依那普利对高血压大鼠血管平滑肌细胞内游离钙及蛋白激酶C活性的影响.pdf
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1、 1 3 6 实验研究 依那普利对高血压大鼠血管平滑肌细胞内游 离钙及蛋白激酶C活性的影响 王永霞朱明军钱义明2 陆 雄 吴 倩3何立人2 ( 河南中医学院第一附属医 院, 河南郑州 4 5 0 0 0 0 ; 2 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院, 上海 2 0 0 4 3 7 ; 3 上海中 医药大学, 上海 2 0 0 0 2 3 ) 摘要: 目的 观察依那普利抑制培养的血管平滑肌细胞增殖的机制。 方法以组织贴块法行自 发性高血 压大鼠( s p o n t a n e o u s l y h y p e r t e n s iv e r a t s , S H R ) 主动脉血管平
2、滑肌细胞的分离培养, 并以倒置显微镜。 - S M 肌动蛋白 免疫组化法鉴定; 分别采用甲基唾RK基四q( M T T ) 法、 氖一 胸腺ePt核昔( H - T d R ) 掺人法、 荧光染 料( F U R A - 2 / A M ) 标记 法。 酶底物反应法观察依 那普利含药血清 对血管 平滑 肌增殖、 细胞内 游离钙、 蛋白 激 酶C 活性的影响。结果 与模型组比较, 依那普利含药血清对血管平滑肌增殖、 脱氧核糖核酸( D N A ) 合 成、 细胞内游离钙、 蛋白 激酶C 活性均有明显的抑制作用( P 0 .0 1 ) 。结论 依那普利可能通过降低细胞内 游离钙水平及抑制蛋白激酶C
3、 活性而发挥抑制血管平滑肌增殖和高血压血管重构的作用。 关键词: 血清药理学;血管平滑肌细胞; 增殖; 细胞内 游离钙; 蛋白 激酶C 中图分类号: R - 3 3 2 , R 9 7 2 .4文献标识码: A文章编号:1 0 0 7 - 9 6 8 8 ( 2 0 0 6 ) 0 2 - 0 1 3 6 - 0 3 E f f e c t s o f e n a l a p r i l o n i n t r a c e l l u l a r f r e e c a l c i u m i o n a n d P K C a c t i v i t y i n c u l t u r e
4、d v a s c u l a r s mo o t h mu s c l e c e l l s o f s p o n t a n e o u s l y h y p e r t e n s i v e r a t s W a n g Y o n g x i a ,Z h u M i n g j u n ,Q i a n Y i m i n g 2 , L u X i o n g , W u Q i a n ,H e L i r e n 2 T h e F i r s t H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o H e n a n C o l l e
5、 g e o f T C M,Z h e n g z h o u H e n a n 4 5 0 0 0 0 , C h i n a 2 Y u e y a n g I n t e g r a t e d H o s p i t a l o f C h i n e s e a n d W e s t e rn M e d i c i n e A f f i l i a t e d t o S h a n g h a i U n i v e r s i t y o f T C M,S h a n g h a i 2 0 0 4 3 7 ,C h i n a S h a n g h a i U n
6、 i v e r s i t y o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e ,S h a n g h a i 2 0 0 0 2 3 ,C h i n a A b s t r a c t ; O b j e c t i v e s T o s t u d y t h e m e c h a n i s m o f e n a l a p r i l o n c u l t u r e d v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l s ( V S M C ) p ro l
7、if e r a ti o n . Me t h o d s V S M C w e re i s o l a t e d f ro m t h e m e d i a o f s p o n t a n e o u s h y p e r te n s i v e r a t s ( S H R ) a o r ta o b t a i n e d场 e x p l a n t m e t h o d a n d i d e n t if i e d b y i n v e rt e d m i c r o s c o p e a n d o - S M a c t i n i m m u
8、n o h i s t o c h e m i c a l m e t h o d . T h e e ff e c t s o f t h e d r u g c o n t a i n i n g s e r u m o n V S M C p ro l if e r a t i o n w a s o b s e r v e d b y M T T m e t h o d , D N A s y n t h e s i s b y H - T D R i n c o r p o r a t e d m e t h o d , i n t r a c e ll u l a r f r e
