人骨形成蛋白纳米微粒的制备与生物活性鉴定.pdf
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1、中图实验诊断学2 0 0 6 年3 月第1 0 卷第3 朝 z 6 3 . 5 关于心肌酶在 A MI 诊断中的地位C K和 C K MB的敏感性可 以达到 7 0 % 一8 2 %和 6 7 % 8 2 %, 特异性可达8 5 %一 9 1 %和7 4 %一 9 1 %, 有一 定的诊断价值; A S T , L D H 和H B D H的敏 感性太低, 但有较高的特异性。 在 C K和C K M B 联合诊断中, C K+C KMB的敏感性为 6 1 %一6 5 %、 特异性 8 9 % 一 9 8 %、 阳性预测值 8 6 %一9 8 %、 阴性预测值 7 0 % 一 7 3 %0可以认
2、为, 以 C K和 C K MB作为 A MI 的 诊断指标, 其漏诊的比例很大, 但如果心肌酶5 项均 升高, 特异性和阳 性预测值均达到1 0 0 %, 即心绞痛 病人 无 1 例 是 5 项均升高的。因此, 我们认为心肌 酶谱5 项检测仍然难以废弃, 尤其是 C K和C K M B 有明显的诊断价值。 参考文献: 1 H a w k in s R C , T a n H L - C o m p a r i o n o f th e d i a g o s ti c u t il ity o f C K , C K M B ( a c ti .ri t y a n d二 , s ) , t
3、r o p o n in T a n d I r o p o a in I in p a t ie n t s w it h s n s p e e t e d a c u t e m y o c a r d i a l in fa ro ti o n J . S in g a p o r e M e d J , 1 9 9 9 , 4 0 ( 1 1 ) : 6 8 0 . 仁 2 H s o L F , K o h T H, L i m Y L . C a r d i a c m a r k e r p o in t - o f -c a r e t e s t in g : e - v
4、a lu a t io n o f r a p id o f o n - si t e b io c h e m i ca l m a r k e r a n 衡s i s f o r d ia g n o s is o f a e u t e m y o c a r d ia l in f a r c t io n J J . A n n A c a d M o d S ln g a p 。 二, 2 0 0 0 , 2 9 ( 4 ) : 4 2 1 3 B a l k E M, L o a n n id is J P , S a le m I l , e t a . A m u w y
5、o f b io m a r k e r s t o d i- a g n o s e a c u te c a M i a n im h e m in i n t h e e m e r g e n c y d e p a r t m ent : a m e t a- a n a l y s is J . A n n E m e r g Me d , 2 0 0 1 , 3 7 ( 5 ) : 4 7 8 . 4 8 i fs i N , B Id k e r P M一 H i g h - ae n a i tmty C - , 二 v e p ro t e in : a n o v e l
6、 a n d p ro m is i n g m a r k e r o f c o ro n a r y h e a r t d is e a s e J 1 . C l in ic a l C h e m i st r y , 2 0 0 1 , 4 7 ( 3 ) : 4 0 3 . ( 收稿日期: 2 0 0 5 一0 4一1 9 ) 文章编号: 1 0 0 7 一 4 2 8 7 ( 2 0 0 6 ) 0 3 一0 2 6 1 一0 3 人骨形成蛋白纳米微粒的制备与生物活性鉴定 季晓风, 丛宪玲, 杨晓玉, 段德生赞 ( 吉林大学中日 联谊医院, 吉林 长 春 1 3 0 0 3
7、3 ) 摘要: 目的制备重组人骨形成蛋白2 ( r h BM P - 2 ) 聚氰基丙烯酸正丁醋纳米微球缓释系统, 检测其对兔骨髓间充 质干细胞( B MS C 的的生物学效应。方法采用改良的乳化溶液聚合法制备r h B MP - 2纳米微球; 采用 MT T法检测微 球对 B MS C , 增殖的影响; 碱性磷酸酶( A L P ) 检测试剂盒检测细胞 A L P活性。结果该微球缓释系统具有一定的生 物活性, 可促进B MS C 。 的增殖, 并呈剂量依赖性。其效应高于单纯施加 r h B 6 7 P - 2的效应。结论纳米材料是一种较 好的缓释系统, 作用效果优于单纯使用r h B MP
8、- 2 关键i f : r h B M P - 2 ; 纳米微球; 骨髓间充质千细胞 中图分类号: 8 3 1 8 . 0 8文献标识码 ; A S tu d y o n p re p a r a t io n a n d id e n ti fi c a t io n o f n a n o m e t e r p a r t ic l e o f h u m a n b o n e m o r p h o g ee n e t t e p ro t e i n J J X i a 习 e n g , C O N G X i a n - l t n g , Y A N G X i a o-
9、y u , e t a t . ( C h i n a - J a p a n U n io n H o s p i t a l , J i l i n U n i v e r s i t y , C h a n rh u n 1 3 0 0 3 3 , C h i n a ) A b s tr a c t : O b j e c ti v e T o P r e p a r e s l o w - r e l e a s e s y s t e m o f re c o m b i n e d h u m a n b o n e m o r p h o g e n t ic p r o t
10、e in - 2 ( r h B M P - 2 ) c o m b i n e d w i t h a n d d e t e c t i t s t h e b io lo g ic a l e f f e c t s o n r a b b i t b o n e m a r ro w m e s e n c h y m a l s t e m c e lls ( B M S C s ) . Me t h o d s p o l y - e m u ls io n i u d s o l u t io n w a s u s e d t o p r e p a r e t h e m a
