内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达.pdf
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1、上 海 交 通 大 学 学 报( 医 学 版 ) !“#$%;?) 的功能变化。方法 采用脂质体法转染 08=) 基因 于实验犬 ?; ABC? 和免疫组化法检测转染效果; 分别采用比色法和酶联免疫法检测细胞培养液一氧化氮合酶 (8=)) 、 一氧 化氮 (8=) 和 /DE 的浓度; 并观察转染细胞生长增殖情况。结果 ABC? 产物电泳和测序及免疫组化法检测证实转染效果满 意; 转染后 ? 培养液 8=) 和 8= 浓度在不同时间明显升高 (?; 转染后 08=) 基因在 J8K 和蛋白质水平均高效表达; 内皮细胞 08=) 活性显著增强; 转染后细胞生物学功能稳定。 【关键词】基因; 9基
2、因转染; 9内皮细胞 【中图分类号】 -F:H. :L9999 【文献标识码】/ “#$%6:$,14 ?+;(+,14 =$,,14 A$+;B(% (“#$%6%*)2 ?A,B86)%) C(123 F1 转染 .5 %7 实验犬内皮细胞的培养: 采用酶消化法。待 细胞生长至 “$U1$U 融合, 采用脂质体转染法进 LV: !“#!薛冠华, 等:内皮型一氧化氮合酶基因在犬内皮细胞的转染和表达 行基因转染 (采用 $%。以转 !413 31; +; 3+3 +3 113 11 - ! , 左 +, 131 ;+ +3+ ;+ 1+3 ;+; ;3 -! , 同时分别以!4、 != 浓度。
3、 转染 !“#$ 基因的 %!=K; 分析, # -%#%+ 有显著意义。 结果 % 经核酸蛋白分析 仪测定, $TRP、 $TOP比值为 N# OUT# N, 电泳可见 NO 、 TO T 条清晰条带, 没有降解 2!; 片段杂带出现, 结 果满意。 ,./0.组 与 ),- 组 相 比 差 异 显 著 ( ! 6 7$ 78) 。 !012#组在 34 5 后也有短暂升高 (! 6 7$ 78) , 持续至 , 计数每天细胞数, 两组细胞数在各期无 差别, 表明两组细胞的生长增殖情况基本一致。 细胞培养液中 %!2 !)*+,-.* 产物 !“#$ 扩增引物测序结果 /0 )*!7?4 8
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