内毒素血症幼年大鼠胃黏膜PS2 TGF-α和PCNA表达变化及意义.pdf
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1、第l o 卷第2 期中国“ - 3 代儿科杂志 V 0 1 1 0N o 2 2 0 0 8 年4 月 C h i nJC o n t e m pP e d i a t r A p r 2 0 0 8 实验研究 内毒素血症幼年大鼠胃黏膜p S 2T G F 一0 【和P C N A 表达变化及意义 刘春英1 ,王丽杰2 ,王艳斌1 ,吕庆杰3 ,姜卫国3 ,孙梅2 ( 1 解放军第4 6 3 医院儿科,辽宁沈阳1 1 0 0 4 2 ;2 中国医科大学第二临床学院儿科,辽宁沈阳1 1 0 0 0 4 ; 3 中国医科大学第二临床学院病理科,辽宁沈阳1 1 0 0 0 4 ) 摘要目的胃黏膜上皮
2、的生长、更新和修复的过程是受到严格调控的,其修复能力可能与肽类物质的 表达水平有关。该文探讨急性胃黏膜损伤修复中乳癌相关肽( p S 2 ) 、转化生长因子一d ( T G F 位) 及增殖细胞核抗原 ( P C N A ) 的作用。方法1 8 日龄W i s t a r 大鼠,随机分为实验组( L P S 组) 和对照组,分别腹腔注射内毒素( 5m g k g ) 及生理盐水,每一时相点8 只,注射后1 5 ,3 ,6 ,2 4 ,4 8 ,7 2h 观察胃黏膜损伤情况,苏木精咿红染色观察形态学 改变,免疫组化s P 法检测胃黏膜p s 2 、T G F 一仅及P C N A 蛋白表达变化。
3、结果L P S 组6h 胃黏膜损伤最重,黏膜表 面可见大片糜烂、出血、条索状坏死,与胃纵轴平行;光镜下黏膜表面上皮广泛脱落,黏膜内有出血,炎性细胞浸润, 核碎裂、固缩,凋亡小体出现,腺体受损。L P S 组的P C N A 在3 ,6 ,2 4 ,4 8h 胃黏膜组织细胞核表达较对照组明显减 低( P 0 0 1 ) ;p S 2 在1 5h 胃黏膜组织细胞浆表达低于对照组,3h 恢复正常,6 ,2 4 ,4 8 ,7 2h 明显高于对照组 ( P 0 0 1 ) ;T G F - a 在6 ,2 4 ,4 8h 胃黏膜组织细胞浆表达较对照组明显增强( P 0 0 1 ) 。结论P C N A
4、 表达变化反 映了胃黏膜损伤和修复过程中胃黏膜细胞的增殖活性;p S 2 表达上调,可能通过介导细胞增殖参与急性胃黏膜细胞 保护作用;T G F O t 表达增强,可能促进了胃黏膜上皮的代谢和生长,参与胃黏膜的修复。 【中国当代儿科杂志。2 0 0 8 ,1 0 ( 2 ) :2 2 1 2 2 4 【关键词】急性胃黏膜损伤;p S 2 ;T G F O t ;P C N A ;大鼠 中图分类号 R 一3 3【文献标识码 A【文章编号 1 0 0 8 8 8 3 0 ( 2 0 0 8 ) 0 2 0 2 2 1 一0 4 E x p r e s s i o no fp S 2 T G F -
5、 O ta n dP C N Ai nt h eg a s t r i cm u c o s ao fy o u n gr a t s 耐t he n d o - t o x e m i a L I UC h n a Y i n g ,W A N G 厶一皿,W A N GY a n B i n ,L UQ i n g - 加,J I A N GW e i C a w ,S U NM e i D e p a r t m e n to f P e d i a t r i c s ,4 6 3 H o s p i t a lo fC h i n e s eP e o p l e sL i b e
6、r a t i o nA r m y ,S h e n y a n g11 0 0 4 2 ,C h i n a ( S u nM ,E m a :s u n m c m u 2 h C O B ) A b s t r a c t :O b j e c t i v eG r o w t h ,r e g e n e r a t i o na n dr e p a r a t i o no fg a s t r i cm u c o s a le p i t h e h u mm a yr e l a t et Ot h ee x p r e s s i o n o fp e p t i d e
7、 s 皿l i ss t u d ya i m e dt oi n v e s t i g a t et h ee f f e c to fp S 2 ,T G F - aa n dP C N Ai ne n d o t o x i n i n d u c e da c u t eg a s t r i cm u e a s a l i n j u r yi ny o u n gr a t s M e t h o d sE i g h t e e n d a y - o l dW i s t a rr a t sw e r er a n d o m l yi n j e c b e di n
