卵母细胞体外成熟培养技术治疗多囊卵巢综合征患者的初步探讨.pdf
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1、中国医师杂志2 0 0 8 年9 月第1 0 卷第9 期 1 1 9 3 卵母细胞体外成熟培养技术治疗多囊卵巢综合征患者的初步探讨 龚斐1 2 ,张硕屏2 ,林戈1 一,卢光跨1 ” ( 1 中南大学生殖与干细胞工程研究所,湖南长沙4 1 0 0 7 8 ;2 中信湘雅生殖与遗传专科医院) 【摘要】目的研究通过未成熟卵母细胞体外成熟( I V M ) 技术治疗多囊卵巢综合征( P C O S ) 患者的效果。方法对P C O S 患 者在月经周期3 4d 开始给予小剂量( 1 0 0 1 5 0I U ) F S H 刺激3d 。周期8 1 0d ,当出现直径为1 0 一1 4m m 卵泡,子
2、宫内膜厚度 5n l l l l ,阴道B 超引导下穿刺获取不成熟卵母细胞。将其行体外成熟培养2 8 3 1h r s ,待排出第一极体后行常规单精子卵胞浆内 显微注射( I C S I ) 一胚胎移植治疗。结果1 2 例体外成熟培养周期中,3 例获得临床妊娠,妊娠率为2 5 0 。结论未成熟卵母细胞 体外成熟培养技术是使P C O S 患者获得妊娠的可行方法。 关键词】受精,体外;卵母细胞;细胞,培养的;多囊卵巢综合征治疗 Ar e s e a r c ho ft r e a t i n gi d e r t f l eP C O Sw o m e nw i t ho o c y t ei
3、nv i t r om a t u r a t i o n G O N GF e i ,z H A N GS h u o - p i n g ,L l NG e ,L UG u a n g x i u I n s t i t u t eo fR e p r o d u c t i v ea n dS t e mc e l lE n g i n e e r i n go fC e n t r a lS o u t hU n i v e r s i t y , C h a n g s h a4 1 0 0 7 8 ,C h i n a 【A b s t 聆c t 】O b j e c t i v
4、e T od e v e l o pam e t h o df o rt r e a t i n gi n f e r t i l ew o m e nw i t hp o l y c y s t i co v a r ys y n d r o m e ( P C O S ) b yo o c y t ei nv i t r o m a t u r a t i o n ( 1 V M ) M e t h o d s O nd a y3 4o fm e n s t r u a lc y c l e ,i n f e r t i l ew o m e nw i t hP C O Sw e r ea
5、 d m i n i s t r a t e dw i t h ( 1 0 0 1 5 0 1 U ) F S H d a yf o r3d a y s O nd a y8 1 0 ,w h e nt h ef o l l i c l ed i a m e t e rr e a c h e d1 0 1 4 r a ma n de n d o m e t r i u m 5 m m ,t h ei m m a t u r eo o c y t e sw e r ep i c k e du p a n dc u l t u r e di n v i t r o f o r2 8 31h o u
6、r s T h e n I C S Ia n de m b r y ot r a n s f e rw e r ep e r f o r m e d R e s u l t s3c l i n i cp r e g n a n c i e sw e r ee s t a b l i s h e da - m o n g1 2i n f e r t i l ew o m e n t h ep r e g n a n c yr a t ew a $ 2 5 O C o n c l u s i o n T h i sr e s e a r c hi n d i c a t e st h a tI V
7、 Mi saf e a s i b l et e c h n o l o g yf o rt h ei n f e r t i l ew o m e nw i t hP C O S 【K e yw o r d s 】 F e r t i l i x z a t i o ni nv i t r o ;O o e y t e s ;C e l l s ,c u l t u r e d ;P o l y c y s t i co v a r ys y n d r o m e T H 多囊卵巢综合征( P C O S ) 是一组病因不明,以卵巢 内存在大量小窦卵泡为特征的综合征,其卵巢内大量 基础窦卵
8、泡的存在使其在A R T 的控制性超排卵 ( C O H ) 时易于发生卵巢过度刺激综合征( O H S S ) ,研 究显示未成熟卵母细胞体外成熟( I V M ) 技术能明显降 低P C O S 患者O H S S 的发生率,而I V M 治疗的临床妊 娠率可以达到1 5 2 5 左右1 ,有时甚至可以达到 与传统I V F 周期相似的妊娠率旧1 。同时,由于I V M 技 术的发展使A R T 周期中促排卵药物的使用剂量明显 降低,因而有助于降低P C O S 患者接受A R T 治疗的费 用。尽管国际上关于I V M 在P C O S 的临床应用上有较 多报道【3 。J ,但临床治疗方
