低剂量环磷酰胺对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响.pdf
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1、 1 2 4( I i ., .l C A t C u e M o d . F ,1 , . 2 0 0 6 . V . 1 2 6 . N n . 2 低剂量环磷酞胺对脓毒症大 鼠急性肺损伤的影响 魏在荣 , 王 达利 , 刘 强, , 程代薇, , 王玉明 , 刘华 庆2 , 高 振宇 3 , 王 波, 摘要 目的探讨低剂量环磷N . 胺( C Y ) 对脓毒症大鼠急性肺损伤( A L I ) 肺组织的影响。方法采用急性肺损伤大 鼠模型, 将 4 0 只 S D大鼠随机分为四组: 实验组( C Y组) 、 阳性对照组( D X M组) 、 阴性对照组( A L组) 和空白对照组( N S组
2、) , 每 组1 0 只。建模成功6 h 后留取肺组织, 用免疫组织化学法结合图象分 析仪检测肺组织N F - K B p 6 5 蛋白的 相片 含量, 并进行肺 组织的病理学光镜检查。结果A L I 组病理切片 H E染色光镜下见: 肺泡腔见大量出血及炎性细胞浸润, 支气管上皮剥脱、 水 肿等 D X M组、 C Y 组也可见炎细胞浸润、 肺英陷现象, 与A l l 组比较, 明显减轻( P 0 . 0 5 ) 0结论 低剂量C Y 减轻了A U大鼠肺组织中 性粒细胞的 浸润, 能明显下调N F - K B p 6 5 蛋白表达。低4 ) 量C Y 与地塞米松 一样具有明显的杭炎作用, 能够
3、减轻内毒素诱导的 A U大鼠的肺组织损害。 关健词 急性肺损伤; 环磷跳胺; 地塞米松; 内毒素; 核因子一K B 中圈分类号 R 5 6 3 ; R 3 9 2 . 3 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 2 一1 9 4 9 ( 2 0 0 6 ) 0 2一 0 1 2 4一 0 3 E ff e c ts o f l o w d o s e o f c y c l o p h o s p h a n u d e o n a c u t e lu n g in j u ry in s e p s is s e ts W E I Z a i 一r a n g , W A N G D a一I
4、 i , L a 口 h a n g , e t a l . D rp mm re n t of B a r n a n d P la s t ic S u r g e r y , A fl ia te d H o sp it a l , Z u a y i Med i c a l C o l le g e, Z a n y i 5 6 3 0 0 3 , C h i n a A b s h a c t O b j e c ti v e T o e x p l o re t h e e ff e c t s o f lo w d o s e o f c y c lo p h o s p h a
5、 n u d e ( C Y ) o n 二 。rt e lu n g i n j u ry ( A L A ) in s e p s i s oa ts . Me t h o d s 川d m l m o de ls w e re g iv e n th e in t r a p e r i to n e a l i n j e c ti o n o f l ip o p o l y sa c c h a v id e ( L P S ) . 4 0 S D ra t二。r a n d o m h d i v i d ed i n to f o ur g ro u p s : e x p e
6、 r i m e n t g ro u p ( C Yg ro u p , A U + C Y , 。 = 1 0 ) , p o s it iv e c o nt ro l g ro u p ( D X M g ro u p , A L I + D X M , n二 叫 n e g a ti v e c o n tr o l g ro u p ( A L I g ro u p , A L I + N S , n= 1 0 ) a n d u n c o n t r o ll e d g ro u p ( N S g ro u p , n 二 1 0 ) . A ll th e ra ts w
