低温-复温对大鼠肾脏细胞凋亡的影响及丹参的保护作用.pdf
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1、第4 2 卷第3 期 哈尔滨医科大学学报V 0 1 4 2 N o 3 2 0 0 8 年6 月J O U R N A Lo FH A R B I NM E D I C A LU N I V E R S I T Y J u n 2 0 0 8 2 5 5 低温复温对大鼠肾脏细胞凋亡的 影响及丹参的保护作用 陈起引1 ,王春阳2 ,倪少滨 ( 1 哈尔滨医科大学第一临床医学院泌尿外科,黑龙江哈尔滨1 5 1 3 0 0 1 ; 2 天津市泌尿外科研究所,天津医科大学g - 医院,天津3 0 0 2 1 1 ) 摘要 目的 探讨低温一复温过程对大鼠肾脏细胞凋亡的影响及丹参的保护作用。方法建立W i
2、 s t a r 大鼠肾脏 离体非循环灌注模型,随机分为4 组( n = 1 2 ) :对照组、低温保存组、低温复温组、丹参实验组。采用T U N E L 法检测 肾组织细胞凋亡情况,免疫组化S A B C 法观察C a s p a s e - 3 、B e l - 2 蛋白表达情况。结幂低温复温组细胞凋亡指数为 ( 5 3 24 - 1 7 1 ) ,显著高于对照组( O 2 0 1 ) 和低温组( 0 3 4 - 0 1 ) ( P 0 0 1 ) ;丹参实验组细胞凋亡指数( 3 6 7 4 - 1 4 6 ) 明显低于低温- 复温组( 5 3 2 1 7 1 ) ( P 0 0 5 )
3、;丹参实验组C a s p a s e - 3 表达( 5 4 4 - 1 3 ) 低于低温复温 组( 1 1 9 4 - 6 2 ) ( P 0 0 5 ) ,而B d - 2 表达( 1 8 4 - 0 3 ) 高于低温复温组( 0 7 4 - 1 5 ) ) ( P 0 0 5 ) 。结论低温 复温过程可造成肾脏细胞凋亡显著增加;丹参可减少肾脏复温相关性细胞凋亡,其机制可能与抑制C a s p a s e - 3 活性、 上调B c l 2 基因表达有关。 关键词 丹参;肾脏移植;低温复温;凋亡;大鼠 中图分类号 R 一3 3 2 ;R 2 8 5 5 文献标识码 A 文章编号 1 0
4、0 0 1 9 0 5 ( 2 0 0 8 ) 0 3 0 2 5 5 0 3 P r o t e c t i v ee f f e c to fS a v am i l t i o r r h i z ao nr e w a r m i n g - a s s o c i a t e d a p o p t o s i so fr a tk i d n e y C H E NQ i y i n ,W A N GC h u n y a n g ,N IS h a o b i n ( D e p a r t m e n to fU r o l o g y ,T h eF i r s tC l i
5、 n i c a lC o l l e g e ,H a r b i nM e d i c a lU n i v e r s i t y ,H a r b i n1 5 0 0 0 1 ,C h i n a ) A b s t r a c t :O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t ep r o t e c t i v ee f f e c to fS a l v i am i l t i o r r h i z ao nr e w a n n i n g - a s s o c i a t e da p o p t o s i s o fr a t
6、k i d n e y M e t h o d s I s o l a t e dn o n r e c i u c u l a t e dp e r f u s i o nm o d e lo fr a tk i d n e yw a se s t a b h s h e d F o r t y - e i g h t W i s t a rr a t sw e r er a n d o m l yd e v i d e di n t o4g r o u p s ( 7 , = 1 2 ) :c o n t r o lg r o u p ,c o l dp r e s e r v a t i
7、 o ng r o u p ,c o o h n g r e - w a r m i n gp r e s e r v a t i o n ,a n ds a l v i am i h i o r r h i z ag r o u p T h ea p o p t o s i so fk i d n e yt i s s u eW a se x a m i n e dw i t hT U N E L a s s a y ,a n dt h ee x p r e s s i o n so fC a s p a s e - 3a n dB c l 一2w e r ed e t e c t e dw
