人巨细胞病毒临床分离株US28基因的研究.pdf
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1、中 华实验和临 床 病 毒学 杂志 2 0 0 6 年 3月第 2 0 卷 第 1 期 C lo n e s ,: J E x p C li n V ir o l , M - h 2 0 0 6 , V o l 2 0 , n . . 论 著 人巨细胞病毒临床分离株 U S 2 8 基因的研究 夏畅何蓉阮强郭津津刘庆吉耀华魏洪斌陈淑荣刘兰青 【 摘要 目的研究 U S 2 8 基因在几童人巨细胞病毒临床分离株中的多态性, 探讨多态性与致病 性间的关系。方法对临床分离株进行 P C R扩增和 H M A - S S C P分析, 选取有代表性的毒株进行克隆 和测序, 对测序结果进行序列分析。结果
2、测序结果可见 U S 2 8 核酸变异比较普遍, 变异集中在序列 的两端, 大部分变异是同义突变, U S 2 8的重要功能基团高度保守; 氨基酸变异使临床株的U S 2 8编码 蛋白的二级结构呈现出3 种新构象; 未发现U S 2 8基因多态性与临床致病性的联系; C .n B a n k序列与临 床分离株序列的氨基酸高突变位点不尽相同。结论U S 2 8 基因变异在临床分离株中普遍存在, 临床 株序列与 G e n B a n k 序列在氨基酸的高突变位点上存在差异; 实验室标准株 V H I J E株比A D 1 6 9株和 T O WN E株更接近临床株 I 主题词 巨细胞病毒; 多态
3、性 ( 遗传学) ; 受体, 趋化因子; 3 tr 因, U S 2 8 P o l y mo r p h is m s o f H C MV U S 2 8 g e n e o f t h e c lin ic a l is o l a t e s f r o m c h i ld r e n X IA C h a n g , H E R o n g , R U A A Q i a n g , C U O J u t -fi n, L I U Q ia g, J I Y a a - h u m , W E H o u g - h Pn , C H E N S h u - r u n g ,
4、L I U L n ro- g i n g . T h e V ir o lo g y L a b o r at o r y of 7 7 m N a tio n a l Key L a b o r a to r y , M i n i s tr y of H e a lt h 户; C o n g e n ita l M a lf a r n u a i o n R es e a r c h . T h e Second 1f il ia t e d H o s p ita l of C h im es M e d ic a l U n iv e rs i ty , S l n :n y a
5、 n g日 0 14 , C h i n a C o rr e s p o n d i n g a u t h o r : H e R u n g T e l : 0 2 4 6 2 8 5 6 7 8 4 , E - m a il : h e r on r o n g C? y a hoo . c o n. c a ( A b s t r a c t O b j e c ti v e 1 o s tu d y t h e p o l y o rp h is m o f h u m a n c y m m g a l o v ir u s U S 2 8 g e r m in o lu ld
6、r e n a n d i n v e s t ig a t e t h e r e l a t io n s h i p b e tw e e n t h e p o ly m o 甲h i s . a n d p a t #ro g e n e s is . Me t h o d s T h e P Q - P C R w a s c a 币司n u t to d e te r m in e th e D N A q u a n ti ty o f c l i n ic a l is o l a t e a n d t h e n th e s e g m e n t a l P C R
7、a n d L I M A - S S C P w e re p e r fo r m e d t o te s t th e m u ta ti o n o f U S 2 8 g e n e . 17a, t y p ic a l i s o l a t e s f r o m d if fe r e nt d i s e a s e s w e r e s e le c t e d t o c lo n e a n d s e q u e n c e , th e n th e r e s u lt s w e r e a n a lye d . R e s u lt s T h e n
8、 u c l e i c a c i d m u ta tio n is f ro 甲 re n t a m o n g t h e s e q u e n c e o f C S 2 8 , th o s e m u ta tio n s fo c u s o n t h e t w o e n d s o f I IS 2 8 , b u t m o s t o f t h e m o r e s e n s e m u ta t io n . T h e i m p o r ta n t fu n c ti o n a l g ro u p s o f U S 2 8 a rc h i
9、g h ly c u n s e r , e d . T h e a m i n e a c i d m u t a ti o n o f so , 。 ,s o la ce s re s u lt e d i n t h e c h a n g e o f s e c o n d s , s t r u c tu r e , b u t th e p h y lo g e n e t ic t re e a n a ly s is d id n o t s h o w a n y c l e a r a s s o c ia tio n b e t w e e n t h e p a t h