7、 e r e k ill e d a n d t h e s p e c im e n s o f lu n g t is s u e s w e re r e s e rv e d a t 6 h o urs a f te r establishment o f th e m o d e l s . T h e re l a t iv e c o n te n t o f N F一 B P 6 5 , IK B 一。w e re d e te c t e d扮i m a g e a n a ly s e s y s te m a n d u h u n u o o h is t o :h e
8、 n u s try. T h e p a t h o lo g i c a l c h a n g e s o f t h e l u n g t is s u e s w e re e x a m i n e d w i th l ig h t m i c r o s c o p e . R e s u lt s B y l ig h t m i c r o s c o p y , th e e v id e n c e o f l u n g in j u r y一 且 re u tro p h d in f il tra t io n a n d h e m o rr h a g e
9、in t h e c a v it y o f a lv e o lu s , b ro n c h i o l e 叩it h e b a l d e s q u a m a tio n , e d e ma a n d s o o n w e r e f u n d i n th e s e c t io n s o f A L I gr o u p s ta i n e d w i th h e m a to x y li n 一e o s in . C o m p a r e d w it h A l .1 g ro u p , n e u trop h i l i n f il tr
10、 a ti o n , a lv e o l a r a te le c ta s i s in C Y g rou p a n d D X M g ro u p , w e re a ll e v i a te d ( P 0 . 0 5 ) . C o n c l u s io n s L o w d o s e o f C Y a l le v ia t e d n e u tro p h i l in fi l tr a ti o n in l u n g , a n d d o w n 一re g u la te d t h e e x p re s s i o n o f N F
11、一K B P 6 5 . T h e res u lt in d ic a t e d t h a t l o w d o s e o f C Y , s a m e a s D X M h a d p ro min e n tl y a n ti 一in fl a m m a to ry e ff e c t a n d c a n re l ie v e th e l u n g in j u ry i n A 1 1 r a t in d u c e d场L P S . Ke yw o r d s A c u tel m win ju r y ( A L I ) ; C y c lo p
12、 h o s p h a n u d e ( C Y) ; D e x a m e t h a s o n e ( D X M) ; L ip o p o ly s s c c h a ri d e ( lI N) ; N F 一“ B 急性肺损伤( a c u te lu n g in l u ry , A U) 是由 严重 感染、 创伤和 休克等多种病因所致弥漫性肺实质损伤, 是急性呼吸窘迫综 合征( a c u t e re s p ir a to ry d i s t re s s s y n d r o m e , A R D S ) 的早期阶段 - 本研究采用大鼠急性肺损伤动物模型
13、, 使用低剂量环磷酞胺 ( c y c lo p h o s p h a in id e , C Y ) 千预, 地塞米松( d e x a m e t h a s o n e , D X M ) 作 阳性对照, 旨在探讨低剂量 C Y对 A U的防治作用 1 材料与方法 1 一 1 主要试剂大肠杆菌L P S ( E . c o li 0 1 1 1 ; 13 4 ) 购自S i g m a 公司; 环磷酞胺注射液、 地塞米松注射液购于七海华联制药。 N F 一 . B 两 , h r B 一 。 多克隆抗体购自 美国S A N T A 公司。S A B C 试剂盒购自成都基因公司。 1 .
