中国鲎鲎抗脂多糖因子的提取、纯化及其活性的初步鉴定.pdf
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1、中国鲎鲎抗脂多糖因子的提取!纯化及其活性的初步鉴定 刘英“许伟群“苏东辉 摘要#目的从中国鲎血细胞中提取鲎抗脂多糖因子并初步鉴定其活性$方法采用超滤!浓缩!离子交 换层析等方法提取!纯化中国鲎鲎抗脂多糖因子“应用鲎变形细胞溶解物抑制试验测定其活性$结果初步纯化 得到的鲎抗脂多糖因子经% ; / , 5 - ; 2 - 收稿日期# 作者简介#刘英5 / , 2 0 7 “女“副教授“医学硕士A 尽管当代生物医学理论!技术与制剂发展迅速“ 败血症与内毒素休克仍是临床常见的高危病症“其 发病率与死亡率即使在发达国家亦居高不下“成为 困扰医学界的重大难题$探寻有效的抗内毒素物质 是相关学者努力的方向之
2、一B / C$鲎抗脂多糖因子 5 D E FG D G HI J K E D E L M L M D N H I O O P I Q E R ST I O K M Q “ 6 )6 U 7是 一种能结合并中和内毒素的蛋白质$已有的报道显 示“在动物实验中“在内毒素血症发生前或同时!甚 至在内毒素血症的晚期给予6 )6 U “都对实验动物 具有良好的保护作用“其保护作用可能与6 )6 U降 低脂多糖5 6 ( % 7诱导的炎症因子VW的产生并增加 抗炎因子X 6 / -的分泌有关B 离心 / -FE J “得 沉 淀 细 胞; - “以 无 热 原- 1 - FM D 6 VI a D 7洗 涤
3、; 次“沉淀细胞冻存于b3 -待用$ Y A c 溶解鲎血细胞方法参照文献B C $鲎血细胞 ; -悬浮于3 -F6无热原的- 1 - 离心; -FE J “ 得溶解液 = -F6 “沉淀物以相同抽提液再抽提FM D 6VI a D 7 ! 0 - .洗脱液 g5含/ 1 -FM D 6 VI a D 7 ! / - - .洗 脱 液 g5含 0管$应用考 马 斯 亮 蓝 * 2; 福建医科大学学报 期 万方数据 蓝!“ # $ %结合法测定其蛋白浓度 中和# % 3? 后加入鲎试剂% . #3 A ; 水浴箱孵育 /C后观察凝固结果 ? 0等 报 道 日 本 鲎! 9! :的 分 子 量 约
4、 为 - .= A ; B3 笔者选择C +4滤膜进行超滤$从 # # D “ 9E 6的结果可以看出3 鲎血细胞溶解物经超滤后3 能有效地截留大分子蛋白和 B$ 鲎变形细胞溶解物试验是目前检测内毒素最敏 感%最 好 的 方 法3可 测 出 微 量 的 内 毒 素F + 5 + - X -1 Y 8 /! G 3应用极其广泛$笔者对该试验进行改进3 用于测定! 9! :中和! “ #的活性$因为高浓度盐的 存在会使鲎变形细胞溶解物盐析3影响! 9! :活性 的检测3故在活性检测前必须进行除盐处理$本文应 用- +4滤膜超滤除盐并达到浓缩的目的3浓缩后应 用考马斯亮蓝 ED * . +结合法测定
5、其蛋白浓度为 -/Y 8 /! 3 共得- 5 +/! 3得率为- 8 C + + + + $纯化的中 国鲎! 9! :可中和! “ #凝固鲎变形细胞溶解物的 活性3 ! 9! :中 和 ! “ #的 比 例 约 为. + + Z - $与 ? 0 等A ; B报道的结果比较3其活性较低3原因可 能有两个操作过程对! 9! :活性的影响或中国鲎 ! 9! :中和! “ #的活性较日本学者等所用的东方 鲎或美洲鲎! 9! :的活性低3有待于进一步探讨$ 本研究所建立的中国鲎鲎抗脂多糖因子提取% 纯化的方法较为简便%实用$中国鲎! 9! :的理化 特性的研究正在进行中$ 参考文献 A - B 0
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