体外菲立磁标记恒河猴骨髓基质细胞自体移植入纹状体后磁共振对标记细胞形态学的示踪观察.pdf
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1、4 2 中国临床康复 第 1 0 着 第 1 期 2 0 0 6 - 0 1 - 1 0 出版 C h i n e s e J o u r n a l o f C l i n i c a l R e h a b i l i t a t i o n j a n a a r y 1 0 2 0 0 6 V o l . 1 0 N o . 1 蔽础研究 体外 菲 立 磁 标 记 恒 河 猴 骨 髓 基 质 细 胞自 体 移 植 人 纹 状 体 后 磁 共 振 对 标 记 细 胞 形 态 学 的 示 踪 观 察* * * * * * * * “ 柯以牲 , 杨志军 , 彭 苹 , 徐如祥 , 姜晓丹
2、, 魏玲 , 王松青 , 饶志仁2 , 段丽2 , 曹 容2 , 蔡颖谦 , 杜谋选 , 邹雨汐 南方医科大学珠江医院神经外科, 广东省广州市 5 1 0 2 8 2 ; 2 解放军第 四军医大学神经科学研究所, 陕西省西安市7 1 0 0 3 2 柯以锭, 男, 1 9 6 3 年生, 福建省平潭县人, 汉族, 南方医科大学在读博 士, 教授, 主任医师, 硕士研究生导师, 主要从事神经功能损害的修复研 究。 z h ij u n y a n g f m m u y a h o o .c o m .c n 通讯作者: 徐如祥, 博士, 教授, 南方医 科大学珠江医院 神经外科, 广东 省广州
3、市 5 1 0 2 8 2 , z j x r x 1 6 3 .n e t 国家自然科学基金 ( 3 0 4 0 0 4 6 4 , 3 0 2 7 0 4 9 1 ) * * ;中国博士后基金 ( 2 0 0 3 0 3 4 0 6 3 ) * ; 广东 省自 然科学 基金博士科研启动基金( 0 4 3 0 0 1 9 9 ) * ; 广东 省名医 工 程 研究 项目 ( 粤卫 【2 0 0 4 1 9 9 号) * ; 广州 地区 科学 仪器 协 作共用网专用墓金( 2 0 0 5 0 8 9 ) * ; 军队( O I Z O 5 4 ) 及广东省科技厅 粤科基 办( 2 0 0 0
4、) 2 5 、 粤对企( 2 0 0 1 ) 3 6 7 重大 科技项目 基金* * 中圈分类号:8 3 9 4 . 2文献标识码:A文章编号: 1 6 7 1 - 5 9 2 6 ( 2 0 0 6 冲 1 - 0 0 4 2 - 0 4 收稿日 期: 2 0 0 5 - 1 0 - 2 2 修回日 期: 2 0 0 5 - 1 1 - 0 2 ( 0 5 - 2 6 - 5 - 4 4 1 6 / S “ Q T h e re s u l t s o f F e r i d e x s h o w e d t h a t B M S C s c o u l d s u r v i v e
5、i n b r a i nw i t h l a b e l e d B MS C s a n d n o b r a i n . w e r e b a s i c a l l y s i g n a l c h a n g e c o r r e l a t e dwi t h h i s t o p a t h o l o g ic a l C ONC L US I ON: M R i m a g e s i o n r e s u l t T h e t r a n s p l a n t e dB M S C s c a n s u r v i v e , m i g r a t e
6、 , d i ff e re n t i a t e a n d i n c o r p o r a t e i n t h e b r a i n . M R I t e c h n i q u e i s i d e a l l y s u i t e d f o r p r i m a ry i n v i v o t r a c k i n g o f l a b e l e d s t e m c e l l s a f t e r g r a f t i n g T r a c k i n g o b s e r v a t i o n o f c e l l m o r p h
7、o l o g y w i t h m a g n e t i c r e s o n a n c e a f t e r a u t o l o g o u s t r a n s p l a n t a t i o n o f b o n e m a r r o w s t r o m a l c e l l s o f r h e s u s m o n k e y i n t o t h e s t r i a t u m l a b e l e d w i t h F e r i d e x i n v i t r o K e Y i- q u a n , Y a n g Z h i
8、- ju n , P e n g P in g , X u R u - x ia n g , J ia n g X ia o - d a n , W e i L in g , W a n g S o n g - g in g , R a o Z h i- r e n t , D u a n L ie , C o o R a n g , C a i Y in g - g ia n , D u M o u - x u a n , Z o u Y u - x i D e p a rt m e n t o f N e u r o s u r g e ry , Z h u j i a n g H o s
