人脐血间充质细胞体外分离培养方法及培养基特性.pdf
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1、3 4 中国 任庆 康复第 9 卷 箫 4 6 雳2 0 0 5 - 1 2 - 1 4 出版 C h i n e s e J o ur n a l of C li n ic al R e h a b i lic a tio n , D e c e n tb e r 1 4 2 0 0 5 V o l. 9 N o . 4 6 袭础研 究。 人 脐血间 充 质细 胞体 外分离 培 养方法 及培 养基特 性* 刘素芳, 剧文海 韩雪飞, 阎明. 邢莹 郑州大 学医学 院干细胞 中心 , 河 南省郑 州市4 5 0 0 5 2 刘素芳 *, 女, 1 9 7 6年 生 河 南省 汤 阴 县 人 ,
2、 汉族 2 0 0 3 年 郑 州大 学医学 院毕业 , 硕 士, 讲 师 . 主要从 事干 细胞培 养与诱 导分化 相关 方面的研 究 g ir l一 , f z z u .e d u .c n 通讯作者 邢莹, 博士, 教授. 郑州大学医学院干细胞中心, 河南省郑 州市 4 5 0 0 5 2 X i n g Y z z -d u - 河南省科 技 攻关项 N ( 0 2 2 4 6 3 0 1 7 4 ) - 中 圈分类 号:R 3 9 4 .2 6文献 标识码:4文 茸编号:1 6 7 1 - 5 9 2 6 (2 0 0 5 ) 4 6 -00 3 4 -02 收稿 日期 : 2 0
3、 0 5 - 0 4 - 0 9 修 回 日期 : 2 0 0 5 - 0 9 - 0 6 i 2 6 / C Z S / Y 0 1 刘素芳, 瓤文 海 韩雪飞. 幕 1 ; c 性 u 国 国一 cE未康 复 ( 4 6 ) : 3 4 - 5 ( C h in s / 8 l 明 . 邢莹 人 脐 L in c h u a n g K w 4 f 2 0 0 5 ;9 月 6 ):3 4 一 5 C h 血 间充 质 细 咆体 外 分 离 + R养万 法 及 f a养 ,2 0 0 5 ,9 14 6 ):3 4 - 5 M v vw .z g lc k f.c o m l C u l
4、t u r e d me t h o d o f c o r d b l o o d - d e r iv e d me s e n c h y ma l c e l ls i n , 诉a n d c h a r a c t e r s o f c u lt u r e me d iu m L iu S u - fa n g , Y o n We n - h a i, H a n X u e -f e l, Y a n Min g , X in g Y in g , S te m C e ll R e s e a rc h C e n te r, M e d ic a l S c h o o
5、 l, Z h e n g z h o u U n iv e r s it y , Z h e n g z h o u 4 5 0 0 5 2 , H e n a n P ro v i n c e , C h in a L iu S u - fa n g *, M a s te r , L.tu rs r , S t e m C e ll R e s e a r c h C o me r, M e d i c a l S c h o o l , Z h e n g z h o u U n i v e r s i ty , Z h e n g z h o u 4 5 0 0 5 2 , H e
6、n a n P ro v i n c e , C h in a g ir l ls l z z o .e d u .c n C o r r e s p o n d e n c e to : X i n g Y i n g , D o c t o r , P r o f e s s o r, S te m C e ll R e s e a r c h C e n te r , M e d i c a l S c h o o l, Z h e n g z h o u U n iv e r s it y , Z h e n g z h o u 4 5 0 0 5 2 , H e n a n P ro
7、 v i n c e , C h in a X in g Y z z u .e d u .c n S u p p o rt e d b y : T a c k le K e y P rog ra m s o f S c ie n c e a n d T e c h n o lo g y o f H e n a n P r o v in c e , N o . 0 2 2 4 6 3 0 1 7 4 “ R e c e iv e d :2 0 0 5 -04 - 0 9 A c ce p te d :2 0 0 5 - 0 9 - 0 6 A b s t r a c t A I M: T o e
8、 x p l o r e a b e tt e r c u l tu re m e t h o d o f c o r d b lo o d - d e r iv e d m e s e n c h y ru u l c e ll s i n v i tr o w it h d i ff e re n t m e d i u m i n th es e p a rn ti rm o f 砒 s e n c h y m a l ce ll s a t ,o , fl u e n e e s t a t u s . ME T H O D S : h e e x p e r im e n t w a
9、 s p e r f o r m e d f ro m N o v e m b e r 2 0 0 3 t o O c to b e r 2 0 0 4 a t S t e m C e l l R e s e a rc h C e n te r, Me d i c a l S c h o o l , Z h e n g z h o u L n i v e r s i ty . T h e h e a lt h y p a r tu r ie n a w it h t e r m p re g n a n c y , w h o w h o s p it a li z e d a t t h e
10、 o b st e t ri c s o f T h i r d A ffi l ia t e d H o s p it a l o f -M e d i c a l S c h o o l , Z h e n g z b o u U n iv e rs i ty , w e r e s e le c te d a n d th e c o rd b l o o d w a s g a i n e d f o r th e e x p e r im e n t ( T h e p a r tu ri e n s s i g n e d in fo r m e d c o n s e n ts
