七氟醚对非去极化肌松药与肌肉型乙酰胆碱受体作用的影响.pdf
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1、Restrictive effect of salvia miltiorrhiza on myocardial infarct area in dogs and its possible mechanism LIU Qi-gong,SUN Yu-mei,CHENG Yan-zi,LU Zai-ying (Dept of cardiology, Tongji Hospital, Tongji Medical School, Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030, China) Abstract: Aim To eva
2、luate the protective effect of salvia miltiorrhiza (SM)on ischemic myocardium in dogs with acute myocardial infarction (AMI)and to re- veal its possible mechanism. Methods Ten dogs were randomly divided into SM (D) group and control (C) group. AMI model was built in all dogs,SM or saline was adminis
3、trated for 21 days. Coronary angiography were performed before and after ligation of coronary ar- tery. 8 hemorheological parameters were examined be- fore and 22 d after the operation. The infarct zone and vessel density of myocardium were assessed. Results The infarct area in group D was smaller t
4、han that in group C. Angiography at hour 2 and on day 22 after ligation of coronary artery revealed significant augmen- tation of collateral vessels in group D versus group C. The platelet aggregation and the blood viscosity in- creased duringAMIwhencomparedwithcontrol phase,and the increased indica
5、tors during AMI were inhibited when SM was given. Capillaries and distri- bution vessel density in ischemic site on day 22 ap- peared statistically significant augmentation in group D as compared with the control group. Conclusion SM might improve the opening and formation of coronary collateral cir
6、culation,and inhibit the increase of plate- let aggregation and blood viscosity during AMI,and then improve microcirculation and restrict myocardial infarct area. Key words: salvia miltiorrhiza;collateral circulation; hemorheology;myocardial infarction 七氟醚对非去极化肌松药与肌肉型乙酰胆碱受体作用的影响 李传翔1,姚尚龙1,聂 辉2,张玉芹2,
7、吕 斌3 (华中科技大学同济医学院 1. 附属协和医院麻醉科、 3. 环境医学研究所, 湖北 武汉 430022; 2. 武汉科技大学生理学教研室, 湖北 武汉 430080) 中国 图 书 分 类 号:R-332;R 322. 74;R 337;R 337. 5; R 392. 11; R 971. 2 文献标识码: A 文章编号: 1001 -1978 (2005) 09 -1081 -04 摘要: 目的 探讨七氟醚增强非去极化肌松药肌松作用的机 制。方法 从大鼠肌肉提取多聚腺嘌呤 mRNA, 注入去膜的 非洲爪蟾卵母细胞以表达有功能的离子通道,利用电压钳 技术记录电压依赖性的离子通道电流
8、。建立七氟醚、 罗库溴 铵和维库溴铵分别抑制乙酰胆碱所引起电流的量效曲线, 再 研究给予相当于 50% 抑制率浓度的七氟醚后, 罗库溴铵和 维库溴铵抑制作用的变化。结果 七氟醚、 罗库溴铵和维库 溴铵均能产生快速、 稳定、 可逆、 浓度依赖性的抑制。达到 50%抑制率的浓度分别是 823 molL -1 (95% CI: 681 收稿日期: 2005 -01 -27, 修回日期: 2005 -02 -10 作者简介: 李传翔 (1972 - ) , 男, 博士, E-mail: Lcxdoc 163. com, 现 在广州邮电医院麻醉科; 姚尚龙 (1956 - ) , 男, 博士, 主任医师