9、 p i t a l , S o u t h e r n M e d i c a l U n i v e r s i t y , G u a n g z h o u 5 1 0 2 8 2 , G u a n g d o n g P r o v i n c e , C h i n a ; I n s t i t u t e o f N e u ro s c i e n c e , F o u rt h M i l it a ry M e d ic a l U n i v e r s i t y o f C h i n e s e P L A , X i a n 7 1 0 0 3 2 , S
10、h a a n x i P ro v i n c e , C h i n a K e Y i- q u a n *, S t u d y i n g f o r d o c t o r a t e , P ro f e s s o r , C h i e f p h y s i c i a n , T u t o r o f m a s t e r , D e p a rt m e n t o f N e u r o s u r g e ry , Z h u j i a n g H o s p i t a l , S o u t h e rn M e d i c a l U n i v e r
11、 s i t y , G u a n g z h o u 5 1 0 2 8 2 , G u a n g d o n g P r o v i n c e , C h i n a z j x r x 1 6 3 . n e t C o r r e s p o n d e n c e t o : X U R u - x la n g , D o c t o r , P ro f e s s o r , D e p a rt m e n t o f N e u ro s u r g e ry , Z h u j i a n g H o s p i t a l , S o u t h e rn M e
12、 d i c a l U n i v e r s i t y , G u a n g z h o u 5 1 0 2 8 2 , G u a n g d o n g P r o v i n c e , C h i n a z j x r x 1 6 3 .n e t S u p p o r t e d b y : t h e N a t i o n a l N a t u r a l S c i e n c e F o u n d a t i o n o f C h i n a . N o . 3 0 4 0 0 4 6 4 * , 3 0 2 7 0 4 9 1 * ; P o s t d
13、o c t o r a l F o u n d a t i o n o f C h i n a , N o . 2 0 0 3 0 3 4 0 6 3 * ; D o c t o r a l S t a r - u p F o u n d a t io n f o r S c i e n t i f i c R e s e a r c h o f N a t u r a l S c i e n c e F o u n d a t i o n o f G u a n g d o n g P r o v i n c e , N o . 0 4 3 0 0 1 9 9 * ; R e s e a r
14、 c h P r o g r a m f o r G r e a t P h y s ic i a n o f G u a n g d o n g P r o v i n c e , N o . 2 0 0 4 1 9 9 * ; S p e c i a l F o u n d a t i o n o f S c i e n t if i c I n s tr u m e n t C o o p e r a t i o n C o m m u n i o n N e t w o r k o f G u a n g z h o u A r e a , N o .2 0 0 5 0 8 9 * ;
15、 S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y F o u n d a t i o n K e y P ro g r a m o f M i l i t a ry a n d D e p a r t m e n t o f S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y o f G u a n g d o n g P ro v i n c e o f G u a n g z h o u A r e a , N o . O I Z O 5 4 , ( 2 0 0 0 ) 2 5 1 0 (1 ) :4 2 - 5 ( C h i
16、n a ) 柯以 性, 杨志军, 彭苹, 徐如祥, 姜晓丹, 魏玲, 王松青, 饶志仁, 段丽。 曹容, 蔡颖谦, 杜谋选, 邹雨汐.体外菲立磁标记恒河猴骨髓基质细胞自体移植入纹状体后磁共 振对标记细胞形态学的示踪观察J . 中国临床康复, 2 0 0 6 , 1 0 ( 1 ) :4 2 - 5 w w w .z g lc k f .c o m l 摘要 目的:将体外菲立磁标记的骨髓基质细胞经单细胞悬液微移植后, 观察 其在恒河猴纹状体的存活、 迁移、 分化和整合状况, 为细胞移植治疗疾 病奠定基础。 方法: 实验于2 0 0 4 - 0 4 / 2 0 0 5 - 0 5 在南方医科大学珠
