不同年龄大鼠血清抗中肾旁管激素水平与卵巢储备功能的关系.pdf
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1、2 0 0 8 年6 月 第1 8 卷第6 期 中国比较医学杂志 C H I N E S EJ O U R N A LO FC O M P A R A l l V EM E D I C I N E J u n e ,2 0 0 8 V 0 1 1 8N o 6 帝e e 屿) 2 I 研究报告$ 妲 瞬e 岛、e 菇- e ;、够 不同年龄大鼠血清抗中肾旁管激素水平 与卵巢储备功能的关系 梁元晶1 ,X UC h a n g h u i 2 ,K I MB e o m s u 2 ,P E R E S I EJ e n n i f e r 2 ,Y E HJ o h n 2 ( 1 首都医科大
2、学基础医学院生殖医学研究中心,北京1 0 0 0 6 9 ; 2 D e p a r t m e n to fO b s t e t r i c sa n dG y n e c o l o g y ,U n i v e r s i t ya tB u f f a l o ,1 1 l eS t a t eU n i v e r s i t yo fN e wY o r k ,B u f f a l o ,N e wY o r k ,U S A ) 【摘要】 目的 探讨不同年龄组雌性大鼠血清抗中肾旁管激素( A M H ) 变化的规律和原因,探讨A M H 在预测 卵巢储备功能方面的作用。方法s
3、 D 雌性大鼠分为幼年组、成年组和老年组。运用E L I S A 和免疫荧光化学方法, 检测血清和卵巢中A M H 的表达。结果血清A M H 水平,幼年组5 2 6 土0 1 3n g m L ,成年组2 3 4 0 1 1n g m L ,老年 组0 6 9 0 0 4u s m L ,随年龄增长显著降低( P 0 0 5 ) 。但是,成年组动情周期各个时 段与老年组的相应时段相比,A M H 水平均显著较高 ( P 0 0 0 1 ;表1 ) 。可见,在动情周期的任一时段, 成年组大鼠血清A M H 水平均高于老年组。 表1 成年组和老年组大鼠动情周期的 不同时段血清A M H 水平(
4、i s ) T a b 1S e r u mA I V I Hl e v e l si nd i f f e r e n ts t a g e so f t h ee s t r o u $ c y c l ei na d u l ta n da g i n gr a t s ( i - 4 - s ) 在动情周期的每一个时段,老年组与成年组大鼠相比,| P 0 0 0 1 。 N o t e s :a te a c hs t a g eo fe , s t r o t t sc y c l e ,a g i I l gr a t sc o m p a r e dw i t ha d u l
5、tr a t s , P ( 0 0 0 1 2 2 卵巢组织学观察和免疫荧光化学检测 2 2 1 卵巢中A M H 的定位:在3 个不同年龄组的 大鼠,A M H 主要表达在初级卵泡、窦前卵泡和小的 窦状卵泡,特别是上述卵泡的颗粒细胞中。大窦状 卵泡的颗粒细胞中A M H 表达较弱,甚至呈阴性。在 卵泡膜细胞中,A 、,I H 表达可呈阴性( 图1 见彩插 5 ) 。 2 2 2 卵巢中卵泡的总数量:对随机卵巢标本进行 的卵泡记数显示:幼年组为3 8 9 2 2 个,成年组为 1 7 3 1 9 个,老年组为6 1 0 9 个。随着大鼠年 龄的增长,卵巢中卵泡总数减少( P 0 0 0 1
6、;表2 ) 。 其中A M H 阳性卵泡数量:幼年组为1 9 5 1 3 个, 成年组为1 0 8 1 5 个,老年组为3 8 0 6 个。随 着大鼠年龄的增长,A M H 阳性卵泡的数量明显下降 ( P 0 0 0 1 ;表2 ) 。在不同年龄组中,A M H 阳性卵 泡占卵泡总数的百分比基本保持不变,均为5 0 一 6 5 左右。 表2 不同年龄组大鼠卵巢中卵泡计数 以及A M H 阳性卵泡数量( i s n = 2 0 ) T a b 2T o t a lM l i c l eC o u n ta n dA M H p o s i t i v ef o l l i c l ec o u
