丹参酮对原代大鼠神经细胞缺血性损伤的保护作用.pdf
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1、丹参酮对原代大鼠神经细胞缺血性损伤的保护作用 何丽娜何素冰杨军王静刘超 (安徽省医学科学研究所安徽省生物医药重点实验室,合肥!“#$%) !#, ) : 由安徽省医学科学研究所药化室制备。氯 酯醒 (?;A:B;6:C56;,0DE) , 上海淮海药厂产品, 批 号: ,(#(#!。10D0 培养基及马血清购自 =9F: 公 司。连二亚硫酸钠 (/5!G!2) 为宜兴市化学制剂三 厂产品。葡萄糖氧化酶, 武汉中健科技发展有限公 司产品。硝普钠 (7:H9I? 694J:KJI779H;, G/) , 北京制 药工业研究所实验药厂产品。咖啡因 (5BB;96;, E5B) 、 /01. (!48
2、LA) 购自 G9M?5 公司。 多聚赖氨酸, 华美生物工程有限公司产品。胰蛋白 酶, 美国 19BB9 公司产品。 !3“动物N9745J 乳鼠, % O ! 日龄。由安徽省医学 科学研究所实验动物研究室提供, 合格证号: 皖医实 动准字第 #“ 号。 “方法 “3!原代大鼠皮层神经细胞的制备及培养参照 文献 - 方法改进。取 N9745J 大鼠乳鼠数只, 常规消 毒头颈部, 解剖大脑, 分离出脑皮层, P56Q7 液洗涤 “ 次, 剪碎成% ?“小块, 置#+!-R胰酶中, “(S消化% 8, 吸弃消化液,P56Q7 液洗涤 “ 次, 滴管吹打至细胞 分散。用 10D0 生长液 (含 %#
3、R马血清, %#R小牛 血清) 调整细胞浓度为 % T %#, U V %, 将细胞悬液加至 用 #+#%R多聚赖氨酸浸泡过夜的 ,$ 孔细胞培养板 中, “(S, #+#- E2!温箱中培养, 每周换液 ! 次。培 养至 H (, 换含 %#?:A UV %阿糖胞苷的 10D0 培养 液培养 * 8, 以抑制非神经原细胞增殖, 再换成 10D0 生长液, 继续培养至 % O % H 进行实验。 “3“药物对实验模型的保护作用 “3“3!药物对缺糖损伤模型的保护作用 $ 不同 浓度的丹参酮、 芍药总苷和氯酯醒 (10D0 维持液稀 释) 作用细胞 ! 8 后, 吸弃药液, 加入无糖 D5JA;
4、 液, 作用 %# 8 后, 换成 10D0 维持液, 继续培养 %* 8, 观 察实验结果。实验同时设损伤模型对照及正常细胞 对照。 “3“3“药物对缺氧损伤模型的保护作用 ( 将 %!中国药理学通报#$% ./ 0) 的无血 清 ()( 培养基, 作用 7 5 后, 再将培养基换成正常 维持液, 73%#温箱培养 06 5, 观察结果。 !9!9#药物对咖啡因损伤模型的保护作用 ? 将 已作用细胞 # /,+-.:9/,5. ,+ ,BRHBSG“SA,B T!+,- ./ 0 2U1,E-QR,IH T% CG,SHRSA,B G“SA,T K 2U1,VA“ T% CG,SHRSA,B
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