9、e c a l c i u m i o n ( C a t i ) b y F U R A 2 / A M m a r k i n g m e t h o d a n d p ro t e i n k i n a s e C ( P K C ) a c t i v i t y b y P e p T a g n o n - r a d i o a c t i v e P K C a s s a y . R e s u l t s E n a l a p r i l h a d i n h i b i t i n g e ff e c t s o n V S M C p r o l if e r
10、 a t i o n , D N A s y n th e s i s a n d h y p e r - V S M C C a 2 i a n d P K C a c t iv i t y , w it h b e t t e r e ff e c t s t h a n c o n t r o l g ro u p . C o n c l u s i o n s E n a l a p r il h a s m a r k e d i n h i b i t o r y e ff e c t s o n t h e h y p e r - V S M C C a = i a n d P
11、K C a c t i v i t y , a n d h e n c e i m p r o v e t h e V S M C p r o l i f e r a ti o n a n d v a s c u l a r r e m o d e li n g . K e y w o r d s ; S e r u m p h a r m a c o l o g y ; V a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l ; P r o l i f e r a t i o n ; F r e e c a l c i u m i o n ; P ro
12、 t e i n k i n a s e C 我们应用自发性高血压大鼠( s p o n t a n e o u s l y h y p e r te n s iv e r a ts , S H R ) 主 动 脉 培 养 血 管 平 滑 肌, 观察依那普利对血管平滑肌细胞增殖和D N A合 收稿日期: 2 0 0 6 - 0 2 - 0 7 作者简介: 王永霞( 1 9 7 5 - ) , 女, 主治医师, 博士, 2 0 0 4 年毕业于上 海中医药大学, 研究方向: 中医药防治心血管病的临床与实验研 究。 联系电 话: 0 3 7 1 - 6 6 2 3 1 7 3 2 ; E - m
13、a i l : w y x c h z h q y a h o o . c o m .c n 成的抑制作用, 并观察该药对胞内游离钙和蛋白 激酶C ( p r o t e i n k i n a s e C , P K C ) 活性的影响。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物 清 洁 级S H R 4 只, 雄性, 8 周 龄, 体 重1 5 02 0 0 g ; 清 洁 级S p r a g u e - D a w l e y ( S D ) 大鼠2 0 只, 雄It , 8 周 龄, 岭南心血管病杂志2 0 0 6 年4 月第1 2 卷第2 期 1 3 7 体 重2 0 0 2 5 0
14、g , 均由 上 海 第 二医 科 大 学 动 物 实 验中 心提供。 1 .2 主要试剂与仪器 R P M 1 1 6 4 0 培养 基, 小牛血清, 胰蛋白 酶, 牛 血 清白蛋白和甲基噬哩基四哇 ( m e t h y l t h i a z o l y l t e t r a z o l i u m , M T T )试剂盒购自G I B C O公司; T r i t o n X - 1 0 0 , E G T A( 乙二醇四乙酸醋, e t h y l e n e g l y c o l - t e t r a a c e t e ) ,二甲基亚矾 ( D i m a t h y l
15、 s u l f o x i d e , D M S O ) , a - S M肌动蛋白, S i g m a 公司; 放射性标记胸 腺嘀 陡 核 昔 3 H - T d R , tr i ti a t e d t h y m i d i n e( 1 m C i/ m l ) , 中国 科学院上海核技术开发公司; F U R A - 2 / A M , C A L B I O C H E M公司产品, P e p T a g非放射性 P K C试剂盒, P r o m e g a 公司; 依那普利片, 批号 0 2 0 2 2 5 , 江苏扬子药业公司提供; 电 热恒温振荡水 箱D K Z
16、- 2 型, 上海精宏实验设备有限公司; 酶标 仪, E L X 8 0 0 型, B io T e x I n s t r u m e n t I N C ; 液闪 仪, B E C K M A N 公司W A L L A C E 1 4 1 0 型; 双波长荧光分 光光度计, 日 本H I T A C H I F - 4 5 0 0 型。 1 . 3 实验方法 1 . 3 . 1 自 发性高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞 的分离培养采用组织贴块法川 分离培养血管平 滑肌细胞 ( v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e l l s , V S M
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