促红细胞生成素对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡及坏死的影响.pdf
《促红细胞生成素对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡及坏死的影响.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《促红细胞生成素对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡及坏死的影响.pdf(3页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、中国临床 保健杂志 2 008 年4 月第1 1 卷第2 期 c 枯 n j c u n H e 日 t 玩, A p d l Z oos , v ol . 1 1 , N o . 2 1 8 1 基 础研 究 促红细胞生成素对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡 及坏死的影响 朱 兵” , 秦宇 红,“ , 杨雪 。 , 赵宝 成 2 ( 1 . 解放军总医院, a 南楼临床部心血管二科, b心内科, 。 南楼临床部保健科, 北京 1 008 53; 2 , 解放军总政机关门诊部) 摘要1 目的 观察促红细胞生成素( E PO) 对对缺氧心肌细胞的保护效应及量效关系。方法将当日 生乳鼠, 局部碘酒酒精消毒后
2、胸骨正中开胸, 取心尖前1 /2 心室肌进行细胞培养。培养4d 后选择细胞生长 情况良 好的 培养瓶( 1 0 6 个细胞 / 瓶) 分为3 组: A , 对照组, 正常培养; B , 缺氧组, 缺氧1 丫复氧12h ; C , E P O 组, 缺氧 / 复氧加E P O干预。E P O组根据不同E Po 干预浓度又分为C l , E PO 千预浓度0 . I I U/nil; CZ, E P o浓 度I I U/d; C3, E P O干预浓度10 I U/d。然后以 荧光染色一 流式细胞仪检测缺氧 / 复氧后心肌细胞的凋亡及 坏死情况。结果缺氧组细胞的凋亡、 坏死比率分别为( 20. 7
3、8土 2 . 98) %和( 50. 10土 0 . 29) %, 明显高于E P O 各组( P均小于0 . 01) , 也明显高于对照 组【 ( 2 . 3 土 1 . 00) %和( 1 . 5 土 0 . 4 8)%, 尸 10 6 个细胞 / 瓶) 进行分 组、 干预。干预前所有样本用含 1 %小牛血清 D E M E培养液培养过夜, 使细胞生长期统一至 GO 期, 然后分为3 组: 对照组( A , 正常培养) 、 缺氧组 ( B , 缺氧Zh/复氧1 2h ) 、 E P O组( C , 缺氧Zh/复氧 12h 加E P O干预) ; E Po 组又根据E P O干预浓度不 同分
4、 为 C I( 0 .II U / M L ) 、 C Z( II U / m l ) 、 C 3 ( 10IU/ m l ) 。每组各4 瓶细胞。同时接种24孔培养 板至长满, 也按以上分组干预。缺氧组: 换预先用 C O Z 充气置 换过的 无血清D E M E 培养液, 培养瓶内 也 用C O , 气体充人置换其中的空气, 密封后37孵育; Z h 后换含 10%小牛血清D E M E培养液正常条件下 ( 95%空气+ 5 %C O : ) 孵育。E P O 组: 缺氧 / 复氧处理 同上, 同时加人 E P O , 使培养液中药物终浓度达 I I U/耐( 加药容积感总培养液的0 .
5、5 %) 。对照组不 进行缺氧/ 复氧及用药处理, 滴等量生理盐水。 1 . 2 . 3 细胞凋亡及坏死检测缺氧2丫复氧 12h 末, 以0 .25%胰蛋白酶消化悬浮细胞, 用 A nnexin V 一 Pl染色, 流式细胞仪检测细胞凋亡。每样本计数 至 少ro , 个细胞。数据采集后传送至A PPl e G3 电 脑, 最终由C e l l Q u e s t 软件( B e c t o nD i c k i n s o n 公司产 品) 处理。 4 , 6 一 联眯一苯基叫噪( D A PI) 及结晶紫染色: 缺 氧/ 复氧完毕, 先换用含40 n 留ml D A PI的培养基 l h ,
6、 然后倒去培养基, 用 P B S 清洗耳恭听贴壁细胞 6次, 在荧光显微镜下观察; P B S 清洗, 再加入结晶 紫工作液染色10 m in, 在倒置显微镜下观察拍片。 1 . 3 统计学处理实验数据由C HISS 统计软件统 计, 实验结果均以( 牙 士 , ) 表示, 组间比较采用两因素 定量资料的方差分析, 但由于此资料组间方差不齐, 用秩和检验代替。 2 结果 2 . 1 细胞培养培养的第二代心室肌细胞多呈长 方型或多边型, 大部分细胞呈现有节律地自主性 搏动。D M E M含血清培养基在经过 C O : 预先充气 1 2 h 后, 测氧分压 2 6m m H g ,二氧化碳分压
