低氧诱导因子-1α在压力过负荷大鼠心肌组织的表达.pdf
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1、l O 低氧诱导因子一10 【在压力过负荷 大鼠心肌组织的表达 王婷,赵玉兰 郑州大学第二附属医院心内科郑州市4 5 0 0 1 4 摘要目的探讨压力过负荷造成的大鼠心肌肥厚组织H I F l a 表达。方法3 0 只雄性W i s t a r 大鼠随 机分为3 组,假手术组( A 组) 1 0 只,模型组( B 组) 1 3 只,正常组( C 组) 7 只。采用腹主动脉缩窄法制作心肌肥 厚模型。6 周后检测大鼠心肌肥厚程度,血流动力学指标以及心肌组织中H I F l a 的表达。结果与A 、C 组相 比,B 组大鼠心肌组织明显肥厚( P O 0 1 ) ;心肌组织H I F l 表达明显增加
2、( P O 0 1 ) 。结论压力过负荷 造成的大鼠心肌肥厚组织,H I F 一1 a 表达明显增加。 关键词 心肌肥厚;低氧诱导因子一l e t ;压力过负荷 中图分类号:R 一3 3 2文献标识码:A 文章编号:1 6 7 2 - 3 4 2 2 ( 2 0 0 8 ) 0 7 - 0 0 1 0 - 0 3 O v e rE x p r e s s i o no fH y p o x i a i n d u c i b l eF a c t o r 一1o 【i n P r e s s u r e o v e r l o a d e dR a tH e a r t W A N GT i
3、n g ,Z H A OY u l a n D e p a r t m e n to fC a r d i o l o g y ,T h eS e c o n dH o s p i t a lA f f i l i a t e dt o Z h e n g z h o uU n i v e r s i t y ,Z h e n g z h o u4 5 0 0 1 4 ,C h i n a A B S T R A C T O b j e c t i v e T oe v a l u a t et h ee x p r e s s i o no fh y p o x i ai n d u c i
4、 b l ef a c t o r 一1afH I F 一 1 仅) i nh y p e r t r o p h i cm y o c a r d i u mo fr a t M e t h o d s T o t a l3 0m a l eW i s t a rr a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t os h a m o p e r a t e dg r o u p ( A ,n = 1 0 ) ,m o d e lg r o u p ( B ,n = 1 3 ) a n dc o m m o ng r o u p ( C ,n =
5、7 ) M y o c a r - d i a lh y p e r t r o p h yw a sp r o d u c e db ya b d o m i n a la o r t i cb a n d i n g 6w e e k sl a t e r ,w ee x a m i n e dt h ee x t e n to f t h em y o c a r d i a lh y p e r t r o p h y ,r e c o r dh e m o d y n a m i cp e r f o r m a n c e ,d e t e r m i n e dt h ee x
6、p r e s s i o no fH I F lo t i nh y p e r t r o p h i cm y o c a r d i u mo fr a t R e s u l t s C o m p a r e dw i t ht h eg r o u pAa n dC ,t h el e f tv e n t f i c u l a rh y p e r t r o p h y ( L V H ) w e r ei n c r e a s e di ng r o u pB ( P O 0 1 ) E x p r e s s i o nH I F l o ts i g n i f i
7、 c a n t l yi ng r o u p B ( P 0 0 1 ) C o n c l u s i o nO v e re x p r e s s i o no fH I F l0 【i nh y p e r t r o p h i cm y o c a r d i u mo fr a tt h a t c a u s e db yp r e s s u r e o v e r l o a d e d , K E YW O R D S M y o c a r d i a lh y p e r t r o p h y ;H y p o x i ai n d u c i b l ef a
