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1、文章编号: 1 0 0 2 - 2 6 9 4 (2 0 0 5) 0 8 - 0 7 3 4 - 0 1 健康人群血清钩端螺旋体抗体调查 刘丽华, 白光梅, 米亚英, 崔克 中图分类号: R 3 7 7 文献标识码: B 钩端螺旋体病 (L e p t o s p i r o s i s, 简称钩体病) ,是由致病性 钩端螺旋体 (L e p t o s p i r ai n t e r r o g a n s, 简称钩体) 引起的一种 分布广泛的自然疫源性疾病, 我国是受钩体病危害十分严重 的国家。1 9 3 7年汤择光首次报告3例钩端螺旋体病 1 , 1 9 5 5年本病被列入法定传染病
2、, 迄今全国累计发病人数已 超过2 5 0万, 平均病死率约为1 % 2 。近年来我校面向全国 十几个省市自治区招生, 我们曾对本省籍在校学生钩端螺旋 体感染情况进行过研究, 为了解来自其他省市自治区学生钩 端螺旋体感染状况, 我们又对本校2 0 0 3、 2 0 0 4级外省籍学生 进行了血清钩端螺旋体抗体检测。 1 材料与方法 1 . 1 调查对象及标本采集本校2 0 0 3、 2 0 0 4级外省籍学生 2 7 6名, 男1 2 9人, 女1 4 7人。分别来自1 5个省市自治区 (见 表1) , 年龄1 8 2 1岁, 平均年龄1 9 . 5岁。采集待检者静脉 血2m l, 分离血清后
3、,- 2 0 保存备用。 1 . 2 试剂来源血清钩端螺旋体I g G抗体检测试剂盒由中 国疾病控制中心传染病预防控制所钩端螺旋体病实验室提 供。 1 . 3 实验方法酶联免疫吸附试验 (E L I S A) 。封闭用钩 端螺旋体抗体所包被酶标板上的非特异结合位点: 每孔加入 1 5 0l新配制的5 %P B S -m i l k,3 7 孵育1 h后, 倾出孔中液 体, 在吸水纸上将酶标板拍干。加对照及待检血清: 设空 白、 阴性及阳性对照血清各2孔, 每孔加入稀释好的血清 1 0 0l,3 7 孵育1 h后, 倾出孔中液体, 用P B S -m i l k洗板3 次, 在吸水纸上拍干。加酶
4、结合物: 每孔加入稀释好的酶 结合物1 0 0 l , 3 7 孵育1 h后, 倾出孔中液体, 用P B S洗板4 次, 在吸水纸上拍干。加显色剂: 每孔加入显色剂1 0 0 l , 室温避光显色3 0 m i n, 于4 0 5 n m波长测定O D值。 C u t o f f值计算:C O VE阴性对照平均O D值*2 . 1, 待检 标本O D值C O V值判为阳性, 待检标本O D值C O V值 判为阴性。 1 . 4 统计学处理采用卡方检验, 处理软件应用S A Ss y s - t e m 6 . 1 1版。 2 结果 2 . 1 2 7 6名被检学生血清钩端螺旋体抗体阳性检出率为
5、 1 0 . 5 1%。来自不同省市自治区学生的检测结果见表1。 2 . 2 本次被检学生来自南方省份学生共9 1人, 血清钩端螺 旋体抗体阳性检出者1 5名, 阳性率1 6 . 4 8 %, 来自北方省份 学生有1 8 5人, 阳性检出者1 4名, 阳性率7 . 5 7 %, 南北方籍 学生间血清钩端螺旋体抗体阳性分布差异有显著性, x 2E 5 . 1 6,P 0 . 0 5。 2 . 3 本次被检学生中, 2 0 2人来自农村,7 4人来自城市 (县 城以上) 。农村源学生血清钩端螺旋体抗体阳性检出者2 6 名, 阳性率1 2 . 8 7 %; 城市源学生阳性检出者3名, 阳性率4 .
