亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态与多发性骨髓瘤易感性的关系.pdf

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1、中华血液学杂志2 0 0 6 年4月第2 7 卷第4 期C h i n J H e m a t o l , A p r i l 2 0 0 6 , V o l 2 7 , N o . 4 示 1 一 2 个 H L A位点不相合并不影响植人和增加 G V H D的 发生。 2 3 例标危组患者， 1 年总生存率 6 0 . 9 %, 2年总生存 率3 9 . 1 % ; 5 例高危组患者， 1 年总生存率4 0 . 0 %, 2 年总生 存率2 0 . 0 %。 标危组生存率高于高危组生存率， 但两者差异 无统计学意义( P 0 . 0 5 ) 。严重感染是 C B T的主要并发症 和死亡原因

2、。严重感染与C B T 免疫功能重建和造血功能恢 复缓慢有关。因此， 有效控制感染是保证 U C B T成功的重要 因素。与骨髓移植相比， C B T的白血病复发率不高。这是 由于脐血中N K细胞数量多， 移植物抗白血病( G V L ) 作用较 强。 志谢: 感谢北京大学人民医院、 中国医学科学院血液病医院、 解 放军第三O七医院、 解放军海军总医院、 解放军兰州军区总医院、 浙 江大学医学院第一附属医院、 河南省肿瘤医院给予的支持和合作 参 考 文 献 G l u c k m a n E , B r o x m e y e r H E , A u e r b a c h A D , e t

3、 a l . H e m a t o p o i e t ic r e - c o n s t i t u t i o n i n a p a t i e n t w it h F a n c o n i s a n e m i a b y m e a n s o f u m b i l i c a l c o r d b l o o d f ro m a H L A - i d e n t i c a l s i m b l i n g . N E n g l J M e d , 1 9 8 9 ， 3 2 1 : 1 1 7 4 - 1 1 7 8 Wa g n e r J E , B a

4、 r k e r J N , d e F o r T E , e t a l . T r a n s p l a n t a t i o n o f u n r e l a t e d d o n o r u m b i l i c a l c o r d b l o o d i n 1 0 2 p a t i e n t s w i t h m a l i g n a n t a n d n o n m a - l i g n a n t d i s e a s e ; in fl u e n c e o f C D 3 4 c e l l d o s e a n d H L A d i s

5、 p a r i t y o n t r e a t m e n t - r e l a t e d m o rt a l i t y a n d s u r v i v a l . B l o o d , 2 0 0 2 ，1 0 0 : 1 6 1 1 - 1 61 8 ( 收稿 日 期: 2 0 0 5 - 0 5 - 3 0 ) 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态与多发性骨髓瘤易感性的关系 姜妮陈宝安祭美菊侯鹏陆祖宏高冲丁家华 孙耘玉王骏程坚赵刚 国外研究发现亚甲基四氢叶酸还原酶( M T H F R ) 基因 C 6 7 7 T 多态改变与多发性骨髓瘤( M M) 易感相关。由于基因 多态

6、与疾病易感的相关性有人种、 地域的差异， 我们对中国 人群进行了相关研究。 病例和方法 1 病例3 0 例患者为2 0 0 4年 1 月至2 0 0 4年 1 1 月在南京 中大医院、 江苏省人民医院和南京鼓楼医院就诊的 M M患 者， 发病年龄( 5 1 . 5士 9 . 4 ) 岁， 男 1 8例( 6 0 . 0 %) ， 女 1 2例 ( 4 0 . 0 %) ， 所有患者均经骨髓检查、 骨骼X线检查、 血清单 克隆免疫球蛋白或( 和) 尿本周蛋白检查确诊， 并排除已行异 基因造血干细胞移植者。1 5 7 名健康对照为上述医院的同期 健康查体人群， 年龄( 4 8 . 6 士 9 .