9、案各异。在对病人的选择 是否需要达英- 3 5 ,二甲双胍等预处理、是否使用促性 腺激素( G n ) 或人绒毛膜促性腺激素( H C G ) 进行诱发 排卵、取卵的时间、培养基的营养条件、体外成熟培养 通讯作者 时间及子宫内膜的准备等一系列问题均未形成统一标 准。因此,其临床方案优化的研究已成为热门。W y n n P 等1 报道,在P C O S 患者I V M 前采用短暂F S H 刺激, 有助于提高成功率。L iY u a n 等一。应用少量人绝经后 尿促性腺激素( H M G ) 联合H C G 诱发排卵后行I V M 治 疗,在1 例P C O S 患者中获得成功。本研究拟探讨在
10、使用短暂F S H 刺激后不使用H C G ,对取出的P C O S 患 者的未成熟卵母细胞行I V M 治疗,以建立起能够用于 P C O S 患者的I V M 治疗技术。 1 材料与方法 1 1 一般资料2 0 0 6 年7 月一2 0 0 6 年1 1 月在本院 生殖医学中心就诊的1 2 例P C O S 患者。诊断P C O S 按 鹿特丹标准:( 1 ) 稀发或无排卵;( 2 ) 临床和或生化有高 雄激素表现;( 3 ) 阴道超声每侧卵巢内直径2 9m m 的 卵泡1 2 个和( 或) 卵巢容积 1 0m l ;具有以上三项 7 K a m i y aH ,A k h y a r i
11、P ,M a r t e n sA e ta 1 S t e r n a lm i e r c c i r c u l a t i o na f t e r s k e l e t o n i z e dV e I 售u sp e d i c l e dh a r v e s t i n go ft h ei n t e r n a lt h o r a c i ca r t e r y :A r a n d o m i z e ds t u d y JT h o r a cC a r d i o v a s cS u r g ,2 0 0 8 ,1 3 5 ( 1 ) :3 2 - 3 7
12、8G r o s s iE A ,E s p o s i t oR ,H a r r i sL J ,e ta 1 S t e r n a lw o u n di n f e c t i o n sa n d U S eo fi n t e r n a lm a m m a r ya r t e r yg r a f t s JT h o r a cC a r d i o v a s cS u r g ,1 9 9 1 , 收稿日期:2 0 0 8 - 0 4 - 2 3 ( 本文编辑:骆蓉) 万方数据 11 9 4 J o u r n a lo fC h i n e s eP h y s i
13、 c i a n ,S e p t e m b e r ,2 0 0 8 ,V 0 1 1 0 ,N 0 9 中至少两项,并排除了肾上腺皮质增生、雄激素分泌肿 瘤及库欣综合征等疾病。本组患者均为月经稀发,年 龄2 5 3 1 ( 2 8 64 - 1 7 ) 岁。术前均未予达英3 5 或二 甲双胍等预处理,并签署I V M 知情同意书。 l 2方法 1 2 - 。卵泡刺激方案于自然周期或撤退性出血 的3 5d :行阴道超声检查及测定血清E ,( 雌二醇) 值,当B 超检查无直径 1 0m m 优势卵泡,E m 5m m , 内膜剥脱完全,卵巢内无直径 2c m 囊肿,且血清E 5m m 时,则
14、于第2 天上午行取卵术,若取卵当天出现卵泡直 径 1 4m m ,则取消周期。 l 2 2卵子采集采用异丙酚静脉麻醉下经阴道 超声引导下行卵泡穿刺取卵术,采用K O S N 1 6 3 5 B - 9 0 穿刺针( C O O K 公司) ,抽吸负压为9 0m m H g 。 1 2 3 体外成熟培养用网孔7 0 “m 的F a l c o n 细 胞过滤器过滤卵泡液,然后将过滤器翻转过来,用冲洗 液( 9 5 G M O P S + 5 H S A ,3 7 5 平衡1h ) 冲洗过滤 器,将存留在过滤器上的卵冠丘复合物冲到F a l c o n 3 0 0 2 皿中,在体式镜下寻找卵母细胞
15、。将找到的卵母 细胞先置于含L A G 培养基( M e d i c u l t 公司) 的四孔皿 中,放入3 7 5 、6 C O ,培养箱中培养2 3h ;然后转 移到I V M 培养基中( M e d i c u l t 公司I V M 培养基+ 1 0 图1含有卵丘复合物的未成熟卵母细胞。可见生发泡( 4 0 0 ) 3 讨论 未成熟卵母细胞进行体外培养,虽然妊娠率低于 传统的I V F 或I C S I 周期,但有其独特的优势,尤其是对 于P C O S 患者,可避免卵巢过度刺激综合征的发生,并 很大程度上降低治疗费用和缩短治疗过程,对患者而 言,是一种方便、经济而安全的选择。在本院
16、治疗的1 2 p a t i e n t7 s s e r u m + 0 1I U m lP r e g n y l + 0 0 7 5I U m l F S H ) 成熟培养,置于3 7 5 、6 C O :培养箱继续培 养2 6 2 8h 。将所有卵母细胞脱去颗粒细胞,对排出 第一极体的M I I 期卵母细胞行I C S I 。1 6 1 8h 后观察 受精情况并对原核进行评分,然后转移到卵裂培养基 中( G 1 3 + 5 H S A ) 继续培养4 8h 后选取2 3 枚优 质胚胎进行移植。 1 2 4 子宫内膜的准备及黄体支持患者从取卵 1 3 开始口服补佳乐2m g ,2 3 次
17、d ,2d 后添加肌肉注 射黄体酮4 0m g ,2 次d 。在确定妊娠后雌激素逐步减 量至妊娠2 月停药,孕激素逐步减量至妊娠3 月停药。 l 2 5 妊娠诊断胚胎移植1 4d 后,血B H C G 检 测为阳性,确定生化妊娠;移植2 8 3 2d 行B 超检查, 如有孕囊及有原始心管搏动的胚芽,即可确定临床妊 娠。 2 结果 1 2 例体外成熟培养周期,获不成熟卵母细胞1 2 2 枚( 图1 ) ,经体外培养后获得成熟M I I 期卵母细胞8 6 枚,成熟率为7 0 5 ( 8 6 1 2 2 ,图2 ) ,受精6 4 枚,受精 率7 4 4 ( 6 4 8 6 ) 。获得胚胎6 3 枚,
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