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1、主堡堡盐塑堡苤查! 塑! 生筮! ! 鲞筮! 翅鱼! 也丛塑盟! 堡:垒P 旦! ! 塑! :y ! ! ! 堡:竺 富,幼儿的内抑制能力差,情绪不稳定,缺少控制,常表现为 强烈的反抗和高度的紧张。临床上1 3 岁的婴幼儿在进行 静脉输液时不能按需要制动,因恐惧而哭吵不停、四肢乱动、 不听安抚,且婴幼儿血管腔细小、血管壁薄,容易刺破血管, 四肢采用直立式搂抱法,能使患儿有安全感,能很快使患儿 的情绪稳定。因为当婴幼儿受到惊吓,感到委屈或需要关心 时,常表现为攀附在看护者身上而表达出依恋的心理“ 。 综上所述,在d , J L 静脉输液操作过程中,特别是在婴幼 儿静脉穿刺完毕固定后3 0m i
2、n 内,患儿由于恐惧,处于高度 紧张而出现强烈对抗,对搂抱姿势进行干预,头皮穿刺者采 用斜卧搂抱法,四肢穿刺者采用面对面直立式搂抱法,可明 显减少液体渗漏的发生率,减少反复重新穿刺,减轻了患儿 的痛苦,同时也减轻了护理人员的工作,从而提高工作效率, 促进护患关系。 人牙髓细胞体外培养的实验研究 陈艳卿周艳林丽珠蔡淦英 参考文献 马如娅基础护理北京:人民卫生出版社,2 0 0 2 :1 5 2 陶艳儿科急诊留观输液的安全护理管理当代护士:学术版, 2 0 0 6 ( 2 ) :2 9 自翠云,肖凤英影响小儿静脉输液成功的因素分析国际护理 学杂志,2 0 0 6 ,2 5 ( 1 0 ) :8 0
3、 0 金雪花,姜英今,全英梅,等小儿静脉输液渗漏的原因分析吉 林医学,2 0 0 4 ,2 5 ( 7 ) :7 2 凌云,项志英z b J L 静脉输液外渗的原因分析及护理对策护理 与康复,2 0 0 7 ,6 ( 9 ) :6 2 1 - 6 2 2 卢兰娇周围静脉穿刺无痛技术的进展护理与康复,2 0 0 4 ,3 ( 3 ) :1 6 1 李维心理健康百科全书上海:上海教育出版社,2 0 0 4 :1 2 5 杨博,李陕区新生儿静脉输液护理进展现代护理,2 0 0 7 ,1 3 ( 1 6 ) :1 5 4 5 ( 收稿日期:2 0 0 7 1 2 1 9 ) ( 本文编辑:何成伟) 【
4、摘要】目的建立人牙髓细胞体外培养模型并研究特异性波形丝蛋白在培养细胞中的表达。 方法采用组织块法体外培养人牙髓细胞,取新鲜拔除的无龋、无感染的智齿或正畸牙的牙髓。 结果经7 8d ,在组织块周围有细胞游出,1 4d 后细胞铺满瓶底,可以进行传代。一般可传5 8 代。持续生长4 0d 左右。S A B C 免疫组织化学检测培养细胞波形丝蛋白的表达阳性。结论通过组 织块法可以成功培养人牙髓细胞,为牙髓细胞的进一步研究奠定了生物学基础。 【关键词】牙髓细胞;体外培养;实验研究 牙髓是一种特殊的疏松结缔组织,是由细胞和细胞间质 组成,参与牙体硬组织的营养、代谢和修复过程。2 0 0 6 年6 月我中心
5、从入牙髓细胞的原代培养、传代、生长曲线作初步 的实验观察,为牙髓细胞的分化、牙本质形成、牙髓钙化,以 及相关的调节因素的进一步研究提供生物学基础。 一、材料与方法 1 主要试剂和仪器:本实验所用培养液为一D E M E 培养 液( 含2 0 0m l L 的胎牛血清,G i b c o 公司,美国) ,含青霉素 1 0 0U m l ,链霉素1 0 0 斗g m l ,2 5m l 培养瓶,0 2 5 胰蛋白酶 ( G I B C O ) 超净工作台( 苏州净化器厂生产) ,全自动二氧化碳 培养箱( p r e c i s i o n ,U S A ) ,倒置相差显微镜( N i k o n
6、,J a p a n ) 。即 用型S A B C 试剂盒,波形丝蛋白单抗、角蛋白单抗。 2 人牙髓细胞培养:采用组织块法进行原代培养人牙髓 细胞,所有标本来源于深圳市人民医院口腔医学中心外科 门诊,新鲜拔除的无龋、无感染的智齿或正畸牙,取出新鲜牙 髓,用生理盐水反复、大量冲洗,然后置于无菌双抗H a n k s 液 作者单位:5 1 8 0 2 0 暨南大学第二临床医学院、深圳市人民医院 口腔医学中心 通信作者:陈艳卿,E m a i l :x i a o k u n c h o n 9 1 2 3 s i n a c o m 中,带回无菌超净台,在无菌状态下用眼科剪将牙髓剪成 1m m 2