7、9 ) 岁， 男9 8 名( 6 2 . 4 %) ， 女 5 9 名( 3 7 . 6 %) 。两组年龄和性别差异无统计学意义( P值 分别为0 . 1 0 0 和0 . 8 0 2 ) 。标本均为 E D T A抗凝外周血。常 规酚一 氯仿法萃取基因组 D N A o 2 采用已报道的引物序列 I 对M T H F R C 6 7 7 T 位点扩增。 反应条件: 9 4预变性5 m i n , 9 43 0 s , 6 2 3 0 s , 7 2 3 0 s , 3 5 个循环， 7 2延伸7 m i n ; 反应体系( 5 0 jJ ) : 1 0 m m o l/ L T r i s

8、- H C I ( p H 8 . 3 ) ， 5 0 m m o l / L K C I , 2 . 0 m m o V L M 9 C 1 2 , 2 0 0 t m o l/ L 各种d N T P , 1 . 2 5 U T a q 酶。 P C R产物纯化后点样于 通信作者: 陈宝安， E m a i l : b a c h e n s e u . e d u . c n 氨基玻片， 4 0 0 m J 紫外交联、 8 5 干烤2 h 固定， 9 5 变性3 m i n ， 加荧光探针混合液( 6 7 7 C C + 6 7 7 TT) 3 7杂交2 h , 2 x S S C -0

9、 . 1 % S D S , O . 1 x S S C -0 . 1 % S D S 、 灭菌双蒸水先后清洗 各3 m i n 后行双色荧光扫描。探针序列: 6 7 7 C C探针( 野生 型) 为5 - C y 3 - C G G G A G C C G A T TT- 3 ; 6 7 7 TT 探针( 突变型) 序 列为5 - C y 5 - C G G G A G T C G A T TT- 3 ， 居中碱基对应待检测的 S N P 位点。 3 统计学处理实验组和对照组的 M T H F R基因型的频率 差异以扩检验 确 定。 以比 值比 ( O R ) 以 及9 5 % 可 信度(

10、9 5 % C I ) 表示基因型与 M M发病风险的相关性。O R值以非条件 的 )g i s t ic 回 归模型计算。 所有统计分析均用S P S S 1 1 . 5 软件 计算。 结果 作者单位: 2 1 0 0 0 9 南京， 东南大学医学院附属中大医院血液科 ( 陈宝安、 姜妮、 高冲、 丁家华、 孙耘玉、 王骏、 程坚、 赵刚) ; 东南大学分 子与生物分子电子学实验室( 祭美菊、 侯鹏、 陆祖宏) M T H F R基因型频率在两组中的分布及 M T H F R基因多 态与M M发病风险的关系见表1 , m m组的6 7 7 C 和6 7 7 T 等 位基因频率为 4 8 .

11、3 %和 5 1 . 7 %， 对照组相应基因频率为 6 6 . 9 %和3 3 . 1 %， 差异有统计学意义( 犷= 7 . 5 1 , P二 0 . 0 0 6 ) 。 对照组基因频率符合 H a r d y - W e n b e r g 平衡， 具有群 体代表性。 m m组6 7 7 C C , 6 7 7 C T , 6 7 7 TT 基因型频率分别为 3 0 . 0 % , 3 6 . 7 % , 3 3 . 3 %， 对照组相应频率为4 5 . 9 %, 4 2 . 0 %、 1 2 . 1 %。 将6 7 7 C C 基因型发生M M的风险设定为1 . 0 0 ， 则 6 7

12、 7 T T 的发病风险是6 7 7 C C的8 . 9 2 倍， 差异有统计学意义 ( 9 5 % C I 1 . 0 6一 7 5 . 2 4 , P = 0 . 0 0 6 ) 。 中 华血液学杂志2 0 0 6 年4 月第2 7 卷第4 期C h i n J H e m a t o l , A p r i l 2 0 0 6 , V o l 2 7 , N o . 4 表1 M T H F R基因型频率在M M患者及对照组中的分布及其与M M发病风险的关系 M M组( 3 0 例)对照组( 1 5 7 名) 基因型O R* ( 9 5 % a C I ) 尸值 例数百分率( %)例数百

13、分率( %) 901，卫1 . rJ224 441eel多 ，UQ工勺 7U18 07，、0 .: 011，0 凡，、，、7 MT HF R 6 7 7 CC C T 1 1 T T 1 0 C T +下r 1 . 0 0 0 . 7 1 ( 0 . 2 4 一 2 . 0 6 ) 8 . 9 2 ( 1 . 0 6 一 7 5 . 2 4 ) 1 6 9 ( 0 . 7 5一 3 . 8 5 ) 0 . 3 4 9 0 . 0 0 6 0 . 2 0 8 注: * 经过性别、 年龄校正 讨论 目 前认为大多数肿瘤的发生是基因一 环境相互作用引起 的， 环境因素是肿瘤发生的始动因素， 而个体的