8、t r a p e r i t o n e a l l yw i t hl i p o p o l y s a c c h a r i d e ( L P S ) ( 5m s k s ) o rn o r m a ls a l i n e ( n t r 0 1 ) g a s t r i cm u c o s a ls p e c i m e n sW e r eh a r v e s t e d1 5 ,3 ,6 ,2 4 ,4 8 ,a n d7 2 I n sa f t e rL P So rn o r m a ls a l i n ei n j e c t i o n ( 厅= 8
9、 翱c h ) 1 1 1 ep a t h o l o g i c a lc h 彻舻o ft h eg a s t r i cm u c o s aw e r eo b s e r v e db y h e m a t o x y l i n - e o s i ns t a i n i n g T h ee x p r e s s i o no fp S 2 ,T G F 吨a n dP C N Aw a gm e a s u r e db yi 舢咀u 加帖s t o c h e m i s yS Pm e t h o d R e s u l t sG a s t r i cm u c
10、 o s a li n j u r i e sw e r et h em o s t $ e r i o u s6h r sa f t e rL P Si n j e c t i o n ,c h a r a c t e r i z e db ym a s s i v ee r o s i o n , b l e e d i n ga n d c o r dn e c r o s i so ft h eg a s t r i cm u c o s ap a r a l l e l i n gw i t hg a s t r i cl o n g i t u d i n a la x i s P
11、 C N Ae x p r e s s i o ni nt h eg a s t r i c m u c o g ai nt h eL P Sg r o u p3 ,6 ,2 4a n d4 8h r sa f t e rL P Si n j e c t i o nw a ss i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h a ti nt h ec o n t r o lg r o u p ( P O 0 1 ) p S 2e x p r e s s i o ni nt h eg a s t r i cm u c o g aw e a k e n e d
12、1 5h r sa f t e rL P Si n j e c t i o n ,r e c o v e r e dt o I I ec o n t r o ll e v e la t3 h r sa n dW a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h ec o n t r o la t6 ,2 4 ,4 8a n d7 2M so fL P Si n j e c t i o n ( P 0 0 1 ) T G F - O te x p r e s s i o n i nt l l eg a s t r i cm u P A li nt
13、 h eL P Sg r o u pi n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y6 ,2 4a n d4 8h r sa f t e rL P Si n j e c t i o nw h e nc o m p a r e dw i t ht h e c o n t r o lg r o u p ( P 0 0 1 ) C o n c l u s i o n sP C N Ae x p r e s s i o nm a yb ea s s o c i a t e dw i t ht h ep r o l i f e r a t i o na c t i v
