信号蛋白SMAD3在大鼠心肌肥厚过程中的表达.pdf
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1、为拉应力破坏。模型组拉伸力学性能各项指标均显著小于正 常对照组 (P 0. 05) 。 冲击实验结果表明, 模型组冲击功、 冲击韧性均显著小于 正常对照组 (P 0. 05) 。 肱骨是大鼠的坚硬组织, 所以只是在承受较大的能量冲击 时才会损伤。损伤的形式有线形和粉碎性骨折, 线形骨折常由 质量较大与骨的相对运动速度较慢的钝器所造成, 它可能是一 条断裂线。如果撞击物与骨的相对速度较高, 就会出现粉碎性 骨折。本组冲击实验骨干形成粉碎性骨折, 多为斜形, 有的在 冲击面对侧为横形。 近年来对胶原纤维的排列方向及结构与力学性能之间的 相关性研究进一步提示, 胶原纤维是一个影响骨力学性能极为 重要
2、的因素 5。这是由于胶原纤维是骨基质的主要成分, 羟基 磷灰石一般沉积于胶原纤维头尾之间的空隙内, 换言之, 胶原 纤维的排列方向决定了羟基磷灰石沉积位置, 二者高度有序的 结合使骨具有良好的力学性能。骨胶原组织主要由三种纤维 组成, 即弹性纤维, 胶原纤维和网状纤维。胶原纤维使胶原组 织具有一定的强度和刚度, 弹性纤维使胶原组织具有一定的延 伸能力。分析认为去势大鼠由于骨质疏松骨密度降低部分骨 小梁断裂, 排列紊乱。骨在自重的作用下使胶原纤维的排列方 向发生改变所以其拉伸, 冲击力学性能指标降低。 4 参考文献 1 崔 伟, 刘成林 . 基础骨生物力学 (一) J . 中国骨质疏松杂志, 1
3、997; 12 (3) : 482-5. 2 邓学梅, 刘 跃, 谢力勤 . 不同加载速度对大鼠骨生物力学特性的 影响 J . 中国骨质疏松杂志, 1999; 15 (2) : 8-9. 3 马洪顺, 朱伟民, 贺家宁, 等 . 小儿肠套叠暘管与人阑尾归一化应力 松驰函数蠕变函数 J . 中国生物医学工程学报, 1998; 17 (4) : 367- 73. 4 马洪顺, 张忠君, 黎晓华 . 胎儿臂丛神经上干粘弹性实验研究 J . 中国生物医学工程学报, 2004; 23 (3) : 274-8. 5 Liu SH,Yang RS, Shaikh RA,et al . Collagenin
4、ten ligment and bone healingJ . Clin Orthcp, 1995; 316: 295. 2004-12-10 收稿 2005-03-11 修回 (编辑 胡国义) 信号蛋白 Smad3 在大鼠心肌肥厚过程中的表达 黄 俊 王梦洪 郑泽琪 彭景添 邓宇晓 (江西医学院第一附属医院心内科, 江西 南昌 330006) 摘 要 目的 研究信号蛋白 Smad3 在大鼠心肌肥厚中的表达变化。方法 结扎大鼠腹主动脉复制心肌肥厚模型, 在不同时间点检测左心 室重量指数 (LVMI) , RT-PCR 法检测肥大心肌组织中 TGF-1、 Smad3 的 mRNA 表达, Wes
5、tern blotting 以及免疫组化法检测 Smad3 蛋白的表达。结果 术后 3 d LVMI 开始上升并持续至 28 d, 肥大心肌组织中 TGF-1、 Smad3 mRNA 及蛋白表达术后3 d 开始上升, 持续至28 d, 术后14 d 为表达高峰。 结论 信号蛋白 Smad3 参与了腹主动脉结扎诱导的大鼠心肌肥厚病理过程。 关键词 心肌肥厚; 信号蛋白; Smad3 中图分类号 R364. 3 + 1 文献标识码 A 文章编号 1005-9202 (2005) 07-0811-03 作者简介: 黄 俊 (1968-) , 男, 博士, 副教授, 主要从事冠心病研究。 The ex
6、pression of singal protein Smad3 in rats with myocardial hypertrophy HUANG Jun,WANG Meng -Hong,ZHENG Ze-Qi,et al . Department of Cardiology,First Affiliated Hospital,Jiangxi Medical College,Nanchang 330006,Jiangxi,China 【Abstract】 Objective To explore the changes in the expression of singal protein
7、Smad3 in rats with myocardial hypertrophy. Meth- ods The rat model of myocardial hypertrophy was built by ligation of the abdominal aorta. At the different time,the left ventricular mass index(LVMI)was determined,the mRNA expression of TGF-1and Smad3 was assessed by RT-PCR,the protein expression of
