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1、第1 4 粒期 2 0 0 8 年6 月 天津医科大学学报 J O U R N A LO FT I A N J I NM E D I C A LU N I V E R S I T Y V 0 1 1 4 N 0 2 J u n 2 0 0 8 1 4 5 两种神经源性痛大鼠模型的比较 郭永民王国林 ( 天津医科大学总医院麻醉科,天津3 0 0 0 5 2 ) 摘要 目的:比较慢性坐骨神经缩窄模型( C C I ) 和L 5 脊神经前根切断( L 5 V R T ) 两种神经病理性疼痛模型的效果。方 法:健康雄性s D 大鼠2 6 只。鼠龄8 周。体重1 8 0 2 2 0g ,随机分为3 组:
2、L S V R T 组( ,I = 1 0 ) ,C C I 组( ,l = l O ) ,假手术组 ( n = 6 ) 。各组分别在左后肢制作模型。以热板法缩爪潜伏期和5 0 缩爪阈值作为行为学指标进行观察。记录有无死亡、 致残、跛行、自噬行为。结果:自术后第1 天起各组总体之间缩爪潜伏期、机械法5 0 缩爪阈值均存在差异( P 0 0 5 ) , 且L S V R T 组与对照组,C C I 组与对照组比较,其缩爪潜伏期阈值、机械法5 0 缩爪阈值均有所下降( 尸锄0 5 ) 。L 5 V R T 组 下降程度低于C C I 组( P 如0 5 ) 。C C I 组致残1 例,跛行3 例,
3、自噬1 例。L 5 V R T 、对照组未出现。结论:L S V R T 模型是一 种成功率高、稳定、更接近临床实际的神经病理性疼痛模型。 关键词 神经病理性疼痛;大鼠;动物模型 中图分类号】R 一3 3 2【文献标识码 A 文章编号 1 0 0 6 8 1 4 7 ( 2 0 0 8 ) 0 2 - 0 1 4 5 - 0 3 C o m p a r i s o no ft w or a tm o d e l so fn e u r o p a t h i cp a i n G U OY o n g - m i n ,W A N GG u o l i n ( D e p a r t m e
4、n to fA n e s t h e s i o l o g y ,G e n e r a lH o s p i t a l ,T i a n j i nM e d i c a lU n i v e r s i t y ,T i a n j i n3 0 0 0 5 2 ,C h i n a ) A B S T R A C TO b j e c t i v e :T oc o m p a r et h ee f f i c a c yo fn e u r o p a t h i cp a i nm o d e l s :c h r o n i cc o n s t r i c t i o n
5、i n j u r y o fs c i a t i cn e r v e ( C C I ) a n dl u m b e r5v e n t r a lr o o tt r a n s a c t i o n ( L 5V R 叼m o d e l M e t h o d s :T w e n t ys i xm a l eS D r a t s ( w e i g h t e df r o m1 5 0t o2 0 0g ) w e r er a n d o m l yd i v i d e di n t ot h r e eg r o u p s :g r o u pL 5V R T
6、( n = 1 0 ) ,g r o u pC C I ( n = 1 0 ) ,g r o u ps h a m ( n = 6 ) E a c hg r o u pw a so p e r a t e do nt h el e th i n dl i m bo f r a t T h et h e r m a lw i t h d r a e a ll a t e n c yO V C L ) a n dm e c h a n i c a lw i t h d r a w lt h r e s h o l d ( M W Do fr a t sw e r eu s e dt oe v a
7、l u a t ei t sb e h a v i o u r ,r e c o r d t h en u m b e ro fd e a t h ,m u t i l a t i o n ,l i m ba n da u t o p h a g y R e s u l t s :T h eT W La n dM W Ti ng r o u pL 5V R Ta n d g r o u pC C Ia l ld e c r e a s e ds i n c et h ef i r s td a ya f t e ro p e r a t i o n T h ed i f f e r e n c