8、 c t o r - la ;P r e s s u r e - o v e r l o a d 心肌肥厚是对血流动力学过负荷的一种适应 性反应,是心血管疾病独立的危险因素。长期的 心肌肥厚致使心衰及猝死的风险增加。低氧诱导 因子一l ( H I F 一1 ) 为缺氧信号转导途径中一关键 性调节因子。与心血管疾病有密切的关系,而其 与心肌肥厚的研究十分少见,本文旨在观察压力 过负荷造成的大鼠心肌肥厚组织H I F 一1 的调节 亚基H I F l o t 的表达。 1 材料与方法 。 1 1 试剂与仪器多媒体生物信号记录仪系统 ( R M 6 2 4 0 C D 型,成都仪器厂制造) ,压力换
9、能器 ( Y P J 0 l 型,成都仪器厂制造) ,鼠H I F l e t 单克隆 抗体( N E M A R K E R S 公司) ,s P 免疫组化试剂盒 ( 北京中杉公司) ,B i o s e n sD i g i t a lI m a g i n gS y s t e m ( 上海富山科学仪器有限公司) ,德国L e c i a 图像采 集系统。 1 2 动物模型制作及实验分组健康雄性W i s t a r 大鼠3 0 只,体质量1 5 0 2 0 0 9 ,购自河南省实验动 物中心,适应性喂养3 d 后随机分为3 组,A 组( 1 0 只) 、B 组( 1 3 只) 、C 组
10、( 7 只) 。腹主动脉缩窄模 型制作方法:1 0 水合氯醛( 1 0 0 9 L ) 腹腔注射麻 万方数据 ! 坚翌坐堂丛! 生i ! 坐里! 坐磐! ! ! :兰!盟! :2巳墨! 至塑! 醉,腹正中切口,使腹主动脉充分暴露,在双肾动 脉上方0 5 c m 处剥离腹主动脉,使用1 号丝线将7 号针头与腹主动脉共同结扎,然后抽出针头,造成 腹主动脉管腔环形缩窄约5 0 一6 0 。其中A 组 仅丝线穿过腹主动脉,继续喂养6 周。 1 3 测定血流动力学指标2 0 0 9 L 乌拉坦 ( 0 7 9 k g ) 麻醉大鼠后,右颈总动脉逆行插管至主 动脉,另一端接压力换能器输入多媒体生物信号 记
11、录仪系统,记录分析后得动脉收缩压( S B P ) 、舒 张压( D B P ) ;继续插管至左心室记录心率( H R ) 、 左室舒张末压( L V E D P ) 。 1 4 测定心肌肥厚程度及标本制备检测大鼠 血流动力学指标以后,快速取出心脏,剪去周围组 织,冰生理盐水( 一4 冰箱保存) 冲洗,滤纸吸干 表面及心室腔内液体,分别称取左心室( 包括室间 隔) 与右心室质量,以左右心室质量体质量做为 相应的心肌肥厚指数( L V M B M 、R V M B M ) 。将 左心室浸入1 0 9 L 多聚甲醛溶液中固定,石蜡包 埋,切片备用。 1 5 免疫组化石蜡切片常规H E 染色。另取切
12、 片严格按照s P 试剂盒说明书操作制作免疫组化 兵力图片。以P B S 液代替抗作为阴性对照。苏 木素复染。阳性表达呈棕黄色颗粒样改变。用 L e c i a 图像采集系统采集图像。另一份不复染采用 B i o s e n sD i g i t a lI m a g i n gS y s t e m ,在1 0 2 0 倍视野 下,随机选定5 个染色较均匀区域,测定H I F l o t 阳性心肌细胞面积比( a r e a ) 、积分光密度值 ( I O D ) 。 1 6 统计学方法数据均以( 石s ) 表示,采用 S P S S l 0 0 统计软件进行单因素方差分析。以e t = O
13、 0 5 为检验水准。 2 结果 2 1 一般情况术中及术后大鼠共死亡5 只,至 实验结束A 组9 只,B 组9 只,C 组7 只。各组大 鼠进食及活动耐量无明显差异。 2 2腹主动脉缩窄后大鼠心肌肥厚指数及部分 血流动力学指标变化与A 、C 组相比,B 组大鼠 L V M B M 、H R 、S B P 、D B P 、L V E D P 均增加,心肌肥 厚显著( P 0 0 1 ) 。A 组与C 组大鼠相比则无显 著差异( 详见表1 ) 。一二4 + 。, 2 3 各组间H E 染色结果对各组H E 染色结果 显微镜下观察发现:A 组与C 组大鼠心肌细胞呈 短柱状,排列整齐而紧密,染色清晰
14、,结构完整,胞 浆中横纹清楚,细胞质均匀呈粉红色,细胞核致密 清晰可见,圆形或卵圆形,呈蓝色。与A 、C 组相 比,B 组嗜酸性增强,心肌细胞明显肥大,排列不规 则;心肌组织中纤维结缔组织增生,断裂明显。 2 4 腹主动脉缩窄后大鼠心肌组织中H I F - l e t 表达的变化H I F l e t 在心肌细胞、动脉内皮细 胞、平滑肌细胞均有表达。A 组与C 组心肌组织 仅偶有H I F 一1 e t 表达,主要表达于细胞核。B 组 H I F l e t 在细胞核表达明显增加,细胞浆亦有少量 表达,靠近心肌细胞膜处较明显。免疫反应强度 明显增强( P 0 0 1 ) 。各组大鼠H I F
15、一1 0 t 表达面 积比( a r e ) 积分光密度( I O D ) 变化见表2 。 表2 各组大鼠H I F l e t 表达面积比( a x e a ) 积分光密度( I O D ) 变化 组另0 nH I F 一1 c t a r e a H I F 一1 aI O D A9 B9 3 2 4 - t - O 3 8 9 5 34 - 0 2 8 1 4 24 - 0 2 4 6 4 24 - 0 4 4 A C73 0 14 - 0 5 21 2 0 0 3 7 3 讨论 H I F 一1 是S e m e n z a 等于1 9 9 2 年发现的,其 调节亚基H I F l e
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