14、遗传特征决 定肿瘤的易感性。流行病学研究表明叶酸缺乏增加肿瘤发 病风险， 但叶酸摄人正常而代谢障碍的个体也可能对肿瘤易 感。国外有研究表明 M T H F R多态影响 M M的发病风险。 G o n z a le z - O r d o n e z 等 发现m m患者组的6 7 7 C C 基因型明显 少于对照组( 分别为1 9 %和4 6 %; P= 0 . 0 1 ) ， 其中1 5 例I g G 型M M中仅有 1例为6 7 7 C C , Y a n a m a n d r a等 ， 丁 也发现 M T H F R 6 7 7 C C对 M M有保护作用。这与我们的 M T H F R

15、 6 7 7 T T 是M M的易感因素的研究结果相一致。有些研究虽 然统计分析未能得出M T H F R多态与M M发病风险有关的结 论， 但均发现 M M组的 6 7 7 C C基因型频率较对照组低。 G o n z a l e z - F r a il e 等4 的研究中M T H F R 6 7 7 C C 在患者组和对 照 组中 的 分 布频 率分 别为3 4 . 4 %和4 8 . 1 % , L i n c z 等 的 研 究中 则分别为4 2 . 2 %和4 8 . 5 % o 叶酸代谢异常导致多种肿瘤的发生， 这与叶酸的两种作 用有关: 提供甲基使 d U M P转变为d T

16、 M P ， 参与D N A的合 成; 作为甲基供体维持基因组甲基化的独特模式。M T H F R 是叶酸代谢的关键酶， C 6 7 7 T突变使该酶活性显著下降， 造 成S 腺昔蛋氨酸生成减少， 而S 腺昔蛋氨酸为基因组甲基化 提供甲基基团。某些基因的甲基化异常， 特别是癌基因低甲 基化可直接影响肿瘤的发生， 在许多人类的肿瘤组织和癌变 的早期阶段都发现有基因组 D N A的低甲基化现象， 而且此 种低甲基化现象常常伴有癌基因如c - m y c 和c - H a - r a s 过度表 达以 及 抑癌基因如p 5 3 的突变 。 M T H F R 6 7 7 TT是发生 M M的危险因子

17、， 提示M M的发生可能与某些基因的低甲基 化有 关。 O h t s u k i 等 曾 发现。 - m y 。 基因 在M M细 胞中的 表 达比在外周血淋巴细胞中增高3 0一 5 0 倍， 而该基因的第三 外显子甲基化水平降低。 抽样误差会影响研究结果。我们的样本数虽少， 但 6 7 7 TT 基因型比例在两组中差异显著， 难以完全用抽样误差 解释。另外M T H F R基因多态与疾病易感关系的研究结果还 常受叶酸摄人水平、 基因频率等多因素的影响。例如几乎所 有研究者都认为M T H F R 6 7 7 T T 是急性淋巴细胞白血病的保 护因素， 而充足的叶酸摄人和高变异基因频率可使这

18、种影响 消失! 8 ,9 。 我们在研究中未能对叶酸水平进行分析， 但如此 显著的差异也许提示该研究人群的叶酸摄人不足。我们发 现南京地区健康人群的6 7 7 T等位基因频率为3 3 . 1 %， 与 G o n z a l e z - F r a il e 等 4 报道的3 1 . 7 %相近， 说明基因频率可能 不是影响我们研究结果的因素。 志谢: 感谢江苏省人民医院血液科李建勇主任和鼓楼医院血液 科欧阳建主任对该研究的帮助 参 考 文 献 F r o s s t P , B l o m H J , M i l o s R , e t a l . A c a n d i d a t e g

