不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响.pdf
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1、2 0 0 8 年8 月 第2 0 卷上半月第1 5 期 中国民康医学 M e d i c a lJ o u r n a lo fC h i n e s eP e o p l e gH e a l t h A u g ,2 0 0 8 V 0 1 2 0F H MN o 1 5 【临床研究】 不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响 陈广斌1 ,谢玲2 ,林坚涛 ( 1 广东医学院附属医院药学部,广东湛江5 2 4 0 0 1 ;2 广东医学院组胚教研室;3 广东医学院中药研究所) 【摘要】 目的:观察应用与不应用多聚甲醛心脏灌注这两种不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响。方法:2 0 只新生
2、大鼠随机 化分为灌注组与非灌注组,每组各l O 只。灌注组经麻醉后经左心室插入灌流针,先灌注冰冻无菌生理盐水再灌注4 多聚甲醛,灌注同时切 开小部分肝脏断头取脑,多聚甲醛浸泡固定2 4 小时,再经7 0 、8 0 、9 5 、1 0 0 乙醇及二甲苯浸泡,石蜡包埋。非灌注组新生大鼠经麻醉后 直接断头取脑,其它固定方法同灌注组。进行石蜡切片H E 染色观察鼠脑组织结构。结果:灌注组脑组织切片组织结构清晰,无共染现象,组 织切片完整均匀,皮层及海马区组织、细胞形态正常,未见扩张的毛细血管。非灌注组大脑皮层及海马区组织水肿,细胞周围间隙增宽,胞体肿 胀,有些细胞境界模糊不清,核着色不良,部分视野可见
3、扩张的毛细血管,血管内有血细胞样物。结论:应用多聚甲醛心脏灌注对新生大鼠脑 组织的固定效果较好,是应用动物脑组织切片进行形态学研究实验的必不可少的步骤。 【关键词】新生大鼠;大脑;组织固定;组织切片 中图分类号】R 一3 3 2 文献标识码 B 新生大鼠脑组织切片是观察新生大鼠脑组织病理损伤 的主要实验方法之一。在进行脑组织切片之前,需对处死的 新生大鼠鼠脑进行固定。有文献表述直接把处死的鼠脑浸 泡在4 多聚甲醛溶液中固定,也有文献介绍应用在体心脏 灌流术经心脏灌注4 多聚甲醛后再浸泡固定方法。为 对比这两种方法对新生大鼠脑组织切片的影响,我们在进行 新生大鼠实验中分别应用这两种方法,观察直接
4、固定与在体 心脏灌流术后固定对新生大鼠脑组织切片的影响。 l 材料和方法 1 1 材料多聚甲醛由广州化学试剂厂生产,4 多聚甲醛 临用前配制,配制后过滤去除小的杂质,配制后放置到冰箱 中,冷却到4 后使用。M o t i cM e d 6 0 数码医学图像分析系 统及O l y m p u sC H C 一2 1 2 生物显微镜为日本公司生产。 1 2 动物分组7 日龄新生S D 大鼠性别不限,体重1 0 一1 5 g ,共2 0 只,由广东医学院实验动物中心提供。实验动物编 号,采用随机数字表进行随机化分为灌注组与非灌注组,每 组各1 0 只。 1 3 新生大鼠大脑组织固定与样本准备灌注组新
5、生大鼠 经乙醚吸人麻醉后固定于自制的手术木板上,置于解剖盘 中,开胸暴露并游离出心脏,切开右心房,经左心室插入灌流 针并固定,灌注同时切开小部分肝脏,先灌注冰冻无菌生理 盐水( 4 ) 3 0 5 0m L 直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出 液澄清,后再灌注冰冻( 4 ) 4 多聚甲醛3 0 5 0m L ,断头 取脑,多聚甲醛浸泡固定2 4 小时,再经7 0 、8 0 、9 5 、 1 0 0 乙醇及二甲苯浸泡,石蜡包埋。非灌注组新生大鼠经 乙醚吸人麻醉后直接断头取脑,多聚甲醛浸泡固定2 4 小时。 其它固定方法同灌注组。 1 4 样本切片与H E 染色切片自视交叉冠状平面开始, 切至出现海
6、马结构,片厚5p m ,每隔5 张取1 张,每个标本取 1 0 张,黏于多聚赖氨酸处理后的切片上,进行H E 染色观察 鼠脑组织结构。每张脑切片取左侧颞顶叶皮层及左侧海马 C A I 区中段随机各取6 个视野拍照。 2 结果 灌注组应用4 多聚甲醛灌注过程中观察到新生大鼠四 肢抽搐、四肢及尾巴僵硬、全身强直现象。灌注组新生大鼠 1 7 3 0 文章编号】0 3 6 9 ( 2 0 0 8 ) 1 5 1 7 3 0 0 2 大脑组织切片组织结构清晰,细胞核染色鲜艳,核无明显肿 胀,核浆对比度好,无共染现象,组织切片更加完整均匀,镜 下与石蜡切片相似,皮层及海马区组织、细胞形态正常。未 见扩张的
7、毛细血管。见图l 、图2 。非灌注组新生大鼠大脑 皮层及海马区组织水肿,细胞周围间隙增宽,胞体肿胀,有些 细胞境界模糊不清,细胞核着色不均,部分视野可见扩张的 毛细血管,血管内有血细胞样物。见图3 、图4 。 图1经多聚甲醛灌注后新生大鼠 大脑皮层( H E 4 0 0 ) 图2 经多聚甲醛灌注后新生大鼠 大脑海马C A l 区( H E 4 0 0J 万方数据 2 0 0 8 年8 月 中国民康医学 A u g ,2 0 0 8 第2 0 卷上半月第1 5 期 M e d i c a lJ o u r n a lo fC h i n e s eP e o p l e H e a l t h
8、V 0 1 2 0F H MN o 1 5 图3 未经多聚甲醛灌注的新生大鼠 大脑皮层( H E 4 0 0 ) 图4 未经多聚甲醛灌注的新生大鼠 大脑海马C A I 区( H E 4 0 0 ) 3 讨论 病理标本的制作和组织切片都必须先进行固定。如果 固定不佳,制片的其它程序将白费时间,没有很好的固定, H E 染色就难以进行。新生大鼠脑组织切片常用于对新生大 鼠脑形态学影响的研究,比如免疫组化、细胞凋亡等实验。 组织的固定是形态学研究中不可缺少的重要步骤。组织的 固定有以下作用:抑制细胞内溶酶体酶的释放和活性,防止 自溶;抑制组织中细菌的繁殖,防止组织腐败,使细胞的蛋白 质、脂肪、糖等各
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