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1、实验研究 2 0 1 0 年7 月第1 7 卷第2 1 期 六味地黄健脑方对A D 小鼠学习记忆及脑组织 S O D 、M D A 含量的影响 刘莎 ( 重庆医科大学中医药学院中药方剂教研室,重庆4 0 1 3 3 1 ) 【摘要】目的:观察六味地黄健脑方对阿尔茨海默病( A D ) 小鼠学习记忆能力及其脑组织超氧化物歧化酶( S O D ) 、微 量丙二醛( M D A ) 含量的影响。方法:采用D 一半乳糖联合氯化铝构建A D 小鼠模型。疗程结束时,跳台实验观察各组 对A D 小鼠记忆能力的影响,测定脑组织中S O D 活性和M D A 的含量。结果:治疗组均可显著提高小鼠学习记忆能力 及
2、脑组织匀浆中S O D 活性。降低潜伏时间及M D A 含量但以中药组作用较明显。结论:六味地黄健脑方可增强A D 小鼠学习记忆的能力。 【关键词1 阿尔茨海默病模型;小鼠;学习记忆能力;六味地黄健脑方 【中图分类号】R 一3 3 2【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 4 - - 4 7 2 1 ( 2 0 1 0 ) 0 7 ( c ) 一0 1 4 0 2 E f f e c t so fL i u w e i d i h u a n g j i a n n a of o r m u l ao nt h e l e a r n i n ga n dm e m o r y a b i l
3、 i t i e so fm o u s em o d e lo fA l z h e i m e rd i s e a s ea n dt h el e v e l so fS O Da n d M D Ai ni t sb r a i nt i s s u e I U S h a ( C h i n e s eM e d i c i n eP r e s c r i p t i o nS t a f fR o o m , T h eT C MC o l l e g eo fC h o n g q i n gM e d i c a lU n i v e r s i t y ,C h o n
4、g q i n g 4 0 13 31 ,C h i n a ) A b s t r a c t O b j e c t i v e :T oe x p l o r et h ee f f e c t so fL i u w e i d i h u a n g j i a n n a of o r m u l ao nt h el e a r n i n ga n dm e m o r ya b i l i t i e so f m o u s em o d e lo fA l z h e i m e rd i s e a s ea n dt h el e v e l so fS O Da n
5、 dM D Ai ni t sb r a i nt i s s u e M e t h o d s :T h em i c em o d e l so fA D w e r ee s t a b l i s h e dw i t hD - g a l a c t o s eu n i t e dw i t ha l u m i n u mc h l o r i d e A tt h ee n do ft h ec o u r s eo ft r e a t m e n t ,t h el e a r n i n ga n d m e m o r ya b i l i t i e sw e r
6、et e s t e dw i t hs t e p - - d o w nt e s ta n dt h el e v e l so fS O Da n dM D Ai nb r a i nt i s s u ew e r ed e t e c t e d R e s u l t s : T h et r e a t m e n tg r o u p sc o u l ds i g n i f i c a n t l yi n c r e a s et h el e a r n i n ga n dm e m o r yc a p a b i l i t ya n dt h ea c t i