17、江医院全军神经医 学研究所和解放军第四军医大学神经科学研究所完成。纳人健康恒河 猴 3 只, 分离恒河猴骨髓基质细胞, 利用神经干细胞培养基、 白血病抑止 因子和碱性成纤维母细胞生长因子进行细胞扩增并诱导成骨髓基质源 神经干细胞, 再经体外菲立磁和活细胞荧光染料 P K 6 7 标记后, 采用微 移植的方法,通过脑立体定位仪上用微玻璃针将干细胞分别植人脑纹 状体内。细胞移植后1 , 4 , 8 周应用核磁共振成像对脑内移植的细胞进 行活体示踪, 最后利用光镜和电镜观察标记细胞在脑内的形态学情况。 结果体外菲立磁标记结果; 骨髓基质细胞经微移植后可在脑内 纹状体 区域存活, 移植的干细胞可向周围
18、的脑实质内迁移和整合, 迁移细胞沿特 定的纹状体结构分布, 少量细胞可分化成神经元。 核磁共振成像检查 结果: 发现脑内移植的标记细胞在磁共振上呈明显的低信号改变, 未标 记细胞侧脑组织无明显的低信号改变, 与组织学切片结果基本相一致。 结论: 骨髓基质源神经干细胞移植后, 可在脑内存活、 迁移、 分化和整合, 利用核磁共振成像技术可以对脑内移植后的标记细胞进行初步的活体 追踪。 主题词: 干细胞: 骨髓; 细胞培养; 移植; 纹状体 Ab s t r a c t A I M: T o i n v e s t i g a t e t h e s u r v i v a l , m i g r
19、a t i o n , d i f f e r e n t i a t i o n a n d i n c o r p o r a t i o n o f l a b e l e d b o n e m a r r o w s t r o m a l c e l l s ( B M S C s ) o f r h e s u s m o n k e y a f t e r b e i n g t r a n s p l a n t e d i n t o t h e s t r i a t u m w i t h s i n g l e c e l l s u s p e n s i o n
20、a n d t o i n v e s t i g a t e t h e p o s s i b i l i t y o f a n e w c e l l s o u r c e f o r c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m t r a n s p l a n t a t i o n . ME T H O D S : T h e e x p e ri m e n t w a s c o n d u c t e d a t t h e I n s t i t u t e o f M i l i t a ry N e u r o l o g y M
21、 e d i c a l , Z h u j i a n g H o s p i t a l , S o u t h e rn M e d i c a l U n i v e r s i t y a n d I n s t i t u t e o f N e u ro s c i e n c e , F o u rt h M i l i t a ry M e d i c a l U n i v e r s it y o f C h i n e s e P L A f ro m A p ri l 2 0 0 4 t o M a y 2 0 0 5 . T h r e e h e a l t h
22、y r h e s u s m o n k e y s w e r e i n v o l v e d . B M S C s o f r h e s u s m o n k e y w e r e s e p a r a t e d a n d p e r f o r m i n g c e l l a m p l i f i c a t i o n a n d i n d u c e i n t o s t e m c e l l s o f B M S C s - D - N S C s w i t h N S C s c u l t u r e m e d i u m , l e u
23、k e m i a i n h i b i t o r a n d b a s i c f i b ro b l a s t g r o w t h f a c t o r . A f t e r t h e s e c e l l s w e r e f u rt h e r l a b e l e d w i t h F e ri d e x a n d P K H 6 7 i n v i t r o , t h e y w e r e t r a n s p l a n t e d i n t o s t r i a t u m b y m i c r o t r a n s p l a
24、 n t a t i o n m e t h o d w i t h b r a i n s o l i d p o s i t i o n e r . A f t e r 1 , 4 a n d 8 w e e k s , t h e m o n k e y s w e r e t r a c e d i n v i v o a n d t h e i r b r a i n t i s s u e s w e r e s e c t i o n e d t o i n v e s t i g a t e t h e m o r p h o l o g y o f t h e t r a n
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