人血小板源性生长因子B基因的体外扩增以及克隆和鉴定.pdf
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1、中国临床康复第!“卷 第#$期2006-07-10 !“ Chine6 人血小板源性生长因子 B 基因的体外扩增以及克隆和鉴定 *! 罗文娟 1!王传富1!吕振华2!刘湘萍2!隋爱华2 ! 基础研究 ! 青岛大学医学院附属医院,1眼科) 2 中心实验室, 山东省青岛市 26600* 罗文娟!,女,1+76年生,山东省淄博市人,汉族,200,年青岛大学毕 业,博士)主要从事眼科组织工程学的研究。 通讯作者:王传富,硕士,教授,博士生导师,青岛大学医学院附属医院 眼科)山东省青岛市26600* 国家自然科学基金资助项目(*0,72011)* 中图分类号-.*2+/2+文献标识码-0文章编号-167
2、1-,+261200622,-0030-0* 收稿日期-200,-11-23修回日期-2006-01-2610,-,0-10-30+245“62 !“ #$%DJ:? N8JIO:C F?CC8D8)MIDJ:?26600*)6B:J?D P;?QIO8) FBI: %?QIO8) FBI: 6orre7ponden e to8 (-*/ 01?QIO8) FBI: 9upported :;:C S:O8 T?RJ: ? FBI:)S?/ *0,72011* =e ei2ed epted:7tra t ?L Q8O 9C:J D88 L8OD 8RW:;E?JRODJ:? N8JIO:C F?
3、CC8D8 ;?= :R:;E 2002 R:;E 200,/ 0 9:I; ? L98OIIO 9;I=8;L YI 8E=8 LIJ _B? I Y8;8 J8LID8J :J LED 8 L8aR8O8 ? BR=: P7TVB ? 8H:W/K=: P7TVB L8D=88J ;?= BR=: 9C:O8LO;I9V 9?CE=8;:L8 OB:I ;8:OZ .UVPF. UB8 8 Y:L IL8;L: 9C:L=IJ PO7S0b4P7TVB 0O8J :J IJ8L8;:CELIL :J Q:CIJ: YIE=8 JID8L :J PF./ =A9FGB988C 8C8OJ Y
4、I L8;I;=8J HE L8aR8OID )J?RHC8 8E=8 JID8L :J PF. :CELIL/ 6DH6GF9?DH8UB8;8O?=HI:Q8OLDLROO8LLRC :=9CIIO: ? O?=9C88/ cLD8IO LJ OB:D8 ? B8;8JI D88 C8Q8C ? H8ID :J :I=:CL/ %.%3 4?n i2*( 7?52)?-A5*.B*) -*C 5C)*A525B-A5* 2 1基因;序列分析 I引言 血小板源性生长因子B是1+7b年由.?LL等d1e首 先发现的,最初是从血小板中得到的,故称为血小板源 性生长因子。 但后来发现血小板以外的许
5、多细胞如内 皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞等都能合成分泌人 血小板源性生长因子或人血小板源性生长因子样生长 因子。 血小板源性生长因子是由0,B两条肽链通过二 硫键结合而成的二聚物, 分别为人血小板源性生长因 子00,人血小板源性生长因子BB,人血小板源性生 长因子0B,其相对分子质量约为*0 000d2)*e。 人血小板 源性生长因子受体由两个亚单位(,()组成,可与 0,B链相结合,(仅与B链结合。人血小板源性生长因 子对各种结缔组织细胞是个潜在的促分裂素, 包括成 纤维细胞,平滑肌细胞和巨细胞d2)*e,在这些细胞中,人 血小板源性生长因子不仅刺激细胞生长, 而且激发能 动作用,包括细
6、胞骨架重组和细胞分化d2-6e。 因此,本实 验合成了人血小板源性生长因子B真核表达载体 PO7S0b4P7TVB,拟将其转染人及动物细胞,从而观 察所分泌的人血小板源性生长因子的持久性促进增生 作用。 J材料和方法 设计:单一样本观察。 单位:青岛大学医学院附属医院。 材料:实验于2002-014200,-01在青岛大学医学 院附属医院中心实验室完成。 质粒、 菌种及试剂: PO7S0b真核表达载体、=10+宿主菌由本研究室保 存 ;MI:D8 .8:LE NII fI fI A8VL公 !“ 罗文娟!等!人血小板源性生长因子B基因的体外扩增以及克隆和鉴定 “#$ % 限制性内切酶B123,
7、456和7-连 接 酶 (8962:;1公司);引物合成(上海生工生物工程有限公 司);71;?1;: 0:1AB C? D?E试剂盒提取总0$=。 人血小板源性生长因子B F?1;: L:MAE:N 07M8,0 D?EO美国O?1;:公司)。 循环参数为:预变 性*) P %) 2?Q主循环*- P % 2?O)+ P -) AO+ P -) AO-.个循环;终延伸+ P J 2?。并根据因子碱基 数的理论值 (+) RN) 选择和纯化目的基因片段 (?1S?FH G:T UVE91FE?6 D?E)。 引物:上游引物8%:) =,= ,GG =7, ,G, =7G =7 ,G, 7G,
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- 关 键 词:
- 血小板 生长因子 基因 体外 扩增 以及 克隆 鉴定
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