9、, 教授, 博士生导师, 通讯作者, Tel: 027-85726834 997 molL -1) 、33. 4 nmolL-1 (95% CI: 27. 1 41. 7 nmolL -1)和 9. 2 nmolL-1 (95% CI: 7. 9 12. 3 nmol L -1) 。联合使用七氟醚、 非去极化肌松药时, 七氟醚增强非 去极化肌松药的抑制效应。结论 七氟醚增强非去极化肌 松药肌松作用的机制可能是在受体水平增加拮抗剂的亲和 力。 关键词: 七氟醚; 非去极化肌松药; 细胞膜; 受体, 胆碱能 七氟醚是一种新型氟化吸入麻醉药, 具有诱导 迅速, 麻醉深度易调节, 苏醒快等优点, 现正
10、广泛应 用于临床。观察到其有较强的肌松作用, 且能增强 非去机化肌松药的神经肌肉阻滞作用 1。但他们 相互作用的分子机制仍未阐明。 我们采用将提取的大鼠骨骼肌多聚腺嘌呤 mR- NA 注射到非洲爪蟾卵母细胞上, 表达有功能的大 鼠肌肉乙酰胆碱受体 (nAChR) 的实验模型来研究 1801中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2005 Sep; 21 (9) : 1081 4 存在着七氟醚时两种非去极化肌松药罗库溴铵和维 库溴铵的作用变化, 明确是否在受体水平两类药联 合作用能增强肌松效果及探讨七氟醚增强非去极化 肌松药肌松作用的可能机制。 1 材料
11、与方法 1. 1 实验动物 选用 1. 5 2 年, 体重 200 250 g 的成熟.爪蟾 (Xenopus laevis 中国科学院遗传与发 育研究所提供) 为实验对象。Wistar 大鼠由华中科 技大学同济医学院动物实验中心提供。 1. 2 实验器材 大鼠肌肉组织 mRNA 提取采用美 国 Promega 公司的新磁珠技术 (PolyA Ttract 1000 系 统) , 胶原酶 I, 乙酰胆碱 (ACh) , 焦磷酸二乙酯 (Di- ethyl Pyrocarbonate ,DEPC ) 、 HEPES 为 Sigma 公司 产品, 其它试剂为国产分析纯。电压钳放大器为 OC-725
12、C 型卵母细胞双电极电压钳仪 (美国 Warner 公司) 、 记录仪为 CytoBench 系统 (华中科技大学仪 博公司) 、 微注射器 (美国 WPI 公司) 、 玻璃电极拉制 仪 (德国 HEAK) 等。 1. 3 卵母细胞的采取 爪蟾冰浴麻醉 (约 30min) , 剪下 2 3 个卵叶, 置于盛有 ND96 培养液的表面皿 中。分离出单个卵母细胞, 置于无钙 ND96 培养液 中, 部分用胶原酶消化 1 2h (2 gL -1) , 以去除 卵巢膜和滤泡膜。挑选成熟的卵母细胞 (V 期) 于 ND96 培养液中, 19恒温恢复数小时。 1.4 大鼠肌肉 mRNA 的制备 将成年大鼠
13、击头处 死, 迅速取出两侧小腿三头肌和伸趾长肌, 用预冷水 洗涤 2 次, 经匀浆、 探针退火、 RNA 的洗脱和冻干等 过程分离得到 poly (A)+ mRNA, 储存在 - 70 备 用。 1. 5 微量注射 去膜卵母细胞每个卵母细胞注射 50 100 nl 的 mRNA (浓度 1 gL -1) , 注射后的卵 母细胞在 ND96 培养液中温浴 2 3 d, 每天换液并 去除坏死细胞。 1. 6 电生理记录 实验采用常规的双电极电压钳 记录方法。电压电极用 0. 15 molL -1 KCl, 电流电 极用 3 molL -1 KCl 灌注, 入水后电压电极阻抗约 为 1 10 M,
14、电流电极的阻抗为 0. 1 1 M, 钳制 电压为 -60 mV。实验中以 Ringers 液灌流, 灌流速 度为 3 5 mlmin -1, 调整蠕动泵的速度, 保持液面 恒定且无液体外流。给药前阻断灌流, 给药后充分 灌流 10 min, 每次给药量为 2. 5 ml。实验温度控制 在 (19 1) 。实验电流变化由 CytoBench 记录并 分析。 1. 7 七氟醚的饱和溶液制备 选用静息膜电位在 -20 mV 以上 , 在钳制电压为 -60 mV 时用不同浓 度的 ACh 作为激动剂能得到典型的电流图, 并且使 用阻断剂筒箭毒碱可以完全拮抗 ACh 产生的电流 的卵母细胞 (38 个
15、细胞, 3 只爪蟾) 作为实验对象 (说明 AChR 已功能性地表达) 。加 50 ml 的七氟醚 (雅培公司, 美国) 到一个充满 400 ml Ringers 液的 密封玻璃瓶中, 在室温下平衡 24 h 以上。通过气相 色谱仪 (HP6890) 来测定其浓度。所有实验均采用 10 molL -1 MACh 作为激动剂。 1. 8 实验步骤及统计分析 先建立七氟醚、 罗库溴 铵和维库溴铵的量效关系。后在加入七氟醚 (0. 5 IC50) 1 min 后, 再加入单用 ACh 或 ACh 与不同浓 度的肌松药联合 (肌松药的 3 种浓度分别为 IC5、 0. 5 IC50、 IC50) ,
16、20 s 后测定峰值电流评价受体活 性。在每次使用拮抗剂之前或后测定单用 ACh 引 起的电流反应, 两者平均值作为平均对照电流。拮 抗剂的作用强度用以下公式计算: 抑制率 (%)= 1 -( 使用拮抗剂后的电流/ 平均对照电流) 100%。肌松药和七氟醚的浓度反应曲线用以下方 程拟合: Y = 1/ 1 +(x/ IC50) nH (GraphPad Prisom 3. 0 版) 。Y 是现存电流, nH 是拟合系数,x 是拮抗 剂浓度。结果用*x s 或 95% 有效区间 (CI) 表示, 数据比较采用不配对 t 检验或 Tukeys 检验中的单因 素方差分析。 2 结果 2. 1 从大鼠
17、肌肉组织中提取 poly (A)+ mRNA 经 紫外分光光度计检测 A260/ A280比值为 1. 9, 说明蛋 白质己基本去除干净, 提取的 mRNA 纯度较好。每 克肌肉组织提取的 poly (A)+ mRNA 为 (24 6. 2) g。ACh 能引起表达后的卵母细胞产生相应的膜 电流。罗库溴铵和维库溴铵可逆、 浓度依赖性地抑 制 ACh (10 molL -1) 引起的全细胞电流。维库溴 铵 (IC50浓度: 9. 2 nmolL -1, 95% CI: 7. 9 12. 3 nmolL -1)抑制膜电流的作用强于罗库溴铵 (IC 50 浓度: 33. 4 nmolL -1, 95
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