何首乌总苷对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块部位核转录因子-KB蛋白表达的影响.pdf
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1、7 5 4 塑j E 生匡2 Q ! Q 生! 旦筮墼鲞箜量期旦! 鲢i 婴丛:丛型垫! Q :! 丛丝:塑垒:三 何首乌总苷对载脂蛋白E 基因缺陷小鼠动脉粥样硬化 斑块部位核转录因子一K B 蛋白表达的影响 魏雪梅李丽英朱洁莹靳文军 张海军王献忠刘苏颖 ( 河北省邯郸市第一医院心内二科,河北邯郸0 5 6 0 0 1 ) 【摘要】目的通过复制载脂蛋白E 基因缺陷小鼠模型,研究何首鸟总苷对载脂蛋白E 基因缺陷小 鼠动脉粥样硬化斑块部位核转录因子一K B ( N F K B ) 蛋白表达的影响。方法将2 4 只8 周龄A p o E 基因敲 除( A p o E 一一) 小鼠随机分为模型组、何首
2、乌总苷高、低剂量组和普罗布考组各6 只。4 组均给予0 1 5 胆 固醇高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化动物模型。同时,模型组给予0 9 氯化钠注射液0 3m l _ d ,何首乌总 苷高、低剂量组分别给予何首鸟总苷1 5 0 、2 5m s ( k g d ) ( O 3m L d ) ,普罗布考组给予普罗布考O 3m L d ( 与高脂饲料的质量比为l :1 0 0 ) 。饲养1 6 周后进行指标检测。观察比较各组小鼠主动脉斑块部位蛋白表达 的免疫组织化学染色,分析核转录因子一z B ( N F K B ) 蛋白表达。结果与模型组比较,何首鸟总苷高、低荆 量组和普罗布考组均可明显下调A p o
3、 E 一一小鼠主动脉斑块N F K B 蛋白表达( P 0 0 5 ,P 0 0 1 ) 。结论 何首鸟总苷通过影响N F K B 等炎性因子的表达,抑制动脉粥样硬化斑块的胶原纤维降解,从而稳定斑块, 预防斑块的破裂,避免临床不良事件的发生。 【关键词】动脉粥样硬化;N F z B ;载脂蛋白E 类;基因缺失;何首鸟;小鼠 【中图分类号lR 一3 3 2 ;F 鲫6 ;阿H 5 ;f B 4 l ;R 弧4 ;F 5【文铡暴5 码】A 【文章编射砌吃一搁9 ( 瑚硒_ 0 飘m E f f e c to ft o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n
4、 u mm u l t i f l o r u mo ne x p r e s s i o no fN F k Bi na t h e r o m a t o u sp l a q u eo fa i m - H p o p r o t e i nE d e f i c i e n tm i c eW E IX u e m e i ,1 2 伽粥,Z H U 如归培,e ta 1 N o 2M e d i c a lD e p a r t m e n t ,t h eF i r s t H o s p i t a lo fH a n d a n ,胁掘P r o v i n c e ,H a
5、n d a n0 5 6 0 0 1 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T os t u d yt o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n u mm u h i f l o r u mo ne x p r e s s i o no fN F - k Bi na t h e r - o m a t o u sp l a q u eo fa p o l i p o p r o t e i nE d e f i c i e n tm i c e M e t h o d s2 4A p o E m i c ew e r
6、 er a n d o m l yd i v i d e di n t o m o d e lg r o u p ,h i s h d o s et o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n u mm u l t i f l o r u mg r o u p ,l o w d o s et o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n u m m u l t i f l o r u mg r o u pa n dP r o b u c o lg r o u p A r t h e r e s c l e r o