8、 ei ns c o r e sr e s p o n d e dm o r er a p i d l y t oT W La n dM W TW a sl o w e ri ng r o u pC C It h a nt h a ti ng r o u pL 5V R T T h e r ew e r eo n em u t i l a t i o n t h r e el i m b a n do n ea u t o p h a g ya p p e a r e di ng r o u pC C I C o n c l u s i o n :T h el u m b e r5v e n
9、t r a lr o o tt r a n s a c t i o n ( L 5V R r I ) m o d e li sah i g ha c h i e v e m e n tr a t i os t a b i l i z em o d e la n dm o r ep r a c t i c a b l et h a nt h ep r e v i o u s K E YW O R D SN e u r o p a t h i cp a i n ;R a t ;A n i m a lm o d e l 神经病理性疼痛模型有多种,这些模型包括:慢 性坐骨神经缩窄模型( c h r o
10、 n i cc o n s t r i c t i o ni n j u r yo f s c i a t i cn e r v e ,C C I ) 、坐骨神经部分结丰L ( p a r t i a ls c i a t i c n e r v el i g a t i o n ,P S N L ) 、L 5 L 6 脊神经结扎( 1 u m b e r5 l u m b e r6s p i n a ln e r v el i g a t i o n ,L S L 6 S N L ) 、L 5 脊神经 基金项目:天津自然科学基金资助项目( 0 6 Y F J M J C 0 8 6 0 0
11、) ;天津市卫 生局基金资助项目( 0 6 K Y 5 1 ) 作者简介:郭永民( 1 9 7 4 一) ,男,主治医师,硕士在读,研究方向:疼痛 的基础机制;王国林( 1 9 5 6 一) ,男,教授,硕士,研究方向:临床麻醉与 疼痛治疗。 切断( 1 u m b e r5s p i n a ln e r v et r e c t i o n ,1 5 S N T ) 、保留性 神经损伤( s p a r e dn e r v ei n j u r y ,S N I ) 等,其中应用最为 广泛的是C C I 模型。然而。还没有一种令人满意的更 接近临床实际的模型。L i 等【1 睬用将L 5
12、 脊神经前根 切断( 1 u m b e r5v e n t r a lr o o tt r a n s a c t i o n ,L S V R T ) 的方 法制备出一种新型的病理痛模型这一模型的最大 特点是保留了完整的神经传人通路。但它是否能稳 定地模拟人类神经病理性疼痛疾病以及与以往模型 相比是否优越,还需要进一步研究。本实验拟就这一 万方数据 1 4 6 天津医科大学学报第1 4 卷 问题进行探讨。 1 材料与方法 、 1 1 材料健康S D 大鼠2 6 只,雄性,鼠龄8 周,体 重1 8 0 2 2 0g ( 天津市药物研究院提供) 。Y L S 一6 B 智 能热板仪( 安徽省淮
13、北正华生物仪器设备有限公 司) ;桶形大鼠固定器( 江苏省张家港市三兴教具 厂) ;电子天平( 上海天普Y Bl 0 0 2 ) 。 1 2 方法将大鼠随机分为3 组:L S V R T 组( n = l O ) , C C I 组( n = 1 0 ) ,假手术组n = 6 ) 。各组分别在左后肢 制作模型。按B e n n e t t t 2 l 所述的方法制作C C I 模型:大 鼠俯卧位固定,从后肢上部切开皮肤,分离肌肉,暴 露坐骨神经主干,使用羊肠线环绕坐骨神经,单结结 扎,使神经外膜轻度凹陷,但不阻断血供,结扎时偶 可见肢体轻微抽动共结扎4 道。环绕的羊肠线应能 够在坐骨神经主干上
