传染性法氏囊病病毒 VP243CHIL2融合基因DNA疫苗免疫原性研究.pdf
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1、传染性法氏囊病病毒! “ # $ % 3 , 7 + 1 ? ( / ? 4 ( 5 * + ( 3 5 ( 3 2 + 4 ? (,A B C D) 多聚蛋白 (D ; “E#) 基因和鸡白细胞介素“ ( 3 , 7 + 1 ? (/ ? 4 ( 5 * + ( 3 5 ( 3, A B C) 是目前危害世界养禽业的三大主要传染病之 一, 该病的病原传染性法氏囊病病毒 (+ - 3 , 7 + 1 ? (/ ? 4 I ( 5 * + ( 3 5 ( 3 2 + 4 ? (,A B C D) 主要侵害雏鸡的中枢免疫 器官法氏囊, 造成免疫抑制和其它疫苗的免疫失败。 A B C D为双股双节段
2、= K L病毒, 其基因组由L、B两 个节段组成, 其中L节段包括两个部分重叠的开放 阅读框架 (9 = W !、 9 = W “) 。9 = W “编码与病毒致病 性有关的D ; O蛋白 # ; 9 = W !编码多聚蛋白 (D ; “ E #) , 经加工剪切成#个成熟的蛋白D ; “、D ; E和 D ; # E 。D ; “是病毒的主要宿主保护性抗原 O、 N, D ; #是群特异性抗原 R , D ; E是病毒的蛋白酶 。 B节段编码D ; !蛋白,D ; !具有= K L依赖的= K L 聚合酶活性 N、 。 白细胞介素“(+ - 7 3 4 * 3 ? G + -“,A H I
3、“)是P F !型 细胞免疫应答的重要细胞因子, 具有显著的免疫增 强及抗病毒作用, 已被广泛应用于C K L疫苗的免 疫试验中。研究发现A H I “能通过不同作用环节调 节和增强C K L疫苗的免疫效果, 发挥其佐剂效应。 本研究小组在前期工作中已证实了A B C D多聚蛋白 (D ; “ E #)C K L疫苗能提供一定的保护力, 同时研 究还证实联合鸡白细胞介素“( ? 3公司; 重组质粒; $ 7 N 3 1 = 2 5 %柱购自 + = G 2 Q 1 0 Q K = G= R 1 L = 6 / K G 3 G Q ; 4 3 2 6 K S; $ 7 N 3 1 = 2 5 %
4、过柱纯化后溶于无菌与等量病毒悬液 = /“于“ 8孔板中混和, 置: = 97 ? 6 #培养箱中中和) A, 弃去已长满单层细胞的“ 8孔板中的营养液, 将病毒与血清 中和溶液# / “接种于单层细胞上, 每个中和溶液接种8孔, 并设最低稀释度的纯血清和) / /5 6 * , 7 /的病毒作对照, 置 : = 97 ?6 #培养箱中吸附) A。在吸附后的细胞单层上加 维持液 () 孔) , 置: = 97 ? 6 #培养箱中继续培养, 每 天观察#次, 至“ 8 A, 记录细胞病变情况。按B C C D E F G C $ H A法 计算出每个血清样品的中和保护价 ( M G Q C #
5、B C 4 U Q ; H U ; K $C $ V W % C D ; M C 4 U ; K $1 $ D $ 1 $ U S 1 4 % ; D 4 S 6 * E - Z C H K $ U Q K ;! Y S 6 * E - M C 4 U C D ; U A“ # $B* % $ ; 2 ( # . / *! “ # $ %8 = 2 : ; 7/ 0 % 8 C C 2 = 6 A ! 病毒中和试验 / 0 %疫苗各试验组免疫后的中和抗体动态变 化规律见图,所示。各试验组的血清中和抗体效价 均随时间的推移而稳定上升, 并在加强免疫后) H 5 8 9 2 F 8 2 ; =8
6、= 2 : ; 7/ 0 % 8 C C 2 = 6 A “ # $ %疫苗各试验组诱导的外周血 ? , 1 ? ; - ? A B C B D D E9B F G - D H F I ? - D B ; J ? A I ; D K ? L - D K L ? 表%不同“ # $疫苗免疫后对强毒株 L D KD J - D I ? H I ; M ? ; G G = K ? ? L - D K L ? L D J E ; J J ? ? K I! “ #M A H H ; K ? ; G G = K ; N ? E H ; H O ? K L H A B B ? K = B ? K I L I
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