7、 大小,以相距0 5 1 0c m 的距离平铺在2 5l l l l 培养瓶 中,将培养瓶底朝上放置于培养箱中,2h 后,将培养瓶翻转, 加0 【一D E M E4m l ,每3 天换1 次培养液,在倒置显微镜下观察 细胞游出及生长情况。当细胞长满瓶底后,开始传代。传代 时吸除原培养液,向瓶内滴加0 2 5 胰蛋白酶液2m l ,在显 微镜下观看细胞质回缩,细胞成圆形后立即终止消化。吸除 消化液,加培养液,吹打贴壁细胞制成细胞悬液。按1 :3 的 比例分装入2 5m 1 培养瓶中传代培养。 3 细胞计数:取第4 代人牙髓细胞,消化液消化后加入 C t D E M E ,吹打悬浮,以1 0 1
8、0 5 的数量接种于直径3 5m m 培养皿中,置培养箱中孵育,接种后第1 ,2 ,4 ,6 ,8 ,1 0 天分别 取出,消化液消化,吹打使细胞制成全部悬浮,用红细胞计数 板在显微镜下计数,绘制生长曲线。 二、结果 1 牙髓细胞培养:本实验用组织块法原代培养人牙髓细 胞,在组织块接种8d 左右细胞游出,细胞呈长梭形或三角 形,细胞边界清楚,胞质丰满、透明,约1 4 d 后细胞铺满瓶底, 随细胞密度增大,相邻细胞开始接触,细胞排列呈片状、束状 或旋涡状。铺满瓶底后可以进行传代,一般可传5 8 代。 n 心 口 H 瞪 口随 1 0 7 8 见图1 3 。 图1组织块法原代培养人牙髓细胞,细胞
9、呈放射状游出组织块( 2 0 ) 图2 传代细胞开始贴壁生长,初期为圆形, 然后连成片,细胞渐成梭形( 2 0 0 ) 主望理岱塑堡盘查;螋! 生箜! ! 鲞筮! 塑垦! 亟! 丛型盟! 望:垒P 至! ;塑! :坠! ! 兰:堂:! 图3 细胞传代过程中,经胰蛋白酶液消化中的细胞, 细胞收缩成圆形( 2 0 ) 2 绘制生长曲线:培养细胞呈指数生长,接种2 5d 后 细胞生长良好,增殖旺盛,第6 天,细胞细胞铺满瓶底,第7 8 天细胞增长减慢,近于停止。在显微镜下计数并绘制生长 曲线,见表1 及图4 。 表1体外培养人牙髓细胞生长情况 培养天数细胞数( 1 0 4 m 1 ) 3 细胞来源的
10、鉴定:采用免疫组织化学S A B C 法检测细 胞波形丝蛋白和角蛋白的表达,以确定细胞来源。培养的牙 髓细胞呈典型的成纤维样细胞,抗波形丝抗体阳性,角蛋白 染色阴性,见图5 ,6 。 图4 培养时间与细胞数量关系 图5 细胞波形丝蛋白染色阳性,胞浆显色为棕色( 1 0 0 ) 图6 细胞角蛋白染色阴性,胞浆显色为蓝色( 2 0 0 ) 讨论体外培养人牙髓细胞是牙髓生物学、药理和毒理 学等研究领域中常采用的实验材料。 牙髓组织中的细胞成分主要由成纤维细胞、造牙本质细 胞、组织细胞和未分化的间充质细胞等组成。牙髓组织参与 牙体硬组织的营养、代谢及牙本质的形成拉o 。在本实验中, 原代培养的牙髓细胞
11、及传代培养的细胞均成典型的成纤维 细胞的形态,梭形或三角形,细胞边界清楚,胞质丰满、透明, 细胞排列呈片状、束状或旋涡状J 。培养的牙髓细胞呈明显 的波形丝蛋白阳性,胞制质内染色的波形丝分布均匀,角蛋 白染色呈阴性,说明细胞来源于中胚层。 细胞生长曲线是细胞生长状态的重要指标之一,表明细 胞生长的快慢及活跃程度,指导细胞的传代和进行实验的最 佳时间。传代后的2 5 d 细胞生长良好,增殖旺盛,实验应 在这一段时间进行。 本实验成功建立了人牙髓细胞体外培养的模型,为以后 进行牙髓生物学、牙科材料毒理学的研究奠定了生物学基础。 参考文献 1 鄂征组织培养和分子细胞学技术北京:北京出版社,1 9 9 4 : 8 2 2 樊明文牙体牙髓病学北京:人民卫生出版社,2 0 0 0 :1 6 3 3 彭彬体外牙髓细胞的生物学特征中华I z l 腔医学杂志,1 9 9 4 , 2 l ( 5 ) :2 9 1 - 2 9 4 ( 收稿日期:2 0 0 7 1 2 1 9 ) ( 本文编辑:高丛菊) 如n弱:3加牾
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