7、 s i sm o d e lm i c ew e l ee s t a b l i s h e db yf e e d i n go f0 1 5 c h o l e s t e r o l f o r a g e 0 9 N a C Ii n j e c t i o n ,t o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n u mm u h i f l o r u mo f1 5 0 ,2 5m s ( k g d ) a n dP r o b u c o l0 3 m L dw e r eg i v e na td i f f e r e n tg
8、r o u p s T h ee x p r e s s i o no fN F K Bi na t h e r o s c l e r o t i cp l a q u ew e r ea n a l y z e da f t e r1 6 w e e k s R e s u l t sT h ee x p r e s s i o no fN F K Bi na t h e r e s c l e r o t i cp l a q u ei nh i g h d o s et o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n u m m u h i f l
9、 o m mg r o u p 1 0 w d o s et o t a lg l y c o s i d e so fP o l y g o n u mm u l t i f l o r u mg r o u pa n dP r o b u c o lg r o u pw e r ed e c r e a s e d c o m p a r i s o nw i t ht h a ti nm o d e lg r o u p ( P O 0 5 ,P 0 0 1 ) C o n c l u s i o nT h et o t a lg l y c o s i d e so fP o l y
10、g o n u mm u h i f l o - r u mi n h i b i td e g r a d a t i o no fc o H a g e nf i b e r si na t h e r o s c l e r o t i cp l a q u e ,b ys u p p r e s s i o no fe x p r e s s i o no fN F K B ,a n ds t a - b i l i z ep l a q u e ,a n da v o i dc l i n i c a le v e n t s 【K e yw o r d s 】A t h e r o
11、 s c l e r e s i s ;N F K B ;A p o p r o t e i nE ;G e n ed e l e t i o n ;P o l y g o n u mm u l t i f l o r u m ;M o u s e 目前认为动脉粥样硬化是由血脂代谢紊乱等多种因 素所引发的一种慢性炎性反应性疾病,在动脉粥样硬 化斑块形成的过程中,受损组织释放的大量自由基和多 种炎性因子,可加重内皮损伤,促进氧化应激、脂质沉积 等病理过程,其中某些炎性因子还可促使斑块破裂。核 转录因子一K B ( N F K B ) 广泛存在于真核生物中旧J ,是 一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋
12、白家族,它作为信号 作者简介:魏雪梅( 1 9 7 4 一) ,女。主治医师,学士。从事心内科I 临 床工作。 转导途径的枢纽,在许多免疫和炎性反应调节中起重要 作用p 1 。本实验通过复制载脂蛋白E 基因缺陷小鼠模 型,研究何首乌总苷对载脂蛋白E 基因缺陷小鼠动脉粥 样硬化斑块部位N F K B 蛋白表达的影响。 1 材料与方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物8 周龄A p o E 基因敲除( A p o E 一一) 雄性小鼠2 4 只,体质量( 2 2 3 ) g ,购自北京大学医学部 实验动物部,动物合格证号:W K 0 5 4 7 1 2 5 1 。恒温室内饲 养,温度2 5 ,湿
13、度5 5 。 万方数据 煎j 竖主匡垫! Q 生主旦筮丝鲞筮主翅旦塑i 堕墼:翌! z 垫! 垒:! 生丝:主 1 1 2 药品及仪器何首乌总苷为干粉制剂,由北京中 医药大学中药研究室提供;戊巴比妥钠( 批号:G 0 5 1 2 4 4 ) 购自北京化学公司;即用型S A B C 免疫组化试剂盒( 批号 5 D 0 2 0 4 5 4 ) 、D A B 显色试剂盒( 批号:0 6 1 2 0 8 ) 、P B S 缓冲液 ( 0 O lm m o V L ,p H = 7 4 ,批号:0 3 1 1 2 5 ) 均购自北京中杉 金桥生物技术有限公司;4 多聚甲醛( 批号:E D 2 1 5 8
