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1、收稿日期2005 - 05 - 23修回日期2005 - 07 - 12 *基金项目广东省科技计划项目 (No. 2004B30601001) 通讯作者 Tel:020 - 81332410;E- mail: 文章编号 1000 - 4718 (2005) 09 - 1701 - 04 乌司他丁对失血性休克大鼠的保护作用 及其机制的研究* 蒋龙元1, 杨炼红2, 钟娃1, 何志捷1, 常建星1, 余涛1, 王彤1, 黄子通1 (中山大学附属第二医院 1急诊科,2神经科,广东 广州 510120) 摘要目的: 探讨乌司他丁对失血性休克大鼠的保护作用及其机制。方法:采用前瞻对照研究, 用 Chau
2、dry 方法 (略作改动) 复制大鼠失血性休克模型, 60 min 后回输血液和生理盐水进行复苏, 部分加用乌司他丁治疗。检测 不同时相的血清肿瘤坏死因子 -(TNF-) 、 白细胞介素 - 6 (IL - 6) 、 丙二醛 (MDA) 及超氧化物歧化酶 (SOD) 的表达 水平。结果:大鼠失血性休克与复苏后血清 TNF-、 IL - 6 及 MDA 含量均明显升高, SOD 含量减少。用乌司他丁治 疗后大鼠的血压、 心率明显改善; 血清 TNF-、 IL- 6 及 MDA 含量均明显下降, SOD 含量无明显变化。结论:乌司他 丁通过抑制细胞因子的生成、 减少氧化损伤而对失血性休克大鼠起保护
3、作用。 关键词 乌司他丁;失血性休克;肿瘤坏死因子 -;白介素 - 6;丙二醛;超氧化物歧化酶 中图分类号 R363文献标识码 A Protective effect and mechanism of ulinastatin on rats with hemorrhagic shock JIANG Long - yuan1,YANG Lian - hong2,ZHONG Wa1,HE Zhi - jie1,CHANG Jian - xing1, YU Tao1,WANG Tong1,HUANG Zi - tong1 (1Department of Emergency,2Department o
4、f Neurology,The Second Affiliated Hospital of Sun Yat - sen University,Guangzhou 510120,China) ABSTRACT AIM:To investigate the protective effect of ulinastatin on rats with hemorrhagic shock. METHODS:A prospective,controlled animal study was designed. The model of hemorrhagic shock in rats was produ
5、ced by Chaudry method. After 60 min,rats were resuscitated by transfusion of shed blood and normal saline,but a half of them were treated with ulinastatin. At different time points after reperfusion,the levels of tumor necrosis factor- alpha (TNF-) ,interleukin- 6 (IL- 6) ,malondialde- hyde (MDA)and
6、 superoxide dismutase (SOD)in serum were detected. RESULTS:The levels of TNF-,IL- 6 and MDA sig- nificantly increased and the activity of SOD decreased. In the ulinastatin - treated groups,the blood pressure and heart rate were obviously improved;the levels of TNF-,IL- 6 and MDA significantly decrea
7、sed and the activity of SOD had little change after hemorrhagic shock and reperfusion. CONCLUSION:Ulinastatin has a protection effect on rats with hemorrhagic shock by sup- pressing the production of inflammatory factors and reducing oxidative damage. KEY WORDS Ulinastatin;Hemorrhagic shock;TNF-;IL-
8、 6;MDA;SOD 失血性休克是临床常见的急危重症, 如不及时 救治, 常危及生命。尽管临床已形成一些治疗规范, 但成功率还不能令人满意, 仍有不少顽固性休克发 展至多器官功能不全而死亡。本研究建立失血性休 克与复苏模型, 观察了蛋白酶抑制剂乌司他丁治疗 失血性休克大鼠的疗效并探讨其可能的机制,为指 导临床用药、 提高休克的抢救成功率, 提供一定的理 论依据。 材料和方法 1动物分组与模型的复制 1.1动物及分组清洁级 Wistar 大鼠 70 只, 雌雄 各半, 每只体重 200 - 250 g, 由广东医学动物实验中 心提供 (粤检字号: 2004A022) 。大鼠随机分为正常 1071
9、中国病理生理杂志Chinese Journal of Pathophysiology2005, 21 (9) : 1701 - 1704 对照组、 休克组、 休克复苏后 1、 3、 6、 12 h 组, 共 6 组。 正常对照组和休克组各 7 只; 休克复苏组每组 14 只, 其中用生理盐水复苏 7 只, 用乌司他丁复苏 7 只。 实验前大鼠禁食 12 h, 自由饮水。 1.2模型制作及取材采用 Chaudry 1方法 (略作 改动) 复制大鼠失血性休克模型。腹腔注射无菌乌 拉坦 (1 200 mg/kg) 麻醉。将大鼠仰卧固定, 无菌剥 离颈动脉和颈静脉, 进行插管。颈动脉管经三通阀 与血压
