临床产多种β内酰胺酶大肠埃希菌的生物学研究.pdf
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1、中华医院感染学杂志2 0 0 5 年第 1 5 卷第 7 期 8 1 9 论著 。 临床产多种 P - 内酞胺酶大肠埃希菌的生物学研究 管希周, 刘又宁, 罗燕萍, 周光, 余丹阳, 陆思静 ( 解放军总医院, 北京 1 0 0 8 5 3 ) 摘要: 目的对临床分离出产多种p 一 内酞胺酶的大肠埃希菌, 进行生物学以及耐药特性研究。 方法用三维试 验、 等电聚焦以及酶抑制试验以及接合试验, 对临床分离的1 株对多种 卜内酞胺类抗生素高度耐药的大肠埃希菌 进行分析, 用E - T E S T 法进行最小抑菌浓度( M I C ) 测定。 结果该菌株三维试验为阳性显示高产A m p C酶, 等电
2、 聚焦以及酶抑制试验表明, 该菌株能够产3 种等电点( P I ) 分别为5 . 4 , 8 . 2 及9 . 0 的件 内酞胺酶, 等电点为9 . 0 的卜 内 酞胺酶能够被氯哇西林抑制, 而不能被克拉维酸抑制; 等电点为8 . 2 和5 . 4 的卜内酞胺酶能够被克拉维酸抑制而不 能被氯哇西林抑制, 而且接合实验表明这两种酶的特性可以被转移到受体菌; 检测表明该菌株对环丙沙星、 阿米 卡星、 青霉素类、 酶抑制剂合剂、 三代头抱菌素类甚至头抱毗厉耐药, 但对碳青酶烯类的亚胺培南和伊他培南均敏 感。 结论我院临床分离大肠埃希菌中已经出现同时产A m p C , E S B L s 等多种广谱
3、 件 内酞胺酶的菌株, 并造成对 多种三代头抱菌素及头抱西丁耐药, 对临床的抗生素治疗带来严重威胁。 关键词: 大肠埃希菌; p 一 内酞胺酶; A m p C ; E S B L s ; 抗生素; 耐药 中图分类号: R 3 7 8文献标识码: A文章编号: 1 0 0 5 - 4 5 2 9 ( 2 0 0 5 ) 0 7 - 0 8 1 9 - 0 4 Mu l t i p l e 卜 L a c t a m a s e s P r o d u c i n g C l i n i c a l I s o l a t e s o f E s c h e r i c h i a c o l
4、i G UA N X i - z h o u , L I U Y o u - n i n g , L UO Y a n - p i n g , Z HO U G u a n g , S HE D a n - y a n g , L U S i - j i n g ( G e n e r a l Ho s p i t a l o f P L A, B e i j i n g 1 0 0 8 5 3 , C h i n a ) A b s t r a c t ; O B J E C T I V E T o s t u d y t h e b i o l o g l y a n d r e s i
5、s t a n c e c h a r a c t e r o f m u l t i p l e卜 l a c t a m a s e s p r o d u c i n g c l i n i c a l i s o l a t e s o f E s c h e r i c h i a c o l i . ME T H O D S卜 L a c t a m s h i g h l y r e s i s t a n t c l i n i c a l i s o l a t e s o f E . c o l i w e r e s t u d i e d b y t h r e e -
6、 d i m e n s i o n a l m e t h o d s , i s o e l e c t r i c f o c u s i n g ( I E F ) a n d c o n j u g a t i o n e x p e r i m e n t . T h e n t h e MI C o f t h i s s t r a i n w a s e x a m i n e d b y E - s t r i p e . R E S U L T S T h i s i s o l a t e w a s s h o w e d a s h i g h A m p C p