6、0 5 %。农村源学生阳性率明显高于城市源学生, 经统计学处 理, 差别有显著性, x 2E 4 . 4 7, P 0 . 0 5。 表1各省份钩端螺旋体抗体检测结果 省份总例数阳性例数阳性率 (%) 黑龙江 711 4 . 2 8(27) 吉林 1 621 0 . 5 3(21 6) 内蒙古 4 324 . 6 5(24 3) 山东 2 121 4 . 2 9(32 1) 河北 2 428 . 3 3(22 4) 河南 2 021 0 . 0 0(22 0) 陕西 2 231 3 . 6 4 (32 2) 甘肃 1 700 . 0 0 宁夏 400 . 0 0 青海 1 100 . 0 0
7、江西 3 251 5 . 6 3(53 2) 湖南 1 931 5 . 7 9(31 9) 湖北 2 021 0 . 0 0(22 0) 安徽 933 3 . 3 3(39) 贵州 1 121 8 . 1 8(21 1) 合计 2 7 62 91 0 . 5 1(2 92 7 6) 2 . 4 被检测学生中男性1 2 5人, 血清钩端螺旋体抗体阳性 检出者1 9名, 阳性率1 5 . 2 0 %。女性1 5 1人, 阳性检出者1 0 名, 阳性率6 . 6 2 %。男女性别间差异有显著性, x 2E5 . 3 5, P 0 . 0 5。 3 讨论 我国钩体病疫源地广泛, 动物宿主种类繁多, 据
8、文献报 道已从5 0多种动物中检出致病性钩端螺旋体, 现认为其中 鼠类、 猪、 犬、 牛是钩端螺旋体的主要储存宿主 3 。被钩端螺 旋体感染的动物可随尿持续排菌, 污染水源和土壤, 人类经 与被污染的水土接触受染。我国是农牧业大国, 加之近年来 各地洪水灾害严重, 因而对钩端螺旋体感染的监控不容忽 视。 本文采用E L I S A法测定我校2 0 0 3、 2 0 0 4级外省籍学生 血清钩端螺旋体抗体, 结果被检学生血清钩端螺旋体抗体总 阳性率为1 0 . 5 1%。来自1 5个省市自治区的学生, 阳性检 (下转第7 0 5页) 作者单位: 大同医学专科学校微生物学教研室, 大同 0 3 7
9、 0 0 8 437 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 0 0 5,2 1(8) (p r o p i d i u mi o d i d e, P I) 结合其核D N A。因此, 同时 进行A n n e x i n - V和P I双染, 就可将早期凋亡细胞和 坏死细胞区分开。本研究A n n e x i n - VF I T CP I双 染结果揭示, E.c o l i感染T H P - 1后, 其细胞凋亡于 感染后1 0m i n即开始出现, 此后逐渐升高。而且 T H P - 1细胞凋
10、亡与E.c o l i感染之间存在时效关系: 即随着E. c o l i刺激时间的延长, 凋亡细胞所占比例 不断增高, 凋亡严重程度不断增强, 与G i e m s a染色 两种方法所得结果一致。台盼蓝染色结果示随着 E.c o l i感染时间的延长, 各实验组坏列细胞逐渐增 多, 对照组则不受影响。提示大肠杆菌可诱导 T H P - 1细胞凋亡, 其杀细胞作用主要是通过诱导细 胞凋亡实现的。 关于E. c o l i诱导细胞发生凋亡的机制, 目前尚 不十分明确。R o d e r t等 5 通过实验证实, 具有1型 菌毛的尿道致病性大肠杆菌以甘露糖和内毒素 (L P S) 依赖的方式诱导中性
11、粒细胞凋亡, 凋亡是由 细胞内活性氧的产生启动的。有学者报道 6 , 肠出 血性大肠杆菌 (E H E C) 感染肠上皮细胞T 8 4后, 诱 导了A P - 1和N F - K B的活化, 同时使MA P K家族中 的三个蛋白激酶 (E R K 1 2、P 3 8和J N K) 发生了磷酸 化。M a r c oS等 7用产肠毒素性大肠杆菌 (E T E C) 的一种热敏内毒素B亚基 (E t x b) 处理C D 8 +T细 胞, 发现C D 8+T细胞发生了特异性转录因子c - m y c的上调, 同时m y c蛋白水平提高, 且m y c的活 化与I K Ba增加有关。表明m y c的
12、增加可能依赖于 N F - K B的表达。 综上分析, E.c o l i可诱导人巨噬细胞株T H P - 1 细胞发生凋亡且具有时间依赖性, 但E. c o l i所致凋 亡的原因及机制有待亓一步研究。研究大肠杆菌与 T H P - 1细胞凋亡的相互关系。有助于深入理解大 肠杆菌的致病机制, 从而为防治大肠杆菌感染提供 新的思路。 参考文献: 1 P e t e r J . M. CD e r e kM. M,J o y c eC. Y. C,e t a l . E n t e r o h e m o r r h a g i c E s c h e r i c h i ac o l i0 1
13、 5 7 : H 7d i s r u p t s s t a t l - m e d i a t e dg a m m a i n t e r f e r o n s i g n a l t r a n s d u c t i o ni ne p i t h e l i a lc e l l sJ. i n f e c ti m m u n,2 0 0 3,7 1 (3) : 1 3 9 6 - 1 4 0 4 . 2M a a nA - M, Y i n gW,B e d yL,e t a l . I n d u c t i o no f e p i t h e l i a l c e l
14、 l d e a t h i n c l u d i n ga p o p t o s t sb ye n t e r o p a t h o g e n i cE s c h e r c h i ac o l ie x p r e s s i n g b u n d l e - f o r m i n gp i l i J. i n f e c t i m m u n,2 0 0 1,6 9 (1 2) : 7 3 5 6 - 7 3 6 4 . 3 D a v i d J . K,A d a mC,W,S h o m i tS,e t a l . U r o p a t h o g e n