10、 o g e n e s is a n d th e, d is t ri b u t io n o 1 c l in ic a l is o la te s . f lo e c o m p a r is o n o f U S -1 8 s e q u e n c e s f r o m A MS p a ti e n ts w it h t h e s e q u e n c e s f ro m c h ild r e n i n o u r s tu d y s h o w e d th a t b o t h wq u e n , .s h a v e t h e ir o w n
11、 s p e c if ic h i g h m u t a t io n p o i n t s . C o n c lu s i o n T h e r e p o ly m o r p h is m a m o n g t h e H C M V U S 2 8 g e n e o f c li n ic a l is o la e S fr o m c h i ld r e n . T h e r e. o b s e r v e d n o c le a r r e la ti o n s h ip w a s b e tw e e n th e p a t h o g e n e
12、s i s a n d th e d i s tr i b u ti o n o f c li n i c a l is o la te s K e y w o r d s C y t o m e g a lo v im s ; P o l y m o r p h is m ( G c n m ic s ) ; R e c e p tm s , r h e m o k in c ; G e n e , , L S 2 8 人巨细 胞病毒 ( h u m a n c yt o m e g a l o v i m s , H C M V ) 是 导 致患儿先天畸形的一种重耍的病原体 , H C M
13、 V 致病机理至今仍不确定h .3 1 H C M V 编码的U S 2 8 开放阅读框架与细胞的R - 趋化因子受体 C C R - 1 具有 3 3 %的同源性。有研究 显T在 2 9 3和K 5 6 2 细胞中表达的重组U S 2 8 蛋白可 以 与R - 趋化因 子结合并引 起C a - + 的内流, 证明它是 一种由 病毒编码的(; 蛋自 偶联受体(, . tC 我们旨 在 研究趋化因子受体基因 U S 2 8在儿童低传代人巨细 胞病毒株中的多态性, 探讨这种多态性与致病性间 的关系 , 1 材料和方法 基金项日: 国家自 然科学基金项目 资助 ( 3 0 3 7 1 4 9 2 )
14、 作者单位 : 1 1 0 0 0 4 辽 宁省 沈阳中 国医 科大 学 附属第 二临 床 医 院病毒研 究室 通讯作者: 何蓉, F - mil ; k -n n , ( E l D: 5 - G T A T T GC AT C C AC AG - 中华实验 和临床病毒 学杂志 2 0 0 6 年 3 月第 2 0 卷 第 1 期C h in e se 1 E x p C I m V im I , M - h 2 0 0 6 , V . 2 0 , N . . 1 AG G T A - 3 ; P 2 8 a U: 5 - AC G C G AC f C C 1 TG T GT TTT C
15、- 3 ; E 2 D: 5 - T A AA G T G T G G A AT GG C G AT ( - 3 ; P 2 8 6 U: 5 - G G T AC GG C AG C C A A AA G AT GG - 3 ; E 3 D: 5 一 ( ; G T - A C GG C AG C C A A A AG A T G - 3 ; P 2 8 c U: 5 - T C A T G C TTG- Gf C Cr r i C GT G- 3 ; F A D: 5 - T C C G A C GC G A AA A G C - T C A T G - 3 , 扩增产物长度分别为3 7
16、4 帅, 4 3 5 帅, 4 2 0 帅和4 1 3 帅。测序用引物为: U S 2 8 a U : 5 - G G G C A G - A A C T G Gf GC F A T - 3 ; U S 2 8 b D: 5 - TT A C G GT A T AA T - TTG T G A G A C G - 3 ,测序由北京奥科公司完成。 1 . 3 H MA - S S C P分析P C R扩增产物与“ 标准” 物 ( D r i v e r ) 经变性后 于 3 1 5 V稳压 电泳 4一5h后银染 显色。 1 . 4 分析软件应用 D N A S T A R , G e n e d
17、 o 。 等软件进 行分析 3 讨论 2结果 2 . 1 P C R扩增结果6 7株 U S 2 8 基因扩增阳性, 3 株荧光定 量- P C R结果和 分段 P C R扩增的结果均 为 阴性 。 2 . 2 HMA- S S C P结 果选 用 A D1 6 9株或 在 S S C F 中泳动最为特异的片段为 D ri v e r 。电泳结果显示 U S 2 8 序列内部存在变异, 变异多集中在序列的两 端, 尤其是3 末端。 2 . 3 U S 2 8基因核酸序列分析对 1 7株临床株 U S 2 8基因进行测序, 序列由美国 G e n B a n k收录, 序 号为: A F 3 7
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- 巨细 病毒 临床 分离 US28 基因 研究
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