人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达.pdf
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1、收稿日期!“#$“%$1;446?1/46+:=6H4I4:2B6?1/;:=6?/312:=6H4I4:2B6+!“#%“#%, 作者简介!王淑辉!=O6P:1N 通讯作者!张 成“中山大学附属第一医院神经科“电话=O6S8NQESI/NIR45/R2158I3210B;L$ 9XR2158I3210B;L9XR21658I3210B;2158I3210B;B:B:B6:1363B464/d:2813;64e024II;1312616B/N:2158I3210B;B8N:=6I34N64=I6 +2J.AI, !“ #!$%L9X6P:I65;E4I345678624I32;3;1=4:I4
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4、质粒转染入1/$%P中及其表达 +-U-=-+P大鼠骨髓1/$%的体外分离培养乙醚麻醉 下将/*大鼠引颈处死#置于?a酒精浸泡约+,7;,!#?b$4U饱和湿度培养箱中培养 =,C后更换培 养液#以后每=,C换液+次#+V,C细胞生长至融合“ 经V-U?b胰酶消化#以+cU传代培养#其后一般=,C传 代+,次#至RM代时杂细胞较少“ 选取生长良好的R? 代细胞#V-U?b胰酶消化后传入UM孔培养板进行基 因转染实验“ 另消化R?代细胞#R./,洗涤=,次#加入 荧光标记抗体$*+8!$*U!$*MM!$*M?# 室温避光 孵育# 应用流式细胞仪检测1/$%,的表面标记“ +-U-=-U,质粒的
5、细胞转染采用脂质体转染技术N参阅 :;BO9AE67;!#?b$4U,孵育培养?,5# 吸弃转染液# 加入含有 +Vbd./的*1W1液+,7:#继续孵育UM,5后#加入 含有XM+Y,MVV!“L7:的完全培养基筛选#每=,C换液 +次#共筛选=周“ 同时设空质粒对照组“ +-U-=-=,LB?-V引物设计软件设计引 物#上游引物?e(X$XXX$XG$GG$(=e下游引 物?e(GXX$GGX$G$(=e # 预计产物=+Y, 8#引物由英骏生物技术有限公司合成“ 用!;TB:法分别提取转染重组质粒和空质粒细 胞的总A!BCD%E!B5;U! 延伸+,7;U!延伸+V,7;+荧光倒置显微镜
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- 微小 萎缩 蛋白 基因 转染 大鼠 骨髓 间充质 干细胞 及其 表达
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