7、 v i t yo fS O Di nb r a i nt i s s u eo fm i c e ,a n dd e c r e a s el a t e n tt i m ea n dt h ec o n t e n to fM D A ,b u tt h ee f f e c to fL i u w e i d i h u a n g j i a n n a oF o r m u l aw a s s t r o n g e s t C o n c l u s i o n :L i u w e i d i h u a n g j i a r m a of o r m u l ac a n
8、i m p r o v et h ea b i l i t i e so fl e a r n i n ga n dm e m o r yi nA l z h e i m e rd i s e a s em o u s em o d e l K e yw o r d s A l z h e i m e rd i s e a s e ;M i c e ;A b i l i t yo fl e a r n i n ga n dm e m o r y ;L i u 、:I r e i d i h u a n g i i a n n a of o r m u l a 老年痴呆症亦称阿尔茨海默病( A
9、l z h e i m e r sd i s e a s e ,A D ) , 是老年人常见的一种神经退行性疾病主要表现为以认知功 能障碍为其核心症状,常伴性格改变,近年来,其发病率日趋 上升,已成为严重的社会问题。有资料表明,5 1 5 的老年 人有不同程度的痴呆症状【。作为天然药物的中药尤其是复 方,在防治老年性疾病方面优势明显,因此,笔者选择六味地 黄健脑方,并观察其对A D 模型小鼠学习记忆能力及脑组织 超氧化物歧化酶( S O D ) 、微量丙二醛( M D A ) 含量的影响。 1 材料与方法 1 1 实验动物 健康昆明雄性小鼠6 0 只,体重( 3 0 3 ) g ,自由饮水,标
10、 准饲料,由本院动物实验中心提供。 1 2 药物及试剂 六味地黄健脑方:熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、丹皮、茯 苓、制远志、巴戟天、丹参、天竹黄、柴胡、黄芩等药物组成取 药5 剂,煎成15 0 0m l ,浓缩至7 5 0m l ;脑复康( 吡拉西坦片, 国药准字H 2 0 0 4 6 6 1 6 河南省新谊药业股份有限公司每片 4 0 0m g ) ,取3 0 片配制成6 0 0m l 药液备用,浓度2 0m s m l 。两 药均本院冰箱4 保存备用。超氧化物歧化酶( S O D ) 、微量丙 1 4 中国当代医药C H I N AM O D E R NM E D I C I N E 二醛(
11、 M D A ) 检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。 1 3 实验方法 实验小鼠6 0 只适应性饲养1 周所有小鼠按随机数字 表随机分成对照组、模型组、中药组、脑复康组4 组。每组 1 5 只。 。A 对照组以蒸馏水灌胃,确1 次,连续9 0d ;模型组腹腔 注射D 一半乳糖1 2 0m g ( k g d ) ) 和灌胃三氯化铝1 0m g ( k g d ) , 上午给药,每日1 次,连续9 0d ;用药组于舢C l ,灌胃第3 1 天 起中药组每天下午分别用六昧地黄健脑方煎剂2I I l l ( 相当 于体质量6 0 妇成人临床用量的3 倍) 、脑复康组用备好的脑 复康药液2 “灌
12、胃,每日1 次,均连续6 0d 。每周观察各组 小鼠神经行为及其精神状态等。 1 4 观察指标 1 4 1 跳台法测定小鼠学习和记忆能力末次给药2h 后进 行小鼠跳台实验,实验分为训练和测试。将小鼠放入D T - 2 0 0 跳台自动测试仪实验箱内,适应环境5r a i n ,轻放于平台上 即给予3 6V 电压刺激,使小鼠受电击3 次,记录小鼠跳至平 台安全区的潜伏期,并记录5m i n 内的触电次数( 学习成绩) 。 2 4h 后进行记忆能力测试,将小鼠置跳台上。记录小鼠第 万方数据 2 0 l O 年7 月第1 7 卷第2 l 期实验研究 1 次跳下受电击的时间( 潜伏期) 和5r a i