7、r o d u c i n g b y t h r e e - d i m e n s i o n a l m e t h o d . A n d t h e n , I E F f o u n d t h a t t h i s s t r a i n c o u l d p r o d u c e t h r e e 卜 l a c t a m a s e s w h i c h P I w a s 5 . 4 , 8 . 2 a n d 9 . 0 , r e s p e c t i v e l y . T h e 卜 l a c t a m a s e w h o s e P I w
8、a s 9 . 0 c o u l d b e i n h i b i t e d b y c l o x a c i l l i n b u t n o t b y c l a v u l a n a t e a n d t h a t w h o s e P I w a s 8 . 2 a n d 5 . 4 c o u l d b e i n h i b i t e d b y c l a v u l a n a t e b u t n o t b y c l o x a c i l l i n . T h e c o n j u g a t i o n e x p e r i m e
9、n t i n d i c a t e d t h a t t h e g e n e o f t h e卜 l a c t a m a s e w h o s e P I w a s 8 . 2 c o u l d b e t r a n s f e r a b l e . T h e s t r a i n w a s r e s i s t a n t t o c i p r o f l o x a c i n , a m i k a c i n a n d m o s t o f p e n i c i l l i n s , c e p h a l o s p o r i n s ,
10、件 l a c t a m s c o m b i n e d w i t h t h e件 l a c t a m s i n h i b i t o r s a n d e v e n c e f e p i m e . I t w a s s u s c e p t i b l e t o i m i p e n e m a n d e t r a p e n e m . C O N C L U S I O N S T h e E . c o l i s t r a i n s s i m u l t a n e o u s l y p r o d u c i n g A m p C ,
11、 E S B L s a n d o t h e r b r o a d s p e c t r u m份 l a c t a m a s e s h a v e b e e n i s o l a t e d c l i n i c a l l y i n o u r h o s p i t a l . T h e y a r e r e s i s t a n t t o m a n y p e n ic il l i n s , c e p h a l o s p o r in s a n d c e f o m y c i n s a n d h a v e b r o u g h t
12、 u s g r e a t m e n a c e i n a n t i b i o t i c t h e r a p y . K e y w o r d s ; E s c h e r i c h i a c o l i ; 件 L a c t a m a s e s ; A m p C ; E S B L s ; A n t i b i o t i c s ; D r u g r e s i s t a n c e 细菌产生R - 内酞胺酶是导致对R - 内酞胺类抗生 素耐药的主要原因。目前临床引起的抗生素耐药 X9 0 %是因为件 内酞胺酶的介导而产生。 而份 内酞 胺酶的种类已经
13、超过上千种, 其中最引人注目的当 属超广谱 件 内酞胺酶( E S B L s ) 和A m p C R 一 内酞胺 酶, 它们已经在世界各地被发现, 尤其是在革兰阴性 致病菌主要是肠杆菌家族中 1 . 2 7 。有关这些 件 内 收稿日期: 2 0 0 5 - 0 1 - 1 6 ; 修回日期: 2 0 0 5 - 0 4 - 2 0 酞胺酶的报道在国内也屡见不鲜, 但细菌往往都产 1 -2 种件内酞胺酶, 而同时产 3 种 压内酞胺酶并包 括 1 种E S B L s 和A m p C 的报道尚不多见。2 0 0 2 年从 我院住院患者分离到的1 株对三代头抱菌素及头袍 西丁高度耐药的大肠