15、 i cE s c h e r i c h i s c o l ip o t e n t i a t e s t y p e 1p i l u s - i n d u c e da p o p t o s i s b y s u p p r e s s i n gN F - k B J. i n f e c t i m m u n,2 0 0 2 . 6 9 (1 1) : 6 6 8 9 - 6 6 9 5 . 4W i l l i a m sN A,H i r s tT R,N a s h a rT O, e ta l . I m m u n em o d u l a t i o nb y
16、 t h e c h o l e r a - l i k ee n t e r o a t o x i n s:f r o m,a d j u v a n t t ot h e r a p e u t i c J. I m m u n o lT o d a y,1 9 9 9,2 0 (2) : 9 5 - 1 0 1 . 5 R o b e r tB,L i m i nZ,a n dO l l eS . U r o p a t h o g e n i sE s c h e r i c h i ac o l it r i g - g e r s o x y g e n - d e p e n
17、d e n ta p o p t o s i s i nh u m a nn e u t r o p h i l st h r o u g ht h e c o o p e r a t i v e e f f g e no f t y p e 1 f i o m d r i a e a n d l i p o p o l y s a c c h a r i d eJ.i n - f e c t i m m u n,2 0 0 4 . 7 2 (8) : 4 5 7 0 - 4 5 7 8 . 6S t e p h a n i eD,V a l e r eB,V e r o n i q u sI
18、, e ta l,E n t e r o h e m o r r h a g i cE s - c h e r i c h i a c o l ii n f e c t i o n g i n d u c e s i n t e r l e u k i n - 8p r o d u c t i o nV i aa c t i v a - t i o no fm i t o g e n - a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e s a n d t h e t r a n s c r i p t i o n f a c t o r s N F - K
19、B a n dA P - 1 i nT 8 4 c e l l s J. I n f e c t i o n a n d I m m u n i t y, 2 0 0 2,7 0 (5) : 2 3 0 4 - 2 3 1 0 . 7M a c t oS, N e i lA. W,a n dT i m o t h yR. H.E s c h e r i c h i a c o l ie n t e r o t o x i n Bs u b u n i tt r e i g g e r t sa p o p t o s i so fC D 8 +Tc e l l sb ya c t i v a
20、t i n gt r a n - s c r i p t i o n f a c t o r c - m y s J. i n f e c t i m m u n,2 0 0 1,6 9 (8) : 4 9 2 3 - 4 9 3 0 . 收稿日期: 2 0 0 5 - 0 3 - 0 7 (上接第7 3 4页) 出者分布在1 2个省市自治区。南方籍学生阳性率明显高于 北方籍学生; 农村源学生阳性率高于城市源学生; 男性阳性 率高于女性。本研究南北方籍学生血清钩端螺旋体抗体阳 性率 均 低 于 南 北 方 健 康 人 群 钩 端 螺 旋 体 血 清 学 调 查 (2 2 . 0 7 %, 1
21、6 . 2 4 %) 4 , 可能与调查人数较少及调查对象仅 为大学生有关。但我们的调查结果仍可说明, 我校大学生中 存在钩端螺旋体感染或隐性感染。同时也进一步证实了长 江流域及其以南地区钩端螺旋体感染明显高于黄河流域及 其以北地区 4 。 参考文献: 1 时曼华, 屠云人, 李庆俊, 等.我国钩端螺旋体病地理分布的研究 J.中华流行病学杂志, 1 9 9 5,1 6 (5) : 2 5 9 . 2 赵力, 蒋秀高, 徐建国.钩端螺旋体毒力相关因子生物学研究进展 J.中国人兽共患病杂志, 2 0 0 3,1 9 (2) : 1 0 2 . 3 时曼华 , 梁中兴,W JT e r p s t r a, 等.我国耕牛钩端螺旋体带菌和排 菌状况调查 J.中华流行病学杂志, 1 9 9 7,1 8 (1) : 1 2 . 4 时曼华, 于恩庶, 梁中兴, 等.中国钩端螺旋体病地理流行病学研 究 M.香港: 亚洲医药出版社, 2 0 0 0:2 3 . 收稿日期: 2 0 0 5 - 0 2 - 0 1; 修回日期2 0 0 5 - 0 4 - 1 1 507 2 0 0 5,2 1(8) 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s
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