14、滑动:按K 等 1 描述制作L S V R T 模型时,由大鼠背部L 4 S 1 位置切开皮肤3 4c m ,分 离肌肉直至L 5 横突,咬开横突,暴露L 5 脊神经,用 针头划开硬膜,在背根神经节( d o r s a lr o o tg a n g l i o n , D R G ) 下方仔细分离出前根3 - 4m m 并切断2H i m 。 将前根远端与近端轻轻分离以避免神经再生,逐层 缝合肌肉与皮肤,注意避免术后感染;假手术组:仅 将L 5 脊神经暴露,不分离脊神经前后根,然后逐层 缝合肌肉与皮肤。 1 3 行为学测定术前1d 。术后1 4 d 隔日使用机 械和热板法刺激测定术侧后趾,
15、比较它们对疼痛刺 静环境中,采用热板仪测定大鼠左后肢缩爪潜伏期 ( p a ww i t h d r a w a ll a t e n c y ,P W L ) ,每间隔1 0m i n 测定1 次。取3 次测定数的平均值作为测定结果。为防止大 鼠烫伤。将P W L 上限值定为3 0S 。5 0 缩爪阈值的 测定是指多次机械刺激能够引起5 0 缩爪反应的 机械力度。本实验使用y o nF r e y 丝接触刺激,依次使 用0 4 5 、0 7 0 、1 2 、2 0 、3 6 3 、5 5 、8 5 、1 5 1 、1 8 2 、2 2 3 、 2 5g 的力度刺激左后爪跖面。使用前用电子天平
16、校 准,参照u p d o w n 方法推测阈值,并在阈值上下分别 刺激5 次,每次问隔2 3s ,以推算5 0 反应阈值 s l , 大于2 5g 记为2 5g 。并记录有无死亡、致残、跛行、 自噬行为。 1 4 统计学方法计量资料以均数+ 标准差( 互蠡) 表 示。组问以单因素方差分析来比较各组大鼠的行为学 指标。以重复测量资料的方差分析来比较组内之间的 差异。若存在统计学意义。各组之间再用S N K 法进行 两两比较。应用S P S S1 1 0 软件计算,以1 9 0 0 5 说明 两组的差别具有统计学意义。 2 结果 自术后第1 天起各组总体之间缩爪潜伏期、机 械法5 0 缩爪阈值均
17、存在差异,且L 5 V R T 与对照 组。C C I 与对照组比较其缩爪潜伏期阈值、机械法 5 0 缩爪阈值均有所下降。L 5 V R T 组下降程度低于 C C I 组( P 0 0 5 ) 。 2 1 大鼠的热板法缩爪潜伏期见表1 。 激的反应差异。隔日上午9 :0 0 在室温( 2 0 2 ) 的安 2 2 大鼠的机械法5 0 缩爪阈值见表2 。 表1 各组大鼠的热板法缩爪潜伏期( 面蝴) 7 与对照组相比,P O 0 5 ;与术前相比,恹O 0 5 2 3 并发症C C I 组致残1 例,跛行3 例,自噬1 例。传入神经元造成损伤,不能保证神经传人通路的完 L 5 V R T 、对照
18、组未出现。整性。而神经传人通路的完整陛对于疼痛的诱发和 3 讨论维持具有十分重要的作用。但在背根神经结( D R G ) 以往的神经病理性疼痛模型都在不同程度上对前将主要包含传出神经纤维的脊神经背根切断并不 万方数据 第2 期郭永民。等两种神经源性痛大鼠模型的比较1 4 7 出现神经病理痛的症状嘲。L i 等的L 5 V R T 模型未损 伤传入神经元。证明初级感觉神经纤维处于W a l l e r i a n 变性的环境中即可诱发痛觉异常和过敏。这与 临床上神经病理性疼痛主要出现在没有明显外伤史 的疱疹后和糖尿病患者的情况更为类似。 目前。对神经病理生疼痛研究主要是在C C I 模 型上进行
19、的,而该模型除了破坏了神经传人通路的 完整陛这一缺点外,由于模型制备过程中缺少量化 标准在不同的操作者手中产生的神经损伤程度也 不同,这直接影响到实验结果的稳定性和可靠性。另 外。C C I 模型对神经产生的创伤较大,在我们的对照 实验中,有着较高的致残率、跛行、自噬现象发生,而 L 5 V R T 模型则未出现相同情况。 本研究结果还表明L S V R T 模型可以很好的在 大鼠上再现神经病理性疼痛术后第1 天即可产生 并于第5 天后逐渐获得稳定的神经病理性疼痛症状 表现。同时,我们还看到与C C I 模型相比,L 5 V R T 模 型大鼠产生的疼痛程度要轻也许正是这一原因,使 得出现并发
20、症的几率大大降低。 一种理想的动物模型应能够准确地重复再现所 要研究的疾病。L S V R T 模型更符合了对神经病理痛 疾病的研究要求,由于它采用选择性切断脊神经前 根,一定程度上达到了量化的标准。从而保证症状的 稳定表达,减少了人为干扰因素,使我们可以在均一 的基础上进行更深入地研究。而且,神经病理性疼痛 多是由于外周或中枢神经在病变环境中发生的功能 和结构的异常改变引起。L S V R T 模型更真实地模拟 了这一过程。还保留了传人神经传导通路结构上的 完整利于我们对在疾病发生发展过程中起重要作 用的D R G 和各种痛觉传人纤维,即无髓鞘的C 类纤 维、有髓鞘的A 6 轴突纤维结构和电