14、埃希菌, 研究表明其不但高产 A m p C , 而且产一种超广谱 R 一 内酞胺酶( E S B L s ) 和 一种广谱酶。为此我们进一步探讨了其生物学特性 以及各类抗生素和该类细菌相互作用关系, 以期对 fr1h 床预防、 治疗产多种 民内酞胺酶细菌引起的感染 8 2 0 C h i n J No s o c o mi o l Vo l . 1 5 No . 7 2 0 0 5 提供参考。 1 材料与方法 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 菌株受试菌为我院从 2 0 0 2 年 5 月, 骨科 住院患者自 创口分离的 1 株大肠埃希菌, K - B 法药 物敏感试验显示对多种三代头抱
15、耐药, 并且对头抱 西丁高度耐药, 并提示对亚胺培南敏感。质控菌株: 大 肠 埃 希 菌 A T C C 2 5 9 2 2 ;铜 绿 假 单 胞 菌 A T C C 2 7 8 5 3 ; 标准产T E M4 , S H V 3 , S H V 5 大肠埃希 菌( 美国I o w a 大学抗感染研究中心) , 标准产A C T - 1 的大肠埃希菌, 标准产A m p C酶的阴沟肠杆菌 0 2 9 M。 接合试验受体菌: N K 5 4 4 9 ( E . c o l i 1 1 4 3 7 ) ( 利福平、 蔡咤酸高耐, L A C阴性) 。 1 . 1 . 2 E - T E S T 试
16、 纸环 丙 沙 星 ( 0 . 0 0 2 - 3 2 f i g / m l ) , 庆大霉素( 0 . 0 1 6 - 2 5 6 tL g / m l ) , 亚胺培 南和伊他培南( 。 . 0 0 2 3 2 p .g / m l ) , 其余受试抗生素 浓度范围均为( 0 . 0 1 6 -2 5 6 j u g / m l ) 。 药敏纸片: 头抱 他 咤 ( 3 0 ji g / m l ) ,头 抱 他 咤/ 克 拉 维 酸 ( 3 0 t o g / m l / 1 0 n/ m l ) ; 头抱唾厉( 3 0 p .g / m l ) , 头抱 唾厉/ 克拉维酸( 3 0
17、r g / m l / 1 0 K g / m l ) , 1 . 1 . 3 试剂与培养基选择性培养皿: 9 0 m m中国 蓝平皿( 含利福平1 0 0 ji g / 耐、 蔡吮酸1 5 0 F L 酬耐、 头抱唾肪2 p g / m l ) , 9 0 m m MH ( 含头抱0 1 厉2 F i g / ml) L B 培养基( L u r i a - B e r t a n i ) , 4 0 0 o A m p h o l i n e ( p H 3 . 5 - 1 0 ) ( P h a r ma c i a ) , 烯酞胺( S ig m a ) , 丙烯酞胺( S i g m
18、 a ) , N , N 一 甲叉双丙 过硫酸按( S ig m a ) , T E M E D ( S ig m a ) 。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 Q - 内酞胺酶的提取和三维试验R - 内酞胺 酶的提取按文献所述, 对临床分离菌和接合子均提 取R - 内酞胺酶并行三维试验。 三维试验具体作法: 用过夜培养的 A T C C 2 5 9 2 2取 3 -5个菌落制成 0 . 5 Ma c F a r l a n d 菌液, 接种于9 0 m m MH平皿中, 头抱西丁纸片贴于平皿中央用过火灭菌的手术刀片 从距头抱西丁纸片边缘5 m m处向外切出一宽约 1 m m 的狭缝, 用
19、微量加样器取 4 0 -5 0 川受试菌酶 粗提物加人狭缝中。3 7 0C 孵育1 6- 1 8 h 后观察结 果, 沿切缝出现 A T C C 2 5 9 2 2的箭头样向内生长为 三维试验阳性。 1 . 2 . 2 E S B L s 表型确认试验 3 同时用头抱他 吮、 头抱他吮/ 克拉维酸的纸片和头抱唾厉、 头抱唾 厉/ 克拉维酸的纸片对受试菌以及接合子进行检测, 分别测量头抱他陡、 头抱唾肪和头抱他吮/ 克拉维 酸、 头抱ps肪/ 克拉维酸的抑菌环直径, 其中任意一 种抗生素加克拉维酸的抑菌环直径大于不加克拉维 酸的抑菌环直径5 m m 或5 mm即可确认该试验菌 株为产E S B
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- 临床 多种 内酰胺 大肠 埃希菌 生物学 研究
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