【SN商检标准大全】SNT 2058-2008 进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法 酶联免疫法.pdf
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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖犜 进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法 酶联免疫法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犺 犾 狅 狉 犪 犿 狆 犺 犲 狀 犻 犮 狅 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犈 狀 狕 狔 犿 犲 犾 犻 狀 犽 犲 犱 犻 犿犿 狌 狀 狅 狊 狅 狉 犫 犲 狀 狋 犪 狊 狊 犪 狔 发布 实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 免费标准网( w w w . f r e e b z .
2、 n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 前 言 本标准的附录为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位: 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人: 张晓峰、 施伟良、 朱振江、 方莹、 董强。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 犛 犖犜 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 进出口蜂王浆中氯霉素残留量测定方法
3、 酶联免疫法 范围 本标准规定了蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的酶联免疫测定方法。 本标准适用于蜂王浆及冻干粉中氯霉素残留量的测定。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件, 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准, 然而, 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件, 其最新版本适用于本标准。 分析实验室用水规格和试验方法( , : ) 方法提要 本标准以三氯乙酸来沉淀蜂王浆中的蛋白质和提取残留的氯霉素, 然后以 净化。微孔板中 包被有绵羊抗兔 抗体, 加入特异性抗体(
4、兔抗氯霉素抗体) 、 酶标记氯霉素、 氯霉素标准品或样品提 取液后, 特异性抗体与包被的绵羊抗兔 抗体结合, 同时游离氯霉素和酶标记氯霉素竞争性的与特 异性抗体结合。通过洗涤除去未结合的氯霉素和酶标记氯霉素, 然后加入底物显色, 用酶标仪测定吸光 度, 根据吸光度值得出试样中氯霉素的含量。 试剂和材料 除注明外, 所有试剂均为分析纯, 水为 规定的一级水。 氯霉素检测试剂盒( 参见附录) 。 甲醇。 三氯乙酸: 三氯乙酸以水溶解并定容至 。 甲醇: 甲醇( ) 以水定容至 。 异辛烷三氯甲烷混合液: 异辛烷、 三氯甲烷以 ( 体积比) 的比例混合。 小柱: ( 或相当产品) , ( ) 。 氯
5、霉素标准品: 纯度 。 氯霉素标准品溶液的配制: 称取 氯霉素标准品, 以甲醇定容至 , 配制 的 工作液, 于条件下保存。 空白样品: 选用已确切知道不含有氯霉素的蜂王浆样品, 作为空白样品。用于随样测试的加标监 控实验。 仪器 酶标仪。 道移液器: 。 单道移液器: , , 和 。 混合振荡器。 犛 犖犜 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 高速低温离心机: 。 固相萃取装置。 氮吹仪。 具塞试管: 。 电子天平: 。 试样的制备和保存 试样的制
6、备 原始样品总量不得少于 , 蜂王浆充分搅拌均匀后, 将样品分成两等份; 冻干粉采用四分法, 将 样品分成两等份。分好的样品装入洁净容器, 加封并做标识。 试样的保存 试样放置 条件下保存。 分析步骤 ) 提取 称取 王浆样品, 置于 具塞试管中, 加入 三氯乙酸( ) , 充分混匀, 离心 , 取上层液备用。 小柱( ) 依次用 甲醇( ) 和 水活化, 取 上层 液上柱, 依次以 水, 甲醇( ) 洗柱, 去除残留的液体, 再用 甲醇( ) 洗脱, 将洗 脱液收集于一干净试管, 氮气吹干, 以 样品稀释缓冲液( 试剂盒提供) 溶解残留物, 最后加入 异辛烷三氯甲烷混合液( ) 萃取, 离心
7、 , 取上层水相进行分析供 检 测用, 最后稀释倍数为。王浆冻干粉则用水以比例稀释, 充分浸泡( 以上) 后, 称取 按照 上述王浆前处理方法进行提取, 最后稀释倍数为。 ) 给出该信息是为了方便本标准的使用者, 并不表示对某一产品操作步骤的认可。如果其他产品的操作步骤有 不同, 需经实验评估后采用。 测定条件 酶标仪测定条件 酶标仪测定波长为 。 洗板条件 人工洗涤次数次以上, 每次加入洗涤液量为 。自动洗板可以预定次周期。 操作条件 所有操作应在室温下( ) 进行, 氯霉素试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温( ) 后方可使用。 测定步骤 将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上, 记录标准品
8、及样品等在微孔架上的位置。 吸取 零标准缓冲液于孔 、 ; 并吸取 零标准缓冲液于孔 、 ; 分别吸取 氯霉素标准溶液( 浓度分别为: 、 、 、 、 、 ) 于孔 、 、 ; 吸 取 样品溶液于其余微孔中。测定中吸取不同的试剂和样品溶液时应更换吸头。 分别吸取 氯霉素酶标记物溶液于除 、 外的每一个微孔。 分别吸取 氯霉素抗体溶液于除 、 外的每一个微孔。 用封口膜封孔条, 并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀。 将酶标板置于避光温育。 倒出孔中的液体, 将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打, 以除去孔中过多的残液, 但不能使微孔干 犛 犖犜 免费标准网( w w w . f r e e b z
9、 . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 燥, 然后, 立即用洗涤缓冲液按 条件进行洗板。要注意不能使微孔干燥。 迅速加入 底物溶液于每一个微孔底部, 然后, 持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀 后, 于 避光温育 。 迅速加入 反应终止液于每一个微孔, 然后, 持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后, 将微孔架置于酶标仪中, 在 处测量吸光度( 应在加入反应终止液 内读取吸光度) 。 平行试验 按以上步骤, 对同一标准溶液、 同一样品溶液均应进行平行试验测定。 空白试验 除不称取试样外, 均按上述步骤进行。
