中药牛至单体体外抗解脲脲原体与人型支原体作用.pdf
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1、中药牛至单体体外抗解脲脲原体与人型支原体作用 严奉祥1, 朱炳阳1, 尹卫国2, 潭海平3, 迟秀玲1, 严宇桢3, 温曙光4, 李莲3, 颜涛1, 郭峰1, 吴移谋2 摘 要 目的 观察唇形科植物牛至 (满坡香) 单体抗解脲脲原体与人型支原体的作用, 揭示牛至单体更广的抗 病原微生物的范围, 寻找新的抗解脲脲原体与人型支原体药物。方法 采用直接液体培养基稀释方法, 测定中药牛至单 体对 60 株泌尿生殖道支原体的体外抗菌效应。结果 迷迭香酸的半数最低抑菌浓度为 1. 024 mg/ ml, 咖啡酸的半数最低 抑菌浓度为 0. 512 mg/ ml, 香荆芥酚的半数最低抑菌浓度为 0. 512
2、 mg/ ml, 百里香酚的半数最低抑菌浓度为 0. 512 mg/ ml。 结论 中药牛至单体具有较强抗血清型解脲脲原体或人型支原体的作用。 关键词 解脲脲原体; 人型支原体; 牛至单体;半数最低抑菌浓度 中图分类号 R 375; R 285. 5 文献标识码 A 文章编号 1001 -7089 (2006) 02 -0068 -03 Effect of Oregano Monomers against Ureaplasma Urealyticum and Mycoplasma Hominis in Vitro YAN Feng-xiang, ZHU Bing-yang, YIN Wei-g
3、uo, et al (Institute of Pharmacy and Pharmacology, University of Nanhua, Hengyang 421001, China) Abstract: Objective To determine the antibacterial effect of four monomers(rosmarinic acid, caffeic acid, cavacrol and thymol)extracted from Origanum vulgare L. herb(oregano)on Ureaplasma urealytium(UU)a
4、nd mycoplasma hominis(MH) , to discover oregano monomer wider extension against pathogeny microorganism and to find new drug against ureaplasma urealytium and mycoplasma hominis. Methods The MIC range and MIC50of four Oregano monomers against 30 strains of Uu and 30 strains of Mh from patient genito
5、urinary tract were determined using direct liquid culture medium dilution method. Results The MIC50of rosma- rinic acid, caffeic acid, cavacrol and thymol anti MU or Mh was 1. 024 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml and 0. 512 mg/ ml re- spectively. Conclusion The oregano monomers have all stronger
6、 anti - mycoplasma effect on arbitrary serotype of MU or Mh. Key words: Ureaplasma urealytium; Mycoplasma Hominis; Oregano Monomers; MIC50 泌尿生殖道支原体感染是非淋菌性尿道炎 (NGU) 的重要病因。近年来, 泌尿生殖道支原体所致 感染受到普遍重视。但随着抗生素和人工合成抗菌药 物的不断开发和使用及其滥用, 致使泌尿生殖道支原 体耐药性也不断变化。与此同时, 中草药受到越来越 重视, 为此, 笔者从中药牛至 (满坡香) 中筛选出四种 单体药物, 采用直接液
7、体培养基倍比稀释法检测其对 支原体的抗菌作用, 为临床上治疗泌尿生殖道支原体 感染筛选新药提供参考。 1 材料和方法 1. 1 培养基 解脲脲原体液体培养基按照文献 1方 法配制。1: 1 牛心消化液、 10% 新鲜酵母液、 20% 新 生小牛血清、 0. 002%酚红、 青霉素 20 000 U/ L。解脲 基金项目 湖南省卫生厅基金资助项目 (204062) 、 湖南省教育厅 重点基金资助项目 (03A040) 、 国家教育部重点基金资助项目 (204095) 、 国家 “十五” 攻关项目 (02EFN214300457) 作者单位 1 南华大学药物药理研究所, 湖南 衡阳 421001;
