三七总皂甙对脑出血大鼠的神经保护作用.pdf
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1、 5 g a n e t l iS A ,N a y l o rM ,D o b b i n sN ,e ta 1 I m p l e m e n t a t i o no fh y p o t h e r m i af o rH I Ep r o g r a ml2 - y e a re x p e r i e n c ei nas i n g l eN I C U J JP e r i n a t o l ,2 0 0 7 ,( 6 ) :l O O 一1 0 2 6 3M c K i n n e yA M T h o m p s o nL R ,T r u w i tC L ,e ta
2、LU n i l a t e r a lh y p o x i c - i s c h e m i ci n j u r yi ny o u n gc h i l d r e nf r o ma b u s i v eh e a dt r a u m a , l a c k i n gc r a n i o c e r v i e a lv a s c u l a rd i s s e c t i o no rc o r di n j u r y 刀P e d i - a t rR a d i o l ,2 0 0 8 ,3 8 ( 2 ) 1 1 6 4 - 1 7 4 ( 收稿2 0 0
3、8 0 3 0 3 ) 三七总皂甙对脑出血大鼠的神经保护作用 代秀琴 河南商丘市第一人民医院神经外科商丘4 7 6 0 0 0 【摘要】目的探讨三七总皂甙对脑出血后血肿周围肿瘤坏死因子( T N F a ) 表达以及神经元凋亡的影响。方法实验大鼠 随机分为假手术组、模型组、三七总皂甙治疗组,采用自体血注射法制作脑出血模型,术后zh 七叶皂甙钠组腹腔注射三七总皂甙 ( 3 0m g k g ) ,另2 组给予等量生理盐水,连续用药( 1 次d ) 。给药后1 2 h 、2 4 h 、3 d 和7 d 分别用免疫组化法与T U N E L 法检测肿瘤 坏死因子( T N F - a ) 的表达和神
4、经元的凋亡情况。结果与假手术组比较,模型组T N F 阳性细胞数以及凋亡的神经元明显增多( P o 0 1 ) ;与模型组比较,七叶皂甙钠组血肿周围肿瘤坏死因子( T N F - a ) 表达与神经元的凋亡明显下降( P o 0 1 ,P O 0 5 ) 结论 三七总皂甙对脑出血后神经元损伤具有保护作用,其机制可能与抑制T N F 的表达、减少神经元的凋亡有关。 【关键词】脑出血;肿瘤坏死因子;凋亡 【中图分类号】R 一3 3 2【文献标识码】A【文章编号1 1 6 7 3 5 1 1 0 ( 2 0 0 8 ) 0 5 一0 0 3 8 一0 3 N e u r o np r o t e c
5、 t i v ee f f e c to fP a n a xn o t o g i n s e n gs a p o n i n so np e r i h e m a t o m aa f t e ri n t r a c e r e b r a lh e m o r r h a g ei nr a t s D a iX i u q i n D e p a r t m e n to fN e u r o s u r g e r y ,t h eF i r s tP e o p l e sH o s p i t a lo fS f i a n g q i u ,S h a n g q i u
6、4 7 6 0 0 0 , C h i n a A b s t r a c t 0 b j e c t i v eT oo b s e r v et h eP a n a xn o t o g i n s e n gs a p o n i n s 。Si n f u l e n c eO f ft h ee x p r e s s i o no fT N F - aa n dt h ea p o p t o s i so f n e u r o ni np e r i h e m a t o m aa f t e ri n t r a c e r e b r a lh e m o r r h
7、a g ei nr a t s M e t h o d sR a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t ot h r e eg r o u p s :s h a m - o p e r a - t i v eg r o u p ,m o d e lg r o u p ,a e s e i n a t eg r o u p I C Hm o d e l sw e r ei n d u c e di nr a t sw i t hi n j e c t i o no fa u t o l o g o u sb l o o di n t ot h e
8、r i g h tc a u - d a t A f t e r2h o u r s 。P a n a xn o t o g i n s e n gs a p o n i n sw a si n j e c t e di n t r a p e r i t o n e a l l yw i t ht h ed o s eo f3 0m g k gi na e s c i n a t eg r o u pp e rd a y S a l i n ew a sg i v e ni nt h eo t h e rt W Og r o u p sp e rd a y T h e s er a t sw
9、 e r ek i l l e da t1 2 h ,2 4 h ,3 da n d7 da f t e ro p e r a t i o nt od e t e c tt h ee x p r e s s i o n o fT N F - 口a n dt h ea p o p t o s i so fn e u r o n R e s u l t sT h ee x p r e s s i o no fT N Fa n dt h ea p o p t o s i so fn e u r o nw e r eo b v i o u s l yh i g h e r ( P 0 0 1 ) i