14、 2 实验分组及脓毒症模型制作选用4 0只清洁级 S D大 鼠 第汽军医大学大坪氏院动物实验中心提供) , 雄性, 体质 仁 基金项目J 贵州省科技基金资助项目( 2 0 ”一,4 9 ) 作 者单位 1 . 遵 义医 学院 附属 医 院烧 伤整 形 外科 , 贵 州 遵 义 5 6 3 0 0 3 ; 2 . 病理科;3 . 外科动物实验室 作者简介魏在荣( 1 9 7 4卜 ) , 男, 硕士, 主治医师. 主要从事烧、 创伤救治研究。E 一 、1 : z a im n R wr i si n a。 L 通讯作 者 土 达利 ( 1 9 6 5 . 3 一) , 男 , 硕 士 , 主 任
15、 医师 , 硕 士 生导 师 , 卞要从事 烧伤 、 创伤 修复 研究 。E 一 二 1 : d a h w a n w s in a . ,- 量2 5 。 一 3 0 0 g o随机分为四 组: C Y 组、 A L I A 寸 照组、 D X M 对照 组和 N S组。每组各 1 0 只动物 脓毒症动物模型的制作: S D 大鼠 腹腔注射羊 剂大 肠杆菌U ( 5 m g / k g ) , 同 时腹腔注 射单 剂低剂量环磷酞胺4 m g / k g 为实验组( C Y 组) ; 单剂地塞米松 5 - , / k g 为阳性对照组( D X M组) ; 生理盐水为阴性对照组 ( A U组
16、) ; N S 组不注射 L P S , 腹腔注射生理盐水 2 m 1 . 为空白 对照, 术后均自由进食饮水。 1 .3 标本的采集与保存所有大鼠均在建模成功后的第 6 h , 经1 % 戊巴比 妥钠4 0 m g / 纯腹腔麻醉, 处死大鼠留取肺组 织( 左肺) 。所有标本经 2 0 %的甘油冻存液包埋后放置 一 8 0 冰 箱保存备用。 1 .4 检测指标和方法肺组织采用石蜡包埋、 切片。H E染 色, 采用 W e i h d形态计量分析原理 一点计数法一测定反映肺 泡萎陷程度的肺泡扩张度( V V 厂 2 1 以及肺损伤评分法3 1 观察 其对大鼠急性肺损伤肺组织的病理变化。用免疫组
17、织化学 法( S A B C 法) 进行各组动物肺组织的免疫组织化学染色, 观 察N F - a两 在各组动物肺组织中的蛋白表达、 定位与分 布, 结合B 12 0 0 ( 医 学图 像分析系统检测肺组织N F 一 两 , 蛋白的灰度值, 从而计算出N F - u B p 6 5 的相对含量 1 . 5 统计学处理和分析所有数据均以均数t标准差( xt 5 ) 表示, 由S I- S S 1 0 . 0 统计软件进行数据处理。Y0 . 0 5 ) e肺 组织损伤评分提示肺损伤的程度: 四组均有出血, 但 N S组与 其他三组比较有显著差异( P0 . 0 5 ) ; N S 组未见明显 炎细胞
18、浸润 其他二组炎细胞浸润损伤明显, 与N S 组比较均 有显著性差异( P 0 . 0 5 ) 。见表 1 、 表 1 肺组织的形态计量和损伤评分任 士: ) 组别叭x ,M a N e u t 咖 ll i n f ln a i im N S 组0 .6 3 9 m 0 . 0 1 0 0 .2 6 8 - 0 . 1 1 6 0 -0 W 士 0 . 0 0 0 A 1 .1 组0 .5 1 9 士 0 . 0 2 2 0 2 . 5 6 8 土 0 . 4 8 0 3 . 3 6 1 士 0 . 3 0 3 D X M组0 .5 4 7 士 0 . 0 1 6 0 2 . 1 0 0 士
19、 0 . 3 4 2 2 .7 3 6 土 0 . 3 1 3 - (11 Y 组0 .5 3 8 土 0 . 0 1 4 “ 2 . 2 2 0 士 0 . 5 14 “ 2 .9 8 0 士 0 . 3 2 3 “ 与N S 组比较, * P 0 . 0 1 ; 与 、L I 组比较, OP 0 . 0 1 , AP 。 0 5 2 . 3 免疫组织化学结果及肺组织中N F 一 rc B p 6 5 阳性反应产 物的相对含量测定 见表2 0 2 . 3 . 1 肺组织N F 一 B 两 蛋白 表达 肿组织N F 一 B两 蛋白阳性反应产物呈棕黄色, 阳性细胞主要为肺泡上皮细 胞、 血管内皮
20、细胞、 支气管平滑肌细胞 、 巨噬细胞等多种细 胞。N S 组呈弱阳性免疫反应, 甚至为阴性。A 1 .1 组与 N S组 比 较, N F 一 K B p 6 5 呈强阳性免疫反应, 阳性反应产物不仅分 布在阳性细胞的胞浆中, 胞核中也呈强阳性反应, A l l 组阳性 细胞免疫反应产物的相对含量较 N S组比较明显升高( P 0 .0 1 ) 。D X M组、 C Y 组分别与A l l 组比较, N F 一 B两 在胞 核中阳性反应明显减轻, 阳性细胞免疫反应产物的相对含量 显著降低( P0 . 0 1 ) , D X M组与 C Y组比较, 阳性细胞免疫 反应产物的相对含量无明显差异(
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- 关 键 词:
- 剂量 环磷酰胺 脓毒症 大鼠 急性 损伤 影响
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