7、n t i nt h ey o u n g ,a d u l ta n da g i n gr a t s ( i s ,n = 2 0 ) + 与幼年组大鼠相比P 0 0 0 1 ,。与成年组大鼠相比P 0 0 0 1 。 N o t e s :。c 伽p a 硎w i t hy o u n gr a t s ,P O 0 0 1 ; 。c o m p a r e dw i t h a d u l t r a t s 。P 0 0 0 1 综合上述免疫荧光化学和E L I S A 结果,可见,随 着大鼠年龄增长,其卵巢产生A M H 的卵泡数量减 少,导致了血清A M H 水平随着年龄增加而
8、不断下 降。但是,这些卵泡占总卵泡数量的百分比基本 不变。 3 讨论 抗中肾旁管激素( A M H ) 又称苗勒管抑制物 质,是由二硫键连接而成的二聚体糖蛋白,是转化生 长因子B ( T G F p ) 超家族的一个成员。与T G F 口家 族其他成员的广泛表达不同,A M H 的表达仅限于性 腺J 。在雄性动物。A M H 起初是由胚胎睾丸支持细 胞表达,诱导苗勒管退化,使生殖管道向雄性方向分 化。在雌性动物,A M H 主要由卵巢中的生长卵泡, 包括:初级卵泡、窦前卵泡和小的窦状卵泡分泌旧1 , 其功能为抑制原始卵泡的募集,抑制F S H 依赖性的 卵泡发育及优势卵泡的选择归- 。 国外检
9、测了人血清中A M H 水平,结果显示:随 着年龄的增长,女性血清A M H 水平逐渐下降;青年 和老年病人卵泡液中A M H 水平也存在差异引。而 国内用A M H 水平来预测卵巢储备功能的研究非常 少,尚未见系统的动物实验研究报道。本课题选用 不同年龄段的雌性大鼠,用E L I S A 方法检测其血清 的A M H 水平,系统地探讨了大鼠不同生长发育阶段 A M H 水平的变化。结果证实,随着年龄增加,大鼠 血清中A M H 水平不断下降,各组间差异具有统计学 万方数据 3 4中国比较医学杂志2 0 0 8 年6 月第1 8 卷第6 期C h i nJC o m pM e d ,J u n
10、 e2 0 0 8 ,V 0 1 1 8 N o 6 意义( P 0 0 0 1 ) 。 我们进而探讨是什么原因导致了大鼠血清 A M H 水平随年龄的变化。对卵巢组织标本进行 A M H 免疫荧光染色,显示A M H 主要表达在某些生 长卵泡,即初级卵泡、窦前卵泡和小窦状卵泡中,上 述卵泡的颗粒细胞呈A M H 阳性反应。大窦状卵泡 和黄体几乎不着色。随着年龄的增长,生长卵泡的 数量逐渐减少,A M H 阳性的初级卵泡、窦前卵泡和 小窦状卵泡计数显著下降,这是导致血清A M H 水平 降低的重要原因之一。 在雌性动物一生中,原始卵泡库内的原始卵泡 持续分批进入募集周期,始终处于周期性的生长发
11、 育与闭锁的动态变化之中,直至原始卵泡耗尽为止。 因此,卵巢老化和卵巢储备功能的下降在数量上表 现为原始卵泡库存的逐渐减小。而在实际操作中, 通常采用生长卵泡数目来间接反映原始卵泡库存的 大小一2 | 。本研究显示,A M H 主要由生长卵泡所 分泌。随着大鼠年龄增加,卵巢中生长卵泡数量减 少,A M H 分泌量下降,导致血清中A M H 水平降低。 可见,血清A M H 水平能够间接反映生长卵泡数量和 原始卵泡库存量的变化,可以作为观察卵巢老化和 检测卵巢储备功能的指标。 总之,本实验较为系统地证实了大鼠生长、发育 和衰老过程中,卵巢中分泌A M H 的生长卵泡数量不 断减少,血清A M H
12、 水平显著降低,卵巢储备功能不 断下降。提示血清A M H 可以作为卵巢老化的标志, 是检测卵巢储备功能的较为准确的指标。 参考文献 1 S c o t tR T ,J r ,H o f m a r mG E P r o g n o s t i c r e e J F e r t i lS t e r i l ,1 9 9 5 ,6 3 :1 1 1 Y e hJ ,A d a s h iE 1 1 l eo v a r i a nl i f ec y c l e Y e nS 。J a f f eR ,B a r b i e r iR ( e d ) I n :R e p r o d u c
13、 t i v eE n d o c r i n o l o g y ( 4 t he d ) M P h i l a d e l p h i a 。 P A :S a u n d e r sW B 1 9 9 9 1 5 3 一1 9 0 T r e m e l l e nK P ,K o l oM ,G i l m o r eA 。e ta 1 A n t i M i l l l e r i a nh o r m o n e am a r k e ro fo v a r i a nr e B e i _ v e J A u s tN zJO b s t e tG y n a e c 0 1
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