10、nm o d e lg r o u pt h a nt h o s eo fs h a mg r o u p ( P O 0 1 ) T h ee x p r e s s i o no fT N F - aa n dt h ea p o p t o s i so fn e u r o nw e r eo b v i o u s l yl o w e r ( P O 0 1 ,P O 0 5 ) i na e s c i n a t eg r o u pt h a nt h o s eo fm o d e lg r o u p C o n c l u s i o nP a n a xn o t
11、o g i n s e n gs a p o n i n sh a sa ne v i d e n tp r o t e c t i v e e f f e c tf o ri n j u r e dn e u r o na f t e ri n t r a c e r e b r a lh e m o r r h a g ei nr a t s ,w h i c hm a yb er e l a t e dt od e c r e a s i n gt h ee x p r e s s i o no fT N F 二aa n di n - h a b i t i n gt h ea p o
12、p t o s i so fn e u r o n K e yw o r d s A e s c i n a t e ;I n t r a e e r e b r a lh e m o r r h a g e ;T N F :理# A p o p t o s i s 近年来研究发现,脑出血后白细胞向血肿周围浸 润,引发炎症反应而造成脑组织损害,在脑出血后脑组 织的损伤机制中占重要地位。本研究观察三七总皂甙 对大鼠脑出血后T N F - a 的影响及对神经元凋亡的影 响,以进一步探讨其作用机制。 1 材料与方法 1 1 实验动物和分组成年雄性W i s t a r 大鼠6 0 只, 体质量2 0
13、 0 2 5 0 9 ,由郑州大学实验动物中心提供,以 标准饲料喂养。按照随机化原则将实验动物分为3 组,即假手术组、模型组和七叶皂钠组。每组均设3 d 和7 d 两个时间点。每个时间点设1 0 只大鼠。 1 2 主要仪器及试剂江湾型立体定位仪,微量进 样器( 上海医用仪器厂) ,显微外科手术器械,牙科钻, T N F 多克隆抗体( 北京博奥森生物技术有限公司) ,S P 系列二抗( 北京中杉生物技术有限公司) ,T U N E L 试 剂盒。 1 3 大鼠尾状核脑出血模型建立及给药利用自体 动脉血缓慢注射法建立脑出血动物模型。参照X u e 等叫的方法,大鼠用1 0 水合氯醛( 4 0 0
14、m g k g ) 腹腔 注射麻醉后俯卧位固定于立体定位仪上,碘伏消毒局 部皮肤,行顶部正中切口,调整立体定位仪使大鼠前囟 和后囟在同一平面,以前囟中央为原点,于前囟前 0 2 r a m ,中线向右旁开3 5 m m 处钻一直径为1 r a m 的 小孔,微量进样器沿钻孔进针,深度5 r n m ,即尾状核位 置。I C H 组及治疗组大鼠缓慢注入5 0 肛1 自体动脉血, 动脉血采自股动脉;假手术组注入5 0 p l 灭菌生理盐 水,1 5 2 0 m i n 注射完毕,留针5 m i n 后缓慢将针退 出,缝合皮肤。术后2h 七叶皂甙钠组腹腔注射三七 总皂甙( 3 0m g k g )
15、;另2 组给予等量生理盐水,连续 用药( 1 次d ) 。分别在给药1 2 h 、2 4 h 、3d 和7d 后用 万方数据 过量的水合氯醛麻醉,并处死动物。 1 4 标本及病理切片的制作各组大鼠在相应的时 间点用过量的水合氯醛麻醉,迅速打开胸腔,由左心室 灌注生理盐水,直至由剪开的右心耳流出的液体变清 亮为止,然后断头取脑,脑组织标本浸于1 0 福尔马 林液中固定7 2 h ,以针眼为中心取厚约l c m 的冠状切 片,石蜡包埋,然后在切片机上连续切片,片厚2 弘m , 行T N F 一口免疫组化染色和神经元凋亡的检测。 1 5 图像采集分析光学显微镜下,D A B 染色阳性 细胞呈棕黄色或
16、褐色,利用德国L e i c a i 分析系统对图 像进行分析,每张图像选取3 个不同的视野,计数阳性 细胞数。 1 6 统计学分析所有数据均用均数标准差表示, 采用S P S S l 0 0 软件对数据进行统计分析,各指标组 间比较用单因素方差分析,检验水准a 一0 0 5 。 2 结果 2 1 脑血肿周围T N F a 的表达情况模型组和给药 组的脑血肿周围组织均有T N F a 表达,与假手术组比 较,模型组T N F a 阳性细胞数明显增多( P O 0 1 ) ; 与模型组比较,七叶皂甙钠组T N F _ a 明显下降( P 0 0 5 ) ;3 组之间的阳性细胞数比较差异有统计学意
17、义 ( P O 0 5 ) 。见表1 。 表1 脑血肿周围T N F - a 的表达情况土s ) 组别 1 2 h2 4 h3 d7 d 假手术组 1 6 士1 2 2 5 士2 03 1 士2 3 2 3 士1 1 模型组 2 7 士1 5 3 9 士1 76 0 士3 54 7 士2 9 七叶皂钠治疗组 2 0 士0 8 。3 1 士0 5 。4 2 士3 7 2 7 士2 6 。 假手术组4 5 士1 25 6 士2 0 6 3 士2 36 1 士1 1 模型组2 7 1 士1 53 5 2 士L78 6 5 士& 55 2 5 2 9 七叶皂钠治疗组2 2 3 士Q 8 3 L6 士o
18、 5 6 1 9 37 4 0 4 + Z6 。 假手术组与模型组相比,P 0 0 5 ;与模型组比较,oP 0 0 5 2 。2 血肿周围神经元的凋亡情况假手术组针道周 围有散在T U N E L 阳性细胞,模型组造模后T U N E L 阳性细胞明显增多,从细胞形态、位置分析主要是血肿 周围及血肿内的神经元,1 d 时开始增加,3 d 时 T U N E L 阳性细胞表达达高峰,7 d 时仍有少量表达。 三七总皂甙治疗组1 2 h 、2 4 h 、3 d 、7 d T U N E L 阳性细胞 数较模型组明显减少( P o 0 5 ) ,见表2 。 3 讨论 脑出血后存在明显炎性反应,反应
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