8、Smad3 was assessed by Western blotting and immunohistochemical. Results The LVMI and the expression of TGF-1and Smad3 mRNA/ protein in- creased 3 days after the operation and lasted for 28 days with peak expression on the 14th day. Conclusions Signal protein Smad3 could participate in the course of
9、myocardial hypertrophy in rats induced by ligation of abdominal aorta. 【Key words】 Myocardial hypertrophy;Signal protein;Smad3 大量动物实验 1, 2和病人手术后的心肌标本3检测结果提 示: 无论何种原因导致的心肌肥厚均同时伴随 TGF-1表达的 上调, 提示 TGF-1与心肌肥厚可能有着密切关系。有关 TGF- 1的下游信号途径一直知之甚少。直到 Carl 等 4发现了 TGF- 1刺激信号从细胞膜向细胞核转移的 SMADs 信号通路。但该 信号途径在心肌肥厚中的作用
10、尚不知晓。本实验检测肥厚左 室心肌组织中 Smad3 信号蛋白的表达变化。 1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 动物 体重 150 200 g 左右的 Sprague-Dawley 雄性大 鼠 50 只, 由不同检测时间随机分为5 组 (对照组、 术后3 d 组、 7 d 组、 14 d 组、 28 d 组。每组 10 只) 。由华中科技大学同济医 学院医学实验动物中心提供。 118黄 俊等 信号蛋白 Smad3 在大鼠心肌肥厚过程中的表达 第 7 期 1. 1. 2 试剂 TrizolTM试剂盒由 Gibco 公司提供; RT-PCR 试剂 盒由 Promega 公司提供; 羊抗
11、大鼠 Smad3 单克隆抗体由 Santa Cruz 公司提供; 免疫组化试剂盒由北京中山公司提供, 其他试 剂均为国产分析纯。 1. 2 动物模型的建立及处理 用 3% 戊巴比妥钠 0. 15 ml/ 100 g腹腔注射麻醉, 腹部正中剑突下切开皮肤 2 3 cm, 打开 腹腔, 在左肾动脉上方分离腹主动脉, 穿过一条 “0” 号丝线, 将 去尖磨钝的 7 号手术针置于丝线处, 结扎丝线, 抽取手术针, 检 查腹主动脉通畅后分层关腹, 假手术组动物分离腹主动脉后不 做结扎, 分别在手术后的当天, 3、 7、 14、 28 d 处死大鼠。每只大 鼠称量体重, 3% 戊巴比妥钠麻醉, 开胸分离心
12、包膜, 摘取心脏, 吸干心腔内积血, 剪去心周围组织、 血管、 心房及右室游离壁, 称量左心室湿重 (含室间隔) , 检测左心室重量指数 (LVMI) 。 左心室组织一部分置于液氮中保存备用,一部分置入 10% 甲 醛缓冲液中继续固定 12 24 h。常规脱水、 透明、 浸蜡、 包埋 后, 行切片处理。 1. 3 RT-PCR 检测 Smad3 mRNA 表达 取液氮中冻存组织, 按 TrizolTM试剂盒说明书用一步法提取总 RNA, 用 DNA/ RNA 测定 仪测定 RNA 浓度和纯度。参考文献 5方法, 稍作修改进行 RT- PCR。大鼠 TGF-1上游引物为: 5-GCT AAT G
13、GT GGA CCG CAA C-3, 下游引物为:5-GCA GTG AGC ACT GAA GCG A-3, 扩增片段长 340 bp。扩增条件为 94预变性 5 min, 然后 94 50 s, 58 1 min, 72 50 s, 72延伸 7 min, 共 32 个循环。大 鼠 Smad3 上游引物为: 5-ACA GCA TGG ACG CAG GTT CT-3, 下游引物为: 5-TCA CTG AGG CAC TCC GCA AA-3, 扩增片段 长 337 bp, 退火温度 53, 50 s, 共 32 个循环。内参为大鼠 - actin, 其上游引物为5-CCT TCC T
14、GG GCA TGG AGT CCT G-3, 下游引物为 5-GGA GCA ATG ATC TTG ATC TTC-3, 扩增片段 长 205 bp。引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成。首先 将 2 g 细胞总 RNA 转为 cDNA, 再进行目的基因的 PCR 扩增, 为较准确进行 RT-PCR 半定量, 先分别用内参及目的基因的 cDNA 产物进行 14 38 个不同循环数的 PCR 反应, 将不同循 环数的 PCR 产物凝胶电泳, 确定各自平台期, 再由其决定相应 循环数。取终产物 5 l, 1. 5% 琼脂糖凝胶中电泳, GDS800 凝 胶成像及分析系统下扫描分析。 1. 4
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