11、 n o m e te r p a r ti c l e o f r h B M P - 2 , t h e e ff e c t s o f N a n o m e t e r P a rt ic h , o n t h e p r o li f - o r a t i o n o f B M S C s w e r e d e t e c t e d b y M T T a n d t h e a c ti v it i e s o f a l k a li n e p h o s p h a te s e ( A L P ) w e re d e te c t e d b y A L P
12、 t e s t k i t . R e s u lt s T h e s l o w - r e le a s e s y s t e m e s t a b li s h e d p o s s e s s e d th e b i o l o g i c a l a c t iv i ty t o e n h a n c e t h e p r o li f e r a t i o n o f B M S C s a n d i t s e f fe c t s i s d o s e d e p e n d e n t . C o n c l u s io n T h e o f f
13、i s o f s l o w - r e le a s e s y s te m o f r fi B M P - 2 c o m b in e d w i t h n a n o m e te r p a r t ic le i s b e t t e r t h a n t h a t o f r h B MP - 2 a l o n e . K 勺 1 w o r d s : r h B M P - 2 ; m a n o m e t e r p a r t ic le ; b o n e m a r ro w m e s e n c h y m a l s te m c e l ls
14、 ( C h i n J L a b D ia g n , 2 0 0 6 , 1 0 : 2 6 1 ) 骨形态 发生 蛋白( b o n e m o r p h o g e n t i c p r o te in , B M P ) 是 一种酸性多肤, 能够诱导血管周围的未分 基金项目: 吉林省科技厅资助项目( 编号: 2 0 0 5 0 5 1 5 5 ) 关 通讯作 者 化间充质细胞向骨和软骨发生不可逆的变化, 被认 为是治疗难治性骨折及修复骨缺损的首选物质川。 研究表明, 骨形态发生蛋白促进成骨作用的发挥依 赖于与适宜的载体缓释系统结合, 否则极易被体液 2 6 2 C h i n
15、J L a b D i a g n , M- h , 2 0 0 6 , V . 1 1 0 , N . . 3 稀释转运, 或被迅速降解。目 前大部分的研究集中 于固 体( 支架性) 载体材料, 对于可分散性( 液体) 载 体系 统的研究很少。纳米微粒( 毫微粒) 是近年来兴 起的 一种新型药物载体, 以 其超微小体积, 能 穿透 组 织间隙 并被细胞吸收, 可通过人体最小的毛细血管 等优点而被广泛研究, 从而具有良好的发展前景。 本实验以 氰基丙烯酸正丁醋为材料, 采用改良 的乳化溶掖聚合法制备无毒、 有生物活性的聚氰基 丙 烯酸正丁醋纳米微球作为; h B M P - 2 的缓释系统 并
16、 检测相关指标。拟通过观察该微球对培养的 B M S C s 增殖及分化特 点的 影响, 明确这种生长因 子 缓释系统对生长因子活性的作用 , 从而明确其在骨 组织工程中应用的可行性。 1 材料与方法 1 . 1 试剂氰基丙烯酸正丁醋 ( B C A , 德国 B . B r a u n 公司) , 重组人骨形成蛋白1 2 - 2 ( r h B M P - 2 , 军 事医 学科学院) , D M E M培养基( C i b c o ) , 胎牛血清 ( F B S , 杭州四季清公司) , 胰蛋白酶( S i g m a ) , 唆噢兰 ( M T T , S i g m a ) , A
17、L P 检测 试 剂盒( 南京 建成 生 物 技 术公司) , T r i t o n X - 1 0 0 ( 华美公司) 。 1 . 2 r h B MP - 2 聚氰基丙烯酸正丁醋纳米微球的制 备 及性质鉴定 根据正交设计法优化制备工艺, 采 用改良的 乳化溶液聚 合法制得微球1 3 1 。主要步骤: 取r h B M P - 2 干粉1 0 m g , 溶于5 m l 盐酸肌溶液中, 加人含 0 . 4 %吐温 8 0和0 . 0 2 %焦亚硫酸钠双蒸水 2 0 m l 中 , 稀 盐 酸 调P H 值 至3 . 5 , 不 断 搅 拌 下 加 人 适 量的R C A , 反应2 0 m
18、 i n , 制成种子溶液。再按终浓 度为4 %的比 例将B C A 缓慢加人, 反应2h , 得到乳 白色的胶体混悬液。4 下透析 2 4 h , 真空冷冻干燥 制成冻干粉, 密封4 保存。取适量冻干粉溶于生 理盐水中, 磷钨酸复染后透射电镜观察微球的形态 和大 小。紫外分光光度法测定微球对r h B M P - 2 包 裹率。 1 . 3 r h B MP - 2 纳米溶液对兔骨髓基质细胞影响的 测定 取健康成年新西兰兔, 无菌条件下于胫骨穿刺 处 抽取骨髓 1 1 5 m l , 肝素抗凝, 骨髓内 有核细胞计 数, 以1 x 1 护个/ m l 有核细胞密度接种于2 5 m l 玻 璃
19、瓶中做原代培养。B MS C 。 经消化后计数, 用培养 液调整浓度至 1 x 1 0 0 / m l , 加人 % 孔板, 每孔 2 0 0 P 。 2 4 小时后换成含 1 %F B S 的D ME M培养 液 , 分别含 r h B M P - 2和 : h B M P - 2微球, 浓度均设为 5 , 1 0 , 2 0 , 5 0 , 1 0 0 , 2 0 0 , 4 0 0 tL g / L 。 每 浓度 每 时间 点 设6 个孔。 对照组仅加培养液。 分别在培养2 4 , 7 2 及1 2 0 h 后, 加 入M T T ( 5 m g / m l ) 2 0 p i , 继
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- 关 键 词:
- 形成 蛋白 纳米 微粒 制备 生物 活性 鉴定
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