP=(5.$“2(“YQ=?F CN?GKFA AEAMAL HN =ABC;LE ;D ?GG?FBALPU; KB EQAEBAL BC?B BCAK GKAEAO M?BK;FP 【*B?FEG?FBCN?GKFA (“= 个月术后 = 个月术后 (4 个月术后 ( 个月术后 (! 个月 :; /:; /:; /: ; /: ; /: ; /: ; /
3、 冷冻组!“4 4 灭活组!“4 9, 0 值 4547, 表明无显著性差 异。冷冻法后 9 个月 1 值为 /5(, 0 6 4547, 表明各组间有 显著性差异, 再用 3AB 法 (C 检验) 进行均数之间的两两比 较, 除术后 (4、 (、 (! 个月与其它各组有显著性差异, 其余均 无显著性差异。 !“光学显微镜观察: () 深低温冷冻软骨及酒精灭活软骨 植入前均未见明显改变, 其软骨细胞呈圆形或椭圆形, 居于 软骨陷窝内, 胞浆蓝染, 核居中或偏于一侧, 软骨基质呈均匀 浅蓝色。!) 冷冻软骨移植后 ( 8 ! 个月与移植前相比可见有 新生软骨细胞生长, 光学显微镜下细胞数量明显增
4、多, 且多 为不成熟状 (图 () 。移植后 个月出现退行性变, 软骨细胞 肥大, 空变或固缩, 软骨基质出现钙化, 软骨周围出现少量淋 巴细胞浸润。9 个月后软骨骨膜下可见退行性变, 淋巴细 胞、 巨噬细胞浸润, 软骨细胞空变或固缩。) 酒精灭活软骨 植入 9 个月内几无变化, ? 个月始仅出现轻度退行性变。 “ 透射电镜观察: () 冷冻软骨: 种植前软骨细胞位于软 骨陷窝内, 呈圆形或椭圆形, 胞核呈圆形或马蹄形, 胞质丰富 (见图 !) 。移植后 ( 8 ! 个月, 软骨细胞未见明显变化, 细胞 结构存在, 胞质中可见许多大小不一的空泡。移植 个月 后, 软骨细胞间质未见明显变化, 微
5、纤维和细胞间质颗粒尚 存在, 软骨细胞膜消失, 胞质密度不一, 染色深, 多数细胞无 胞核, 少数细胞的结构消失。移植 9 个月后, 基质内出现空 泡, 微纤维较前模糊, 大部分软骨陷窝内可见散在的细胞碎 片, 软骨细胞结构消失, 细胞内未见到明显的细胞器存在 (见 图 ) 。!) 酒精灭活软骨: 种植前软骨细胞位于软骨陷窝内, 呈圆形或卵圆形, 细胞膜清晰, 胞核呈卵圆形或新月形, 胞质 丰富, 见大量显著扩张的粗面内质网或糖原颗粒。种植后软 骨仅出现轻度退行性变 (见图 /) 。 图 ! 光镜冷冻软骨移植后 # 个月 (!$ 倍) 图 # 电镜冷冻软骨种植前 !/!中国微创外科杂志 !44
6、! 年 月第 ! 卷第 / 期.DE: F ,E: ):G 3HI*, -H*HJK !44!, LMN“!“AM“/ 万方数据 图 ! 电镜冷冻软骨种植 “ 个月 图 # 电镜酒精灭活软骨种植后 “ 个月 !“免疫球蛋白和补体的变化, 见表 #“ 表 ! 软骨移植前后免疫功能的改变 ($% -“-3, 无显著性差异。 讨论 软骨组织移植在整形外科领域应用比较广泛, ?在 1!# 年提出 “骨软骨一旦破坏, 即不能再得到恢复” 的观点, 至今已有两个半世纪了。目前, 使损伤的骨软骨修复至正常 骨软骨, 尚无完善的方法 # 。 临床上常用的软骨组织缺损修复途径大致有三种, 即自 体组织移植, 异
7、体组织移植或应用人工代用品 * 。自体软骨 移植, 可供组织有限, 必须以牺牲自体部分正常组织为代价, 且增加受术者的痛苦。人工合成生物材料存在着许多潜在 的危险和并发症, 如感染、 外露、 断裂、 植入体的松脱等, 同时 存在的与宿主免疫系统的反应都限制了它们的使用。近年 兴起的组织工程技术为软骨缺损的修复开辟了一条新的途 径 ! 。例如用软骨细胞与医用组织引导再生胶原膜或聚羟 基乙酸支架体外联合培养、 再植入体内的组织工程, 目前仍 处于探索和实验阶段, 过渡到临床尚需时日。 异种或同种异体软骨来源广泛, 可以提前预制塑形, 但 因存在免疫排斥反应、 变形、 吸收、 感染等弊端, 而使临床
8、应 用受到限制 3 。因此, 使用何种方法进行处理和保存异体软 骨, 提高异体软骨临床应用的可行性, 仍需进行不断的探索 和研究。本课题对两种不同方法保存的人透明软骨进行异 种移植实验, 连续观察其近期及远期的变化结果, 为临床应 用提供科学依据。 本研究结果表明: 、 深低温保存法软骨排斥反应较为明 显, 快速复温后, 其生物学特性与新鲜软骨无差异, 这与快速 降温时的损伤较轻有关。植入早期可成活并可见新生软骨 细胞, # 个月后开始吸收变形, 且随着时间的延长而逐渐加 重, 甚至仅残余纤维囊。*、 13A酒精灭活法保存的软骨, 因已 被灭活, 移植后骨周形成纤维囊包绕, 免疫排斥反应小,
9、连续 观察至 * 个月时, 仍能保持其外形不变。 结论 深低温法保存软骨因其具有新鲜软骨的特性, 异种异体 移植后易被排斥和吸收, 故不宜应用于临床。13A酒精灭活 法保存软骨, 生物学特性稳定, 提示其用于临床替代自体软 骨的远期效果可能优于深低温保存法。 参考文献 姚小武, 钟永持“用弱甲醛处理后异体软骨移植的实验观察“第一 军医大学学报“)-, -: ( B 1-“ *张涤生“组织工程学简经济“中华整形烧伤外科杂志, )., !: *. B *!“ #4CD=E FGHCE, I=JC KGHCE“ 骨软骨的修复“中华手外科杂志, *-, (: 1( B .*“ !刘彦春, 王炜“软骨细胞 B 支架复合物修复兔耳廓软骨缺损“中华 整形烧伤外科杂志, ), 3: .- B .*“ 3程新德, 赵天兰, 李光早等, 低温冷冻同种异体胎软骨移植的应 用“中华整形烧伤外科杂志 , ), 3 () , !# B !3“ (*- B - B 3 收稿) (*-* B 1 B # 修回) #!*中国微创外科杂志 *-* 年 . 月第 * 卷第 ! 期6HC+ L 4C+ /+M :=$, 5=$=D *-*, NEO“*“PE“! 万方数据
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