8、 2 南 华大学病原微生物研究所, 湖南 衡阳 421001; 3 南华大学, 湖南 衡 阳 421001; 4 山东农业大学, 山东 泰安 271018 作者简介 严奉祥 (1952 - ) , 男, 湖南省岳阳市人, 教授, 研究生 导师, 留美学者, 从事分子药理学和药物开发工作。 通讯作者 吴移谋, E-mail: yimouwu sina. com 脲原体培养基加 0. 1% 尿素, pH 调至 6. 0。人型支原 体培养基加 0. 1%精氨酸, pH 调至 6. 5 2。 1. 2 支原体株 30 株解脲脲原体 (UU) 和 30 株人型 支原体 (MH) 临床株为泌尿生殖道感染患
9、者标本中分 离获得, 经菌落形态、 底物分解、 pH 值、 生长速度初步 鉴定 1, 液体传代3 次后, -70短期保存备用。实验 菌液: 保存的备用菌液, 室温下融化, 用解脲脲原体液 体培养基或人型支原体液体培养基按 1: 100 稀释, 37培养 24 48 h 后达 106颜色变化单位 (Color changing unit, CCU) /0. 1ml 作为接种物 2。 1. 3 抗菌药物 迷迭香酸 (Rosmarinic acid) 、 咖啡酸 (Caffeic acid) 、 香荆芥酚 (Cavacrol) 、 百里香酚 (Thy- mol) 均为本所与中国昆明植物研究所和中科院
10、上海有 机所合作按文献 3, 4提取的四个牛至单体, 其纯度均 达 97%以上。迷迭香酸、 咖啡酸、 百里香酚分别用解 脲脲原体培养基和人型支原体培养基溶解, 配成4 096 g/ ml 浓度的母液作为应用液; 香荆芥酚用不到 1% 二甲基亚砜溶解(预实验用 1% 二甲基亚砜, 没有发 现有抗解脲脲原体与人型支原体的作用) , 后用解脲 脲原体培养基和人型支原体培养基稀释, 应用母液浓 度为 4 096 g/ ml。将应用母液 pH 调至各自培养基 86中国皮肤性病学杂志 2006 年 2 月第 20 卷第 2 期 Chin J Derm Venereol, Feb. 2006, Vol. 2
11、0, No. 2 pH 一致。 1. 4 实验方法 采用液体培养基稀释法 5。 1. 4. 1 加培养基 在 96 孔 (8 12) 聚苯乙烯板上, 用微量加样器向每一孔内均加入 100 l 培养基。 1. 4. 2 加药物 往第一孔内加入配制好的应用药液 100 l, 充分混匀后取 100 l 加入第二孔, 再吹打混匀 吸出 100 l 加入第三孔, 依次类推, 直至第十一孔, 充 分混匀后, 弃去 100 l。由此将药液倍比稀释至2 048 1 g/ ml。第十二孔不加药物作为对照。 1. 4. 3 加菌液 用支原体培养基按 1: 100 稀释 UU 与 MH 培养物, 混匀取 100 l
12、 加入每一个孔内。将加 好的 96 孔板盖上板盖, 轻摇混匀, 置于湿盒内, 37培 养箱孵育。 1.4. 4 结果观察 根据培养基颜色变化判断结果: 培 养基由黄色变为红色表明有支原体生长。24 h 内观 察 UU 生长变化, 如加药孔出现与对照孔相同的颜色 变化, 表示所加药物的对应浓度对 UU 无抑制作用, 24 h 仍不出现颜色变化为有效抑制 UU 生长的药物浓 度; 24 48 h 内观察 MH 生长变化, 如加药孔出现与对 照孔相同的颜色变化, 表示所加药物的对应浓度对 MH 无抑制作用, 48 h 仍不出现颜色变化为有效抑制 MH 生长的药物浓度。加药组以不出现颜色变化的最 小浓
13、度为最小有效抑制支原体生长的药物浓度 (MIC) 。实验采用 UU1, UU2, UU3, UU4 和 MH 标准 株作参照。 2 结果 2. 1 四个中药牛至单体的结构 见图 1。迷迭香酸、 咖啡酸、 香荆芥酚、 百里香酚分子量分别为 150. 22, 150. 22, 360. 31 和 180. 20。 迷迭香酸 (Rosmirinic acid) 咖啡酸 (Caffeic acid) 香荆芥酚 (Cavacrol) 百里香酚 (Thymol) 图 1 四个牛至单体的化学结构 2. 2 抗支原体效位 实验结果表明, 迷迭香酸、 咖啡 酸、 香荆芥酚、 百里香酚对解脲脲原体的 MIC50分
14、别为 1. 024 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml; 对人型支原体的MIC50分别为1 . 024 mg / ml , 0. 512 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml, 0. 512 mg/ ml。四个牛至 单体抗菌药物体外抗 UU 与 MH 作用测定结果见表1。 表 1 四种牛至单体体外抗 UU 与 MH 抗菌作用 支原体抗菌药MIC 范围(mg/ ml) MIC50(mg/ ml) UU (30 strains) 迷迭香酸0. 512 2. 0481. 024 咖啡酸 0. 256 1. 0240. 512
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