21、生理的改变做进 一步研究。越来越多的学者意识到C C I 模型的缺陷 已有人在L 5 V R T 模型上成功地获得了新的研究成 果嗍。但L 5 V R T 模型的操作较复杂精细,不利于大 量制备。是其较明显的不足。 总之,相比于C C I 模型,L 5 V R T 模型是一种成 功率高、稳定、更接近临床实际的神经病理性疼痛 模型。 参考文献: 1 uL ,X i a nC J ,Z h o uJ H ,e ta 1 E f f e c to fl u m b a r5v e n t r a lr o o tt r a i l - s e c t i o no np a i nb e h a v
22、 i o r s :an o v e lr a tm o d e lf o rn e u r o p a t h i cp a i n w i t h o u ta x o t o m yo fp r i m a r ys e n s o r yn e l l r o n g 匝E x pN e u r o l , 2 0 0 2 ,1 7 5 ( 1 ) :2 3 2 B e n n e t tG J ,X i eY I LAp e r i p h e r a lm o n o n o u r o p a t h yi nr a tt h a tp r o - d u e e sd i s
23、o r d e r so fp a i ns e n s a t i o nl i k et h o s e $ e e l li nn l a n 叨P a i n , 1 9 8 8 ,3 3 ( 1 ) :8 7 3 C h a p l a ns 凡B a c hF W ,P o g r e lJ W ,e ta 1 Q u a n t i t a t i v ea s s e s s m e n to f t a c t i l ea l l o d y n i ai nt h er a tp a w J N e u r o s iM e t h o d s ,1 9 9 4 ,5 3
24、 ( 1 ) :5 5 4 L i uC N ,w a l lP D ,B e n D o r E ,e ta 1 T a c t i l ea l l o d y n i ai nt h ea b s e n c e o fC - f i b e ra c t i v a t i o n :a l t e r e df i r i n gp r o p e r t i e so fD R Gn e u r o nf o l - l o w i n gs p i n a ln e r v e ri n j u r y J P a i n2 0 0 0 ,8 5 ( 3 ) :5 0 3 5 D
25、 j o u h r iL K o u t s i k o us ,F a n g ) 【,e ta 1 S p o n t a n e o u sp a i n ,b o t hn e q L l m p a t h i ca n d t o r y ,i sr e l a t e dt of r e q u e n c yo fs p o n t a n e o u s f i r i n gi ni n t a c tC - f i b e rn e o i e e p t o r s 哪N e u r o s c i ,2 0 0 6 ,2 6 ( 4 ) :1 2 8 1 6 X u
26、y r ,X i nW J ,W e iX H ,e ta 1 p 3 8a c t i v a t i o ni nu n i n j u r e dp r i m a r y a f f e r e n tn e u l o n ga n di ns p i n a lm i c r e g l i ac o n t r i b u t e st ot h ed e v e l o p m e n to fn e u r o p a t h i cp a i ni n d u c e db ys e l e c t i v em o t o rf i b e ri n j u r y 阴
27、E x pN e u r o l ,2 0 0 7 ,2 0 4 ( 1 ) :3 5 5 7 uY L Z h o uL J ,H uN W ,e ta 1 T u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ai n d u c e s l o n g - t e r mp o t e n t i a t i o no fC - f i b e re v o k e df i e l dp o t e n t i a l si ns p i n a l d o r s a lh o r ni nr a t sw i t hn e r v ei n j