14、 i t yo ft h eg a s t r i c m u c o s ai nt h ep r o c e s so fg a s t r i cm u c o s a li n j u r y r e p a r a t i o n p s 2a n dT G F am i g h tp a r t i c i p a t ei nt h ed e f e n s ea n dr e p a r a t i o n o fg a s t r i cm u e o s a lc e l l st h r o u g hm e d i a t i n gc e l lp r o l i f
15、 e r a t i o nf o l l o w i n ga c u t eg a s t r i cm u c o s a li n j u r y C h i nJC o n t e m pP e d i a t r ,2 0 0 8 ,1 0 ( 2 ) :2 2 1 2 2 4 K e yw o r d s : A c u t eg a s t r i cm u c o s a li n j 山叮;p S 2 ;T G F 一仅;P C N A ;R a t s 收稿日期 2 0 0 7 0 8 2 0 - 修回日期 2 0 0 7 一0 9 2 8 作者简介 刘春英,女,博士,副
16、主任医师。主攻方向:儿科危重症及胃肠功能障碍的研究。 通讯作者 孙梅,教授,中国医科大学第二临床学院儿科,邮编:1 1 0 0 0 4 。 2 2 1 万方数据 第l O 卷第2 期 2 0 0 8 年4 月 中国当代儿科杂志 C h i nJC o n t e m pP e d i a t r V 0 1 1 0N o 2 A p r 2 0 0 8 胃黏膜上皮的生长、更新和修复的过程是受到 严格调控的,这一调控机制主要来自黏膜本身,有多 种肽类物质参与,其修复能力可能与这些肽类物质的 表达水平有关。乳癌相关肽( p S 2 ) 即三叶因子l ( r I F F ,) 为三叶肽家族一成员,属
17、于生长因子家族。 转化生长因子a ( T G F 一仅) 是表皮生长因子家族中一 类胃黏膜损伤后修复的主要调节肽。增殖细胞核抗 原( p r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e n ,P C N A ) 是反映细 胞增殖性重要的生物学指标。本文在内毒素血症幼 年大鼠模型中观察急性胃黏膜损伤和修复过程,免 疫组化染色检测胃黏膜T G F 一仅,p S 2 及P C N A 蛋白 表达变化,探讨在急性胃黏膜损伤修复中T G F 一, p S 2 及P C N A 的作用,研究肽类物对胃黏膜的保护 作用,为胃黏膜损伤的预防和治疗提
18、供理论基础。 1 材料和方法 1 1 材料 健康1 8 日龄清洁级W i s t a r 大鼠,不分雌雄,平 均体重3 2 3 7 6 3 2 g ,与母鼠共同饲养,由中国医 科大学第二临床学院实验动物中心提供。随机分为 实验组( L P S 组) 和对照组,每组每一时相点( 1 5 , 3 ,6 ,2 4 ,4 8 ,7 2h ) 各8 只。L P S 组腹腔注射内毒 素( O 驺:B 5 脂多糖,美国S i g m a 公司产品) 5m g k g ( 1m L k g ) ,用生理盐水溶解。对照组腹腔注射生 理盐水1m L k g 。用药后各组均放回鼠笼,继续哺 乳。分别于注射后1 5
19、,3 ,6 ,2 4 ,4 8 ,7 2h 处死 动物,迅速开腹取胃,沿胃大弯剪开,在腺胃区胃 大弯处取0 5c m 0 5c m 胃组织置入4 甲醛溶 液中固定。 1 2 方法 1 2 1 组织病理学检测大体观察胃黏膜损伤 情况。留取胃组织在4 甲醛溶液中固定2 4h 后, 石蜡包埋、切片,常规苏木精一伊红染色,光镜观察形 态学改变。 1 2 2 免疫组化s P 法检测胃黏膜p S 2 ,T G F 一仅及 P C N A 蛋白表达切片常规脱蜡,二缸二甲苯各 浸泡1 0m i n ,四缸酒精( 浓度依次为:1 0 0 ,9 5 , 8 5 ,7 5 ) 各浸泡5m i n ,用蒸馏水冲洗。将
20、切片 擦干,3 新配制H :0 2 孵育,室温放置1 0r a i n ,灭活 内源性酶,蒸馏水洗涤2m i n ,3 次。热修复抗原,高 温高压修复( E D T A ) ,放置室温自然凉,用蒸馏水冲 洗,O 0 1 M P B S ( p H7 4 ) 冲洗。滴加1 0 正常山羊 血清,室温温育1 0m a n ;倾去血清,直接滴加稀释的 第一抗体,抗体的工作浓度为:兔抗鼠p S 2I g G 即 用型,兔抗鼠一T G F dI g G1 :1 0 0 ,兔抗鼠P C N AI g G 1 :1 0 0 ,4 。C 过夜。0 0 1M P B S ( p H7 4 ) 冲洗2r a i n
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