8、 i t hi m m u n o c h e m i c a lm e t h o d R e s u l t s T h e a p o p t o s i si n d e x ( A I ) o fk i d n e yW a s ( 5 3 2 1 7 1 ) i nc o o l i n g r e w a r m i n gg r o u p ,w h i c hw a sh i g h e rt h a nt h a t i nn o r m a lg r o u p ( O 2 0 1 ) ( P 0 0 1 ) a n di nc o l dp r e s e r v a
9、t i o ng r o u p ( 0 3 0 1 ) ( 尸 0 0 1 ) B u ti tw a sm u c hl o w e ri nS a v am i l t i o r r h i z ag r o u p ( 3 6 7 1 4 6 ) ( P O 0 5 ) C o m p a r e dw i t hc o o l i n g r e w a r m i n gg r o u p ( 1 1 9 6 2 ) v s ( 0 7 1 5 ) ,t h ep r o t e i ne x p r e s s i o no fC a s p a s e 一3i nS a l
10、v i am i l t i o r r h i z a g r o u p ( 5 4 1 3 ) ( P 0 0 5 ) W a sd e c r e a s e d ,w h i l et h a to fB c l 一2g r o u p ( 1 8 0 3 ) ( P 之0 0 5 ) W a s i n c r e a s e dr e m a r k a b l y C o n c l u s i o nT h ep r o c e s so fc o o l i n g r e w a r m i n gm a ya c c e l e r a t et h ea p o p
11、t o s i so fk i d n e y , w h i c hc o u l db ea m e l i o r a t e db yS a l v i am i l t i o r r h i z at h r o u g hi n h i b i t i n gC a s p a s e 3a c t i v i t ya n du p r e g u l a t i n gB c l - 2 e x p r e s s i o n K e yw o r d s :S a l v i am i l t i o r r h i z a ;k i d n e y ;c o o l i
12、n g r e w a r m i n g ;a p o p t o s i s ;r a t 收稿日期】2 0 0 7 0 6 0 5 基金项目 黑龙江省科技攻关项目( G 0 0 5 C A 0 7 0 5 ) 作者简介】陈起引( 1 9 6 7 一) ,男,黑龙江齐齐哈尔人,副主任医师, 博士研究生。* 通讯作者 本研究在建立大鼠肾脏离体非循环灌注模型基 础上,观察低温复温过程对离体肾脏细胞凋亡、B 细胞白血病淋巴瘤2 ( Bc e l ll e u k e m i a l y m p h o m a - 2 , B c l 一2 ) 和C a s p a s e - 3 蛋白表达的影响
13、以及传统中药丹 万方数据 2 5 6哈尔滨医科大学学报 第4 2 卷 参( S a l v i am i l t i o r r h i z a ) 的作用。旨在探讨温度变化对 肾脏的损伤机制,并进一步提出防治策略。 1 材料与方法 1 1 实验动物模型制作与分组 清洁级健康W i s t a r 大鼠购自哈尔滨医科大学第 一临床医学院实验动物中心,雌雄不拘,体重1 5 0 1 8 0g 。麻醉采用质量分数为1 0 g L 戊巴比妥钠 溶液3 0m g k g 腹腔注射。腹部十字切口,游离双侧 肾脏,暴露肾蒂,待结扎。游离暴露腹主动脉上段以 及肾蒂以下约0 3c m ,置F 1 0 号输液管,
14、妥善固定。 采用无创动脉夹夹闭腹主动脉上部,以0 。4 灌洗 液,恒压0 8 1 0k P a 灌洗肾脏,待静脉充盈后穿刺 肾静脉,至肾脏颜色变白、肾静脉流出液清澈后灌洗 停止,切取肾脏。实验大鼠分为4 组( n = 1 2 ) :对照 组;低温保存组:4 下H C A 液离体非循环灌注法 保存供肾2 4h ;低温复温组:4 保存2 4h 后,3 7 保存2 4h ;丹参实验组则参考文献 1 ,在高渗枸橼 酸盐腺嘌呤溶液( h y p e r t o n i cc i t r a t e a d e n i n e ,H C 。A ) 中 添加丹参,浓度为1 5g L ,余同低温复温组。 1
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