10、换能器及 10 mL 注射器相连接, 插管后立即 注入 0.3 mL 肝素生理盐水 (含肝素 300 U) , 通过 BL - 410 生物机能实验系统连续描记血压、 心率。经颈 动脉放血至平均动脉压 (MAP) 降为 (40 3) mmHg, 继 续放血或回输部分血液维持此血压。维持 60 min 后, 7 只休克早期大鼠, 予乌司他丁25 000 U/kg (2 mL NS 稀释) 静脉推注 (5 min 内) , 并回输放出的血液和 等量生理盐水, 速度 0.05) , 但仍 显著低于生理盐水组 (P 0.05)(表 3、 4) 。 讨论 乌司他丁 (ulinastatin) 是从健康成
11、年男性尿中分 离纯化的尿胰蛋白酶抑制剂, 能够同时抑制多种蛋 白酶、 糖和脂水解酶; 抑制心肌抑制因子 (MDF) 的产 生; 稳定溶酶体膜; 抑制炎症介质的释放等多种特殊 的药理性质 2 。本研究通过放血使大鼠处于休克状 态, 并维持休克状态1h, 应属于休克早期, 然后对部 表 1各组血清中 TNF- 含量比较 Tab 1Comparison of serum TNF-level in various groups (ng/L.-x s. n = 7) GroupNormalShock (1 h)Resuscitation (1 h)Resuscitation (3 h)Resuscita
12、tion (6 h) Resuscitation (12 h) Normal saline12.1 1.060.7 1.6*109.2 14.4*72.0 1.7*56.6 4.4*40.0 1.8* Ulinastatin71.5 6.7*#51.5 2.4*#45.8 2.7*#32.0 1.9*# *P 0.05 vs normal group;P 0.05 vs normal saline group. 3071 分休克早期大鼠用乌司他丁、 回输放血及生理盐水 进行复苏, 另一部分仅回输放血及生理盐水进行单 纯液体复苏, 成功建立大鼠失血性休克与复苏模型, 并记录不同时间两组的血压与心
13、率变化。首先, 从 单因素的角度分别独立考察生理盐水组和乌司他丁 组复苏前后的血压、 心率变化, 发现两组休克早期大 鼠复苏后血压、 心率均能明显改善, 并且随着复苏时 间的延长有逐渐下降的趋势。其次, 在评价乌司他 丁的疗效方面, 考虑到复苏时间亦可影响疗效, 因 此, 综合这两方面的因素, 更能客观地评价乌司他丁 的治疗效果。故本研究进一步采用两因素方差分 析, 将乌司他丁、 复苏时间与血压、 心率进行分析。 结果发现, 乌司他丁和复苏时间均可影响疗效 (P 0.01) , 但乌司他丁的 P 值较小, 提示乌司他丁对疗 效的影响更大。因此, 本研究可证实在失血性休克 与复苏中, 乌司他丁能
14、改善休克早期大鼠的血压与 心率, 并能维持血压和心率的稳定。Nakajima 等 3 报 道, 乌司他丁在内毒素休克中可通过抑制血浆磷脂 酶 A2, 从而起到减轻血管收缩, 维持平均动脉压和红 细胞速率的作用; Takada 等 4在用液体治疗过度出 血的兔中亦发现, 乌司他丁治疗组与对照组相比较, 血管直径、 血流速度、 血流速率、 尿量均维持较好, 显 示乌司他丁有利于维持微循环血流量。本研究结果 再次表明乌司他丁具有改善失血性休克的血流动力 学作用。 失血性休克除病因外, 有多种因素促进了休克 的发生发展, 是一个复杂的病理生理过程。多种体 液因子生成增加, 如肿瘤坏死因子 (TNF)
15、、 白介素 - 1 (IL- 1) 、 白介素 - 6 (IL - 6) 、 白介素 - 8 (IL - 8) 、 血 栓烷素 A2(TXA2) 等水平的明显升高, 以及呼吸爆发 时释放的氧自由基均参与了休克的发展过程, 导致 组织细胞破坏受损, 引起重要器官功能不全 5 。在 本研究中亦观察到休克复苏后1 h、 3 h、 6 h 和12 h 时 TNF-、 IL- 6 和 MDA 的含量显著高于正常组, SOD 活性降低。在失血性休克早期大鼠复苏中加用乌司 他丁治疗, TNF-、 IL - 6 和 MDA 的含量较生理盐水 组有显著减少 (P 0.01) , 但 SOD 的活性变化不大, 说
16、明乌司他丁虽然不能提高 SOD 的活性, 但能够抑 制细胞因子和氧自由基的生成, 从而对失血性休克 起到治疗作用。 参考文献 1 Chaudry IH. Rat and mouse models of hypovolemic- traumat- ic shock A . In:Schlag G,Redl H. eds. Pathophysiology of shock,sepsis and organ failure M . Berlin:Springer- Ver- lag,1993. 371 - 379. 2 曾文红,白国强. 乌司他丁研究进展 J . 中华肝胆外 科杂志,2001,7 (
17、1) :52 - 54. 3 Nakajima K,Goto Y. Differentiation of the anti- shock effect of ulinastatin from steroid hormone, by the continuous observa- tion of microcirculation dynamics J . Circ Shock,1992,36 (4) :284 - 289. 4 Takada K,Komori M,Notoya A,et al. Effect of ulinastatin on microcirculation during excessive hemorrhage using fluid therapy J . In Vivo,2003,17 (2) :129 - 135. 5 Tamion F,Richard V,Bonmarchand G,et al. Reduced syn- thesis of inflammatory cytokines by a free radical scavenger af- ter hemorrhagic shock in rats J . Crit Care Med,2000,28 (7) :2522 - 2527. 4071
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