11、) . T h e y w e re a s s i g n e d r a n d o m ly in to 4 g ro u p s : lo w g lu c o s e D M E M ( D u lb e c e e M o d ifi e d E a g le M e d iu m ) g ro u p , h i g h g lu c o s e D M E M g rou p , lo w g l u c o s e D M E M+s te n c e l l f a c t o r g r o u p , M e s e mu lt T M 。k in d o f l iq
12、 u i d m e d iu m w i th s p e c i a l c o m p o n e n t , m a tc h in g w i th it s a d d it iv e c o u ld a c c e le r a te m e se n c h ym m a to m c e l l d if fe re n t ia tin g i n to a d ip o s e c e ll ) g ro u p . A ft e r e x p u ls im n o f n e o n a t e s , c o r d w a s c u t im m e d i
13、a t e l y . B r e a k i n g e d g e o f c o rd a t th e m o th e r s s id e w a s d is in f e c te d , B l o o d w a s g a in e d b y p u n c tu r in g u m b il ic a l v e in w i th 6 0 m L s te r il e i n j e c tio n n e e d l e s , a n d i n t r o d u c e d i n t o d is e b r i n a n t ic o a g u
14、l a n t s te r il e b lo o d p o c k e t. T h e f r e s h c o rd b lo o d w a s s e p a ra te d in t o m o n o c y t e s w i th 1 .0 7 7 g / c m d e m ix i n g l iq u id o f ly m p h o c y t e s a n d d e n s i ty g ra d ie n t c e n tr if u g a t io n m e th o d . T h e mo n o c y t e s o f c u r d
15、 b lo o d w e 怨 in o c o l a t e d in t o 3 7 C i n c u b a t o r w it h 0 .0 5 v o l u m e f r a c ti o n o f C O , . Q u a n ti t y a n d f o r m a ti o n o f 摘 要 目的 采用 不同 的培养 基分 离培养 融合状 态 的间充 质细 胞 , 以筛 选一 种 较好的 体外培养人脐血间充质细胞的方法 方法: 实验于2 0 0 3 - 1 1 / 2 0 0 4 - 1 0 在郑州大学医学院干细胞中心完成。 选 择郑州大学医学院第三附属医院
16、产科足月妊娠健康产妇的脐血用于实 验( 产妇均签署知情同意书) , 随机分为4组 低糖D M E M ( D u l b e c c o 改 良的 E a g le 培养 基)组 、高糖 D M E M 组 、低糖 D M E M + 干 细胞 因子组 、 M s e n c u lt T M( 一种特 殊成分 的液体 培养 基 , 与其添 加物 配合使用 可促 进 间充质 干细胞 分化 为脂肪 细胞 ) 组 。 待新生 儿娩 出后 , 立 即断脐 消 毒母 侧脐带 断端 , 6 0 n rl无菌 注射 针穿刺 脐静 脉取血 , 立 即导人 肝素 抗凝 的 无菌采血袋内。取新鲜采集的脐带血,
17、用1 .0 7 7 g / . .的淋巴细胞分层 液 , 密 度梯度 离心 法分 离脐血 单个 核细 胞 , 将 脐血 单个核 细胞 接种 于 3 7、 体 积 分数为 0 .0 5 的 C O , 培 养箱 内 培养 , 倒 置 显微 镜 观察 细胞 数 量 和形 态的变 化亡 结果:各组间充质细胞培养2 3 h 后贴壁细胞数和细胞存活率的比 较: M , -cult T M组、 低精D ME M 十 干细胞因子组的贴壁细胞数明显多于 高糖D ME M组、低糖D M E M组 (4 0 .5 2 9 .7 ) , ( 3 1 .5 1 4 .2 ) , ( 1 4 .0 士 1 .4 ) ,
18、 ( 7 .5 1 1 .6 )个, P 0 .0 5 , 细胞存活率亦明显高于高精D M E M组、低糖 D M E M 组 ( 9 7 . 1 3 0 .9 ) , ( 9 5 .3 1 2 .6 ) , ( 8 4 .1 2 1 .9 ) , ( 8 1 .2 1 1 .1 ) % ,P 0 .0 5 , 各组间充质细胞在不同培养时间下生长状态的比较 培养第3 , 7 , 1 0 , 1 4 天M s e n c u lt T M组、 低糖D M E M + 干细胞因子组细胞增殖的速度均快 于高糖D M E M组、 低糖D ME M组( P 0 .0 5 ) , 且M s e n c u
19、 l t T M组细胞克 隆数最多 ( 1 1 1 .2 2 ) , ( 0 .8 3 . 0 .7 5 ) , ( 0 .2 土 0 .4 ) , 0 个尹 0 .0 5 结 论 采用低 糖 D M E M + 干细胞 因子与 单纯 M e s e n c al t T M 培养基 培养 的 细 胞生 长 旺盛 ,但 由 于 干细 胞因 子用 量 较大 , 价 格 昂贵 ,因此 低糖 D ME M 联合应 用干 细胞 因子的方 法并不 卜 分适 用 。而 M e s e n c u ll T M为 酸 性培 养基 , 有 利 于脐血 细胞 的生 长 , 并 可形 成克 隆 , 为脐 血 间充
20、 质细 胞 的成功培 养创 造 了 条 件 , 是一种 适合 脐血间 充质 细胞生长 的培养 基 主题 词 : 千细 胞 : 胎血/ 细 胞学 细胞 . 培养 的 c e l l s w e r e o b s e r v e d w i t h i n, R E S U L T S : C o m p a re r t o f m e s e n c h y rn a l c e ll s c u l t u re d fo r 2 4 h a m slad hla m , c r e n c e c e l l s a n d s u r v i v a l r a t e : Nu m
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- 关 键 词:
- 人脐血间充质 细胞 体外 分离 培养 方法 培养基 特性
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