10、阳性质控 每次测定均应做一个用空白样品添加氯霉素标准( ) 的监控样品测定, 以确定实验过程的准 确性。 结果计算 从含有标准品和待测样品的吸光度( ) 值中, 减去空白孔 、 的平均 值。标准品和待测 样品的 平均值除以零标准( 、 ) 的平均 值, 再乘以 。计算出各标准液和样品的百分比吸 光度值。零标准为 ( 最大百分比吸光度值) , 其他 值为最大吸光度值的百分数。 以吸光度百分比值( 犅犅) 为纵坐标() , 氯霉素标准溶液浓度( ) 对数值为横坐标, 绘制标 准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的氯霉素浓度后, 结果按式( ) 进行计算: 犡犮犞 犿 () 式中: 犡 样品中
11、氯霉素的残留量, 单位为微克每千克( ) ; 犮 从标准工作曲线上得到的样品中氯霉素浓度, 单位为纳克每毫升( ) ; 犞 样品溶液的最终定容体积, 单位为毫升( ) ; 犿 样品溶液所代表的最终试样质量, 单位为克() 。 也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算, 所得结果表示至一位小数。 确证试验 如被测样品中为阳性结果时, 应用其他方法进行确证。 本方法测定低限和回收率 方法测定低限 。 回收率 本方法中氯霉素添加浓度及回收率的试验数据: 添加量为 时, 平均回收率为 ; 添加量为 时, 平均回收率为 ; 添加量为 时, 平均回收率为 。 犛 犖犜 免费标准网( w w w . f
12、r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 附 录 犃 ( 资料性附录) 氯霉素试剂盒( 荷兰犈 犝 犚 犗 犇 犐 犃 犌 犖 犗 犛 犜 犐 犆 犃公司产品) ) 犃 试剂盒组成 犃 预包被抗体的 孔板: 条孔。 犃 氯霉素标准溶液: 、 、 、 、 、和 。 犃 重组零标准缓冲液。 犃 氯霉素酶标记物冻干粉: 根据氯霉素试剂盒中说明, 可用重组零标准缓冲液配制成氯霉素酶 标记物溶液。 犃 抗氯霉素抗体冻干粉: 根据氯霉素试剂盒中说明, 可用重组零标准缓冲液配制成抗氯霉素抗 体溶液。 犃
13、底物溶液。 犃 稀释缓冲液: 可用水倍稀释后使用。 犃 洗涤浓缩液: 可用水 倍稀释后使用。 犃 反应终止液。 试剂盒应在避光条件下保存, 溶解后的酶标记物和抗体溶液需 条件冻存。 犃 标准校正曲线 标准校正曲线见图 。 狔 狓 犚 图犃 标准校正曲线 ) 给出该信息是为了方便本标准的使用者, 并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果, 需经实 验评估后使用这些等效产品。 犛 犖犜 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 犉 狅 狉 犲 狑
14、狅 狉 犱 犃 狀 狀 犲 狓犃狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪
15、 犳 狋 犲 犱犫 狔犣 犺 犲 犼 犻 犪 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲 犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犉 犲 狀 犵 狓 犻 犪 狅犣 犺 犪 狀 犵,犠 犲 犻 犾 犻 犪 狀 犵犛 犺 犻,犣 犺 犲 狀 犼 犻 犪 狀 犵犣 犺 狌,犢 犻 狀 犵犉 犪 狀 犵, 犙 犻 犪 狀 犵犇 狅 狀 犵
16、 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狊狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狅 犳犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉狋 犺 犲 犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犛 犖犜 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 标准最全面 免费标准网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅
17、 犳犮 犺 犾 狅 狉 犪 犿 狆 犺 犲 狀 犻 犮 狅 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀 狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犈 狀 狕 狔 犿 犲 犾 犻 狀 犽 犲 犱 犻 犿犿 狌 狀 狅 狊 狅 狉 犫 犲 狀 狋犪 狊 狊 犪 狔 犛 犮 狅 狆 犲 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊狅 犳犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犫 狔犈 犔 犐 犛 犃 犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳犮 犺 犾 狅 狉 犪 犿 狆
18、 犺 犲 狀 犻 犮 狅 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犪 狀 犱狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔狆 狅 狑 犱 犲 狉 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲 狋 狅狋 犺 犲狊 犮 狉 犲 犲 狀犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犺 犾 狅 狉 犪 犿 狆 犺 犲 狀 犻 犮 狅 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀 狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔 狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔狆 狅 狑 犱 犲 狉 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏
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