人胃黏膜组织蛋白质组二维电泳图像的获得.pdf
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1、收稿日期: !“#$“%$9?) 已成为后基 因组时代研究的热点 ?=?,!)/G) 作为蛋白质组研究的 开门技术, 得到了生物医学界的充分关注。 慢性胃病无论是萎缩、 肠上皮化生, 还是不典型 增生, 甚至恶性肿瘤的发生, 都从胃黏膜的改变开始。 采用蛋白质组分析技术从细胞整体水平上探讨其多 基因、 多蛋白质参与的过程, 将有助于我们了解疾病 发生的机制, 找到诊断和治疗的靶点。但迄今为止, 尚未见有关胃黏膜组织 !)/G 的报告。为此, 本实验 采用 !“ 世纪 H“ 年代初开始应用的固相 ,- 梯度 (=8LDC8LDC=B;) , 十二烷基磺酸钠 (./.) , 二硫苏糖醇 (/OO)
2、 , 苯甲基磺酰氟 (1P.Q) , M1 $“, /M7 酶和 6M7 酶, 均购自华美生物工程公司。 四甲基乙二胺 (OGPG/) 和过硫酸铵购自 .=EC88=;8 C=C V=9:;F 公司。分析纯银染用 试剂为西安化学试剂厂产品。所有溶液均用去离子 水配制。 !“ #设备 低温高速离心机 (G,;BA98T) , 012,F98 等电聚焦 仪、 灌胶模具、 .G)(“ 垂直电泳单元、 重泡胀附件和 循环水浴箱 (1FC8=C V=9:;F ) , 电泳仪 (V=9)6CA) , 脱色摇床 (南京大学制) , 由第四军医大学生物化学 和分子生物学教研室提供。2Q$ A=B; PC8F
3、!“* 9D!*M9# 万方数据 !“# $ % 保存。使用前加 8+9 缓冲液7 ()*, 以及 2? = /(于57 /* 8+9 泡胀 贮存液中。 %5#5#平衡液: ?ABC“D1 (!“ :5:) 7 = =结果与讨论 C2U 技术是目前分析组分复杂的蛋白质分辨 率最高的工具之一, 是蛋白质组研究的核心技术。 但由于 C2U 中蛋白质样品的处理、 8U.、 -2-C+49U、 染色等技术有一定的难度, 因此不容易开展。尤其 是胃肠道组织, 更有其难度。经过摸索, 我们建立并 优化了胃黏膜组织蛋白质组分析的 C2U 技术, 得到 了满意的 C2U 图像 (图 %, 为同一样本两次实验结
4、 果; 图 %, # 为不同样本同一条件的结果) 。 (%) 蛋白质样品的制备是 C2U 的关键环节 E : 与细 胞相比, 从组织中提取蛋白质的影响因素很多。在 相同的双向电泳条件、 相同的检测方法下,由于样 品处理及样品量不同,可有不同效果的C2U图谱。 目前,许多改进双向电泳的研究都着眼于增加蛋白 质的溶解度。 “细胞和组织破碎: 细胞和组织的破碎方法 =有组 织匀桨法、 超声波法、 压力法、 冻融法、 酶消化法等。 细菌和培养细胞多用超声波法、 压力法、 冻融法, 组 织多用匀桨法、 超声波法, 也可用多种方法相结合。 我们试用多种组织破碎方法, 最终采用高速机械法 #= ) 图 $人
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