28、 u r y :t h er o l eo fN F - k a p p aB ,J N K a n dp 3 8M A P K 忉N e u r o p h a r m a c o l o g y ,2 0 0 7 , 5 2 ( 3 ) :7 0 8 8 X uJ r , X i nW J ,Z a n gY ,e ta 1 T h er o l eo ft u m o rn e c r o s i sf a c t o r a l - p h ai nt h en e u r o p a t h i cp a i ni n d u c e db y A l m b a r5 v e n
29、t r a lr o o tt r a n - s e c t i o ni nr a t 叨P a i n ,2 0 0 6 ,1 2 3 ( 3 ) :3 0 6 ( 2 0 0 7 - 0 9 2 1 收稿) ( 上接第1 4 4 页) O U tr a d i o g r a p h i ca b n o r m a l i t y :am e t a - a n a l y s i s 叽C l i nO r t h o pR e l a t R e s ,2 0 0 5 ,4 3 3 :1 6 6 3 D a r eA O ,D i a sM S ,L iV M a g n e t
30、 i cr b o n a n c ei m a s i n gc o r r e l a t i o n i np e d i a t r i cs p i n a lc o r di n j u r yw i t h o u tr a d i o g r a p h i ca b n o r m a l i t y 叨 JN e u r e s u r g , 2 0 0 2 ,9 7 0S u p p l ) :3 3 【4 T e w a r iM K G i f t iD S ,S i n g hP e ta 1 D i a g n o s i sa n dp r o g n o s
31、 t i c a t i o n o fa d u hs p i n a lc o r di n j u r yw i t h o u tr a d i o g r a p h i ca b n o r m a l i t yu s i n g m a g n e t i cr 6 镕o i l g l l e ei m a g i I l g :a n a l y s i s0 f4 0p a t i e n t s 啊S u r gN e u r o l , 2 0 0 5 ,6 3 ( 3 ) :2 0 4 5 S b e nH ,T a n gY ,H u a n gL ,e ta 1
32、 A p p l i e a t i o u so fd i f f u s i o n - w e i g h t e d M R Ii nt h o r a c i cs p i n a lc o r di n j u r yw i t h o u tr a d i o g r a p h i ca b n o r m a l i t y 叨h a tO r t h o p ,2 0 0 7 ,3 1 ( 3 ) :3 7 5 6 G u p t aS K , R a i n yl ( K h o s l aV K , e ta 1 S p i n a lc o r di n j u r
33、yw i t h o u tm - d i o g r a p h i c a b n o r m a l i t y i n a d u l t s 田S p i n a l C o r d , 1 9 9 9 ,3 7 ( 1 0 ) :7 2 6 7 G u e s tJ ,E l e r a k yM A ,A p o s t o l i d e sP J ,e ta 1 T r a u m a t i cc e n t r a lc o r d s y n d r o m e :R e s u l t so f s u r g i c a lm a n a g e m e n t J JN e u r e s u r g ,2 0 0 2 ,9 7 ( 1S u p p l ) :2 5 8 梅盛前,陈其听,陈维善,等无骨折脱位型颈髓损伤的手术治 疗阴临床骨科杂志,2 0 0 6 ,9 ( 4 ) :3 0 1 ( 2 0 0 8 - 0 3 - - 0 6 收稿) 万方数据
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