人NYESO1基因的原核表达、纯化和初步应用.pdf
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1、2005年第32卷第11期 人 N“#$%?= A$2$ Zhang WenminXiao GangZhang Menget al Department of Pathology, Zhongshan Medical College of Sun Yat-sen University, uangzhou 9B1+1:pGEX4T-1空 质 粒EcoRI单 酶 切 ;2: pGEX/ESO1重组质粒EcoRI单酶切;3:pGEX/ESO1重组质粒 EcoRI/XhoI双酶切;4:pGEX/ESO1重组质粒PCR 图1pGEX/ESO1重组质粒PCR和酶切分析 M:低分子量蛋白Marker;1:p
2、GEX4T-1诱导前;2:pGEX4T- 1诱导后3:pGEX/ESO1重组质粒诱导前;45:pGEX/ESO1 重组质粒诱导4h;67:融合蛋白亲和层析纯化后 图2pGEX/ESO1重组质粒诱导表达和纯化 图3纯化的融合蛋白western blot鉴定 2.4肝细胞癌患者血清ELISA检测 将50份肝癌患者血清和20份正常人血清按 1:100、1:500、1:1000、1:5000稀释后加入到用NY- ESO-1蛋白包被的ELISA板,以1:500为最适稀释 度。正常人血清A450值为0.055 30.019 1,肝癌患者 中4例血清NY-ESO-1抗体阳性(8%),A450值分别 为0.2
3、18 4、0.184 2、0.205 4、0.162 4。 3讨论 随着免疫学、 分子生物学与基因工程技术的发 展,多种肿瘤抗原的发现,肿瘤免疫治疗再度成为国 际上肿 瘤 治 疗 的 热 点 之 一 。1997年Chen利 用 SEREX技术,在食管癌中首次鉴定出NY-ESO-1基 因并命名之6,该基因定位于人染色体Xq28上,其 转录单位大小约0.8kD,含3个外显子。NY-ESO-1 基因编码180个氨基酸, 分子量约18kD。 已证实 NY-ESO-1不表达于人体正常组织 (睾丸除外),而 在胃癌、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤和肝细胞癌等多 种肿瘤组织中特异表达7,8。 多项研究表明NY-E
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- NYESO1 基因 表达 纯化 初步 应用
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