7、3 0 5 m mH g , p H值为56 3 。 2 . 2 各组细胞在缺氧2扮复氧12h 后行流式细胞 仪凋亡检测 见表1 。 表1 各实验组细胞存活、 凋亡、 坏死百分比( 牙 士 : , % 组别存活细胞 9 2 . 7 8士33 5 1 3 . 3 4土3 . 2 0 a 早期凋亡细胞 50421816 对照组 缺氧组 E P01 组 E P 0 2 组 E P 0 3 组 . 1 8 士 74 9 . 5 6 士 6 . 3 7 血 2 . 3士1 . 09 2 0 . 7 8 士 4 . 9 8 三 1 3 . 7 8 士 3 , 7 4 . 8 . 4 1 士 2 . 5 2
8、 耐 . 5 6 士 1 1 . 3 2 掀1 03 7 士 4 . 6 3 曲 坏死细胞 1 . 5士 0 . 4 8 . 1 0士 72 9 a . 5 1 土 5 . 4 9 . . 5 6 士 4 . 5 6 山 8 5 士 63 3 血 如6562 注: 对照组( 正常培养) 、 缺氧组( 缺氧2 拟复氧12h)、 E P O 组( 缺氧Z h/复氧1 2 h 加E PO 干预) ; E P O 组又根据E P O干 预浓度不同分为E P 0 1 ( 0 . 1 1 U/M L ) 、 E P 0 2 ( I I U/耐) 、 E P 0 3 ( 10l u/nil) 。 与 对 照
9、 组比 较, “ 尸 0 . 01; 与 缺 氧 组比 较, b p 0 . 0 1 ; 与E p o l 组比 较, “ 尸 0 . 0 1 , d 尸 0 , 05 2 . 3 缺氧2 扮复氧12h 后行D A PI及结晶紫染色 显示 对照组细胞的细胞核保持完整, 绝大部分细 胞整体形态正常; 缺氧组则可见部分细胞胞核呈碎 裂或凝固成小体, 成片细胞整体结构破坏, 胞浆内容 万方数据 中国临床保健杂志 2 (X8 年4 月第1 1 卷第2 期C h j n J C l i nH 翻the , A p ri 1 2 (X)8 . v ol . 1 1 。 N O . 2 1 8 3 消失,
10、只剩下细胞骨架结构; E Po 干预组所见情况 介于以上二者之间。 3 讨论 在动物试验中证实了E Po 对体外培养的哺乳 动 物心肌细胞具有抗凋亡为主的 保护效应 , 。并 且E Po 能抑制心肌细胞凋亡关键效应酶casP as e -3 的活化 4 。 本研究中发现, 不同浓度的E PO 对缺 氧一 复氧的心肌细胞均有保护作用, 在。 , I IU / ml浓 度下已显著减少了细胞凋亡; 而且随E P O浓度增加 到I I U/rnl 时, 保护作用进一步加大, 但E Po 浓度增 到10 I U/d时, 保护作用不再增加。而且 E PO 不仅 对于凋亡, 对于坏死同样具有保护作用。本研究
11、中 应用C O : 代替氮气进行培养基内空气置换制造缺 氧模型, 不仅模拟了缺氧环境, 还增加了酸中毒的环 境, 更接近于在体的缺氧的条件, 因此大量细胞死 亡, 但E Po 同比例减少了细胞的坏死。 关于E P O心肌保护作用信号转导机制的研究 发现, E P O可以作用于心肌细胞后激活 PI 3 称 A ki 通路, 且该通路与E Po 的抗心肌细胞凋亡作用有 关 ” 。 PI 3 份A kt可 能 通 过 其 下 游 多 种 信 号 机 制 产 生心肌 保护作用。以 往研究 ” 发现, E Po 可能通过 心肌细胞表面特异性 E P O的受体发挥对心肌细胞 的作用, 本研究发现E Po
12、细胞保护作用存在的浓度 梯度相关性及饱和现象进一步提示了这种可能性。 参考文献 1 。 y e u x 一 F a u reM , C 司in 一 凡 b u o t D , R i b u otC . Eryt h r o poi e - t i n an d 卿oc aldi 以vrot e c ti o n : what 。 n e w J . F u n d am C l i nPharm a c o 】 , 2 0 0 5 , 1 9( 4 ) : 4 3 9 礴 4 6 . 2 C h a t t e 巧 e e p K . Pl e i otro p i c re nal a c
13、 t i on s ofe 叮 th ro Poi e t i n J . l a ” c e t , 2 005 , 3 6 5 ( 9 4 7 4 ) : 1 5 9 0 一 1 5 9 2 . 3 黄树其, 邵福源. 促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠 认知功能的影响 J . 医学临床研究, 2 以 巧 , 23( 5 ) : 65 3 石5 5 . 4 B ahllnann F H , Son g R , B oe h mS M, atal. 1 O w . d o s e th e r- 即y witht h e fo n g 一 ac t i n g e 尔h ro Poi e t i
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 红细胞 生成 缺氧 心肌 细胞 坏死 影响
链接地址:https://www.31doc.com/p-3699305.html