14、 ) 购 自武汉博士德生物工程有限公司;O 1 5 胆固醇高脂饲 料购自北京维通利华实验动物技术有限公司。全自动组 织脱水机购自英国S h a n d o n 公司,B X 一6 0 显微镜购自日 本O Y M P U S 公司,L e i c a2 1 4 5 切片机购自德国徕卡公司, S P O T I I 数码医学图像系统购自美国U I C 公司。 1 2 方法 1 2 1 动物分组将2 4 只雄性小鼠随机分为4 组,即模 型组、何首乌总苷高、低剂量组和普罗布考组各6 只。 1 2 2 模型制备及给药方法4 组均给予0 1 5 胆固醇 高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化动物模型。同时,模型 组
15、给予0 9 氯化钠注射液0 3m l V d ,何首乌总苷高、低 刘量组分别给予何首乌总苷1 5 0 、2 5m s ( k g d ) ( 0 3m L d ) ,普罗布考组给予普罗布考0 3m L d ( 与高 脂饲料的质量比为1 :1 0 0 ) 。饲养1 6 周后进行指标检测。 1 2 3 心脏灌注实验过程中各组小鼠均无死亡,小鼠 饲养至2 4 周龄,取各组小鼠以l 戊巴比妥钠4 5m s k g 腹腔麻醉。沿胸骨中线将小鼠皮肤剪开,用镊子将皮肤 与皮下组织分离。在中线处作一切口,沿着中线将肋骨 剪断,暴露胸腔和心脏。将小鼠右心耳部位剪一切口,然 后迅速在心尖部位插入注射针头,缓慢匀速
16、注入P B S 缓 冲液2 0m L 开始灌注心脏,5r a i n 内完成,见有灌注液混有 血液从右心耳处流注,小鼠四足抽搐;然后换成4 多聚 甲醛2 0m L 灌注,5r a i n 内完成,可见小鼠慢慢死亡,灌注 结束后,尾巴及全身各器官僵硬。 1 2 4 切片制作将小鼠沿腹中线切开皮肤及皮下薄 膜,暴露肺、肝、胃、肠、脾、胰腺和肾等各器官,并将其切 除下,沿着脊柱将心脏和主动脉至双侧髂总动脉完整剥 离,并将主动脉和心脏固定于4 多聚甲醛溶液中2 4h 。 应用L e i c a2 1 4 5 切片机,取每只小鼠从主动脉根部三尖瓣 处至主动脉弓石蜡连续切片,厚度5I z m ,进行N F
17、 K B 免 疫组化染色,按照即用型S A B C 免疫组化试剂盒说明书 进行。 1 2 5 指标观察应用S P O TI I 数码医学图像系统采集 免疫组化切片图像,主动脉斑块部位蛋白表达的免疫组 织化学染色分析,实验组采用S A B C 法,以试剂公司提供 的阳性片为阳性对照;以P B S 代替一抗作为阴性对照。 对照片染色方法与实验片完全相同,阳性染色为浅黄色、 棕黄色或棕褐色颗粒。 1 3 统计学方法采用S P S S1 4 0 统计软件进行统计学 处理,计量资料以( 鼋4 - s ) 表示,多组间比较采用方差分 析,必要时进行2 组间比较的q 检验。 7 5 5 2 结果 模型组、何
18、首乌总苷高、剂量组和普罗布考组N F K B 表达分别为1 83 1 6 42 6 9 、71 8 6 士44 7 4 、1 26 7 6 1 01 7 9 和34 2 2 12 8 5 。与模型组比较,何首乌总苷高、低 剂量组和普罗布考组均可明显下调A p o E 一一小鼠主动 脉斑块N F K B 蛋白表达( P 0 0 5 ,P 0 0 1 ) 。( 各组 小鼠主动脉斑块N F K B 的表达见图1 4 ,封3 ) 。 3 讨论 目前认为动脉粥样硬化是由血脂代谢紊乱等多种因 素所引发的一种慢性炎症性疾病,而氧化应激在斑块形 成与破裂中扮演着另一重要角色”1 ,在人和动物中均发 现,脂代谢
19、紊乱尤其是低密度脂蛋白( L D L ) 含量急剧升高 可能导致内皮下间隙L D L 的氧化作用及其它修饰作用增 强,它与炎症共同影响和促进临床事件的发生。氧化低 密度脂蛋白( O X L D L ) 通过降低一氧化氮( N O ) 合成、促 进内皮素( E T 1 ) 表达破坏血管舒缩功能的稳定,从而引 起内皮损伤。在动脉粥样硬化斑块形成的过程中,受损 组织释放的大量自由基和多种炎症因子,可加重内皮损 伤,促进氧化应激、脂质沉积等病理过程,其中某些炎症 因子还可促使斑块破裂。研究证实,不稳定斑块患者的 血浆和斑块部位的O X L D L 和基质金属蛋白酶一9 ( M M P 一9 ) 的表达
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