冷冻保存Epon812包埋剂在电镜样品制备中的应用.pdf
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1、第3 0 卷第6 期 2 0 0 8 年1 2 月 大连医科大学学报 J o u r n a lo fD a f i a nM e d i c a lU n i v e r s i t y V 0 1 3 0N o 6 D e c 2 0 0 8 冷冻保存E p o n 8 12 包埋剂在电镜样品制备中的应用 吕广艳,魏晓晴,曲淑贤,高船舟,高 颖 ( 大连医科大学辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室,辽宁大连1 1 6 0 4 4 ) 摘要: 目的 探讨冷冻保存E p o n 8 1 2 包埋剂及其再利用的方法。 方法 将电镜样品制备中剩余包埋剂在特定条 件下冷冻保存需要时解冻,进行常规浸透包
2、埋。比较包埋荆冷冻前后超薄切片的切割性能。 结果 用冷冻后复 温的包埋剂制备的包埋块,超薄切片时切割性能良好,两种包埋剂制备的样品各项观察指标无明显差异。 结论 冷冻保存E p o n 8 1 2 包埋剂及其再利用的方法是可行的。 关键词:包埋剂;透射电镜;样品制备;超薄切片 中图分类号:R 一3 3 1 文献标志码:B 文章编号:1 6 7 1 7 2 9 5 ( 2 0 0 8 ) 0 6 0 5 8 6 0 2 在透射电镜常规样品制备过程中,包埋剂是必不可少的 化学试剂之一。通常E p o n 8 1 2 环氧树脂是比较常用的包埋 剂。但由于E p o n 8 1 2 环氧树脂包埋剂价格
3、昂贵,增加了电 镜检测的成本。作者在日常1 :作中将剩余包埋剂冷冻保存, 需要时解冻,进行常规浸透包埋,取得满意效果,现总结如下。 1 材料和方法 1 1 仪器与材料 E p o n 8 1 2 包埋剂( S i g m a 公司) 、L e i c aU C 6 超薄切片机 ( 奥地利L e i c a 公司) 、J E M 一2 0 0 0 E X 透射电镜( 日本电子) 、 人肾活检组织( C R C 病理中心提供) 、冰箱、温箱、干净带盖 的青霉素小瓶、封口膜、塑料杯、注射器等。 1 2 E p o n 8 1 2 包埋剂的配制 采用L u f t l 9 6 1 配方配制。J ,A
4、液:E p o n 8 1 2 环氧树脂 6 2m L 、D D S A ( 十二烷基琥珀酸酐) 1 0m L ,B 液:E p o n 8 1 2 环 氧树脂1 0m L 、M N A ( 甲基内次甲基四氢邻苯二甲酸酐) 8 9 m L ,本地区夏季适宜配制比例A :B 为2 :8 ,其他季节按3 :7 比例配制,D M P 一3 0 ( 加速剂) 加总量的1 5 。 1 3 包埋剂的保存 临床用过的青霉素小瓶若干,加肥皂水煮沸1 5r a i n 去 掉瓶签,然后用清水冲洗干净,再用洗液浸泡1 2h ,取出后用 清水冲洗干净,置于6 0 温箱中烤干备用。每次制样包埋 剩余的包埋剂,灌注于备
5、好的青霉素小瓶内,以距瓶口1c m 为宜。盖上瓶盖,然后用封u 膜封好,贴上标签,注明日期和 配制比例等,置于冰箱一2 0 冷冻室保存。 1 4 使用方法 需要时,取出冷冻的包埋剂,置于6 0 温箱中,1 0r a i n 即可解冻。夏季室温较高时,也可放置于室温下解冻,约2 0 m i n 即可变成液态,取适量进行包埋聚合。室温解冻时,由 于瓶体温度较室温低,瓶外壁常凝结成许多小水滴,打开瓶 盖前应拭干水滴,以免包埋剂中的酸酐( D D S A 、M N A ) 吸潮 而失效。 1 5 两种包埋剂制备样品对比实验 人肾活检组织经2 5 戊二醛和1 锇酸双同定,系 列酒精脱水后,分成两份,其中
6、一份按常规现用现配包埋剂 浸透包埋,另一份用冷冻后复温的包埋剂浸透包埋。聚合后 超薄切片,醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色,透射电镜观察,比较 两种包埋剂制备样品各项观察指标的差异。 2结果 用冷冻后复温的包埋剂制备的包埋块和现配制包埋剂 制备的包埋块,在超薄切片时切割性能完全相同,软硬度适 宜,切片无震颤、无空洞,染色效果理想。电镜下观察,两种 包埋剂制备的标本,细胞的超微结构无明显差异。肾小球及 肾小管超微结构保存良好,肾小球滤过屏障三层结构明确。 如图l 、2 所示。 3 讨论 E p o n 8 1 2 环氧树脂是目前电镜制样中普遍采用的一种 优良包埋剂,它具有许多优点,如切割性能良好,超薄切
7、片易 收稿日期:2 0 0 8 0 6 1 4 ;修回日期:2 0 0 8 一1 1 一1 0 作者简介:吕广艳( 1 9 6 3 一) ,女,辽宁丹东人,实验师。 通讯作者:高颖,女,教授。E m a i l :g a o y i n 9 8 2 2 h o t m a i l t o m 万方数据 第6 期 吕广艳,等:冷冻保存E p o n 8 1 2 包埋剂在电镜样品制备中的应用 5 8 7 图l现配制包埋剂包埋的 肾小球超微结构( 8 0 0 0 ) 图2 冷冻后复温的包埋剂包埋的 肾小球超微结构( 1 0 0 0 0 ) 形成切片带,耐电子束轰击等。缺点是易吸潮,对操作环境 要求高
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- 冷冻 保存 Epon812 包埋剂 样品 制备 中的 应用
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