19、 e n e t i c r i s k f a c t o r f o r v a s c u l a r d i s e a s e ; a c o m m o n m u t a t i o n i n m e t h y l e n e t e tr a h y d r o f o l a t e r e - d u c t a s e . N a t G e n e t , 1 9 9 5 ， 1 0 ; 1 1 1 - 1 1 3 . G o n z a l e z - O r d o n e z A J , F e rna n d e z - C a r r e i r a J

20、M, F e rna n d e z - A l v a r e z C R , e t a l . N o r m a l f r e q u e n c ie s o f t h e C 6 7 7 T g e n o t y p e s o n t h e m e t h - y l e n e t e t r a h y d r o f o l a t e r e d u c t a s e ( M T H F R ) g e n e a m o n g l y m p h o p r o l if - e r a t i v e d i s o r d e r s b u t n o

21、 t i n m u l t i p l e m y e l o m a . L e u k L y m p h o m a , 2 0 0 0 , 3 9 : 6 0 7 -61 2 . Y a n a m a n d r a K , B o c c h i n i J A J r , T h u r m o n T F . M e t h y l e n e t e t r a h y d r o f o - l a t e r e d u c t a s e 6 7 7 C C n o r m a l g e n o t y p e m a y p r o t e c t a g a i

22、 n s t m u l t i p l e m y e l o m a . B r J H a e m a t o l , 2 0 0 3 ， 1 2 0 : 1 0 9 4 - 1 0 9 5 . G o n z a l e z - F r a i l e M I , G a r c i a - S a n z R , M a t e o s M V , e t a l . M e t h y l e n e t e t - r a h y d r o f o l a t e r e d u c t a s e g e n o t y p e d o e s n o t p l a y a

23、 r o l e i n m u l t i p l e m y e - l o m a p a t h o g e n e s i s . B r J H a e m a t o l , 2 0 0 2 ， 1 7 : 8 9 0 - 8 9 2 . L i n c z L F , S c o r g ie F E , K e r r i d g e 1 , e t a l . M e t h io n i n e s y n t h a s e g e n e ti c p o l y m o r p h i s m M S A 2 7 5 6 G a l te r s s u s c e

24、 p t i b i l i t y t o f o l l i c u l a r b u t n o t d i f - f u s e l a r g e B - c e l l n o n - H o d g k i n s ly m p h o m a o r m u l t i p l e m y e l o m a . B r J H a e m a t o l , 2 0 0 3 ， 1 2 0 : 1 0 5 1 - 1 0 5 4 . P o g r i b n y I P , B a s n a k i a n A C , M i l l e r B J , e t a

25、l . B r e a k s in g e n o m i c D N A a n d w it h i n t h e 的3 g e n e a r e a s s o c i a t e d w i t h h y p o m e t h y l a t i o n i n l i v e r s o f f o l a t e / m e t h y l - d e f i c i e n t r a t s . C a n c e r R e s , 1 9 9 5 ， 5 5 : 1 8 9 4 - 1 9 01 . O h t s u k i T , N i s h i t a

26、n i K, H a t a m o c h i A , e t a l . A n a l y s i s o f m e t h y l a t i o n in t h e c - M Y C g e n e i n f i v e h u m a n m y e l o m a c e l l l i n e s . B r J H a e m a t o l , 1 9 9 1 ， 7 7 : 1 7 2 - 1 7 9 . K r a j i n o v i c M, L a m o t h e S , L a b u d a D , e t a l . R o l e o f M

27、 T H F R g e n e t i c p o l y m o r p h i s m s in t h e s u s c e p t i b i l i t y t o c h i l d h o o d a c u t e l y m p h o b l a s t ic l e u k e m i a . B l o o d , 2 0 0 4 , 1 0 3 : 2 5 2 - 2 5 7 . C h i u s o l o P , R e d d i c o n t o G , C i m i n o G , e t a l . M e t h y l e n e t e t

28、 r a h y d r o f o - l a t e r e d u c t a s e g e n o t y p e s d o n o t p l a y a r o l e i n a c u t e l y m p h o b l a s t i c l e u - k e m i a p a t h o g e n e s i s i n t h e I t a l i a n p o p u l a t i o n . H a e m a t o l o g i c a , 2 0 0 4 ， 8 9 : 1 3 9 - 1 4 4 . ( 收稿日 期: 2 0 0 5 - 0 9 - 1 9 )