13、 n 内受电击的次数( 错 误次数) 。 1 4 2 取材及检测跳台实验后处死小鼠,立即取其脑组织。 冷生理盐水漂洗残血,滤纸拭干。称重,剪碎加入9 倍的冰生 理盐水,制成1 0 的水相组织匀浆,离心( 35 0 0r m i n ) 1 0r a i n , 取上清液置4 待测备用,S O D 活性及M D A 含量测定严格 按照试剂盒说明书操作。 1 5 统计学处理 数据采用S P s S1 3 0 统计软件包处理所得数据均用元蟠 表示,组间比较用单因素方差分析,两两比较用口检验。 2 结果 随机选择每组1 2 只小鼠进行统计分析。 2 1 各组小鼠学习及记忆能力的影响 见表1 。 表1各
14、组小鼠学习及记忆能力的影响( 牙拯) 。 例数学习成绩( 5r a i n记忆能力 ( n )错误次数次) 潜伏期( s ) 5m i n 错误次数( 次) 对照组1 2O 6 1 o 5 32 7 8 3 6 , 6 4 5 60 4 l o 2 9 模型组 1 22 2 4 o 加+6 7 7 5 , 3 0 0 1 1 9 6 o 7 4 中药组1 20 9 7 o 4 8 1 9 5 5 5 , 5 8 3 酽1 0 2 , 0 5 2 脑复康组1 21 0 2 , 0 5 9 “2 1 8 3 2 * 5 7 7 矿0 9 8 * 0 7 0 与对照组比较,。P 0 O l ;与模型
15、组比较,愀0 0 5 2 2 各组小鼠脑组织S O D 活性和M D A 含量的比较 见表2 。 表2 各组小鼠脑组织S O D 活性和M D A 含量的比较( 牙血) 组别例数( n ) S O D ( U m g p r o t )M D A ( n m o l m g p r o t ) 对照组1 21 5 5 6 2 1 4 6 22 2 5 3 6 , 8 7 2 1 模型组 1 21 2 9 7 8 , 9 3 7 4 3 9 5 2 , 9 7 1 3 中药组 1 21 5 0 6 5 , 1 6 7 6 “2 4 9 1 2 7 6 3 3 , A 脑复康组1 21 4 7 3
16、 0 士1 7 2 1 。2 5 8 2 5 7 8 4 0 与对照组比较,+ P 0 0 5 ;与模型组比较,? P o 0 5 ;与脑复康组比较, 6 D 0 0 5 3 讨论 A D 的发病机制十分复杂目前未完全明确中医认为本 病的发生多与痰瘀内阻有关,与脑、心、肾关系密切,属中医 “果病”、“郁证”、“文痴”等范畴,古今医家均视肾精不足、髓 海空虚为主兼痰浊、瘀血为老年痴呆病的基本病机。本方以 六味地黄汤加减化裁而来,共达补肾益智、化瘀豁痰之效。地 黄汤为滋阴补肾之经典名方,出自小儿药证直诀,在中医 临床中被广泛应用。药理学研究表明,六味地黄汤具有广泛 的药理学作用,包括延缓衰老、调节
17、免疫和内分泌功能。陈云 波等1 3 的实验结果证实中药复方六味地黄汤对模型小鼠体 内与免疫炎症反应相关的各种细胞因子都有一定的影响,即 均能起到一定的调节作用,且作用效果较明显。其认为运用 补肾法调整衰老机体的免疫功能,对防治老年性痴呆的发生 发展具有重要的作用。 学习记忆能力测试是A D 动物实验研究中一项重要的 行为学指标,现代医学认为自由基引起的氧化损伤是不同 病因诱发神经退行性疾病最后的共同通路氧化应激参与了 A D 的病理过程1 4 】。而S O D 是体内重要的抗氧化酶,能清除自 由基而具有抗自由基损伤作用。M D A 是体内自由基对不饱 和脂肪酸引发的脂质过氧化反应的分解产物,其
18、含量的多少 可间接反映A D 病理状态下机体脂质过氧化水平的高低和 对组织细胞损伤的程度 5 - 6 1 。而运用D 一半乳糖建立衰老动物 模型早有报道青年小鼠长期注射D 一半乳糖后与老龄小鼠 相似,其引起脑神经元的一系列退行性变化,是比较理想的 A D 模型p 棚。本实验采用D 一半乳糖联合氯化铝构建A D 小鼠 模型,结果与空白对照组比较,模型组学习记忆成绩明显下 降。表明模型复制成功。 本实验对A D 小鼠脑组织中S O D 活性及M D A 含量进 行研究显示模型组小鼠脑组织中S O D 活性显著下降而 M D A 含量显著升高( P 0 0 5 ) ,小鼠学习、记忆能力明显受损, 中
19、药组与模型组比较S O D 活性有明显提高而M D A 含量明 显降低,表明六味地黄健脑方能降低A D 小鼠脂质过氧化代 谢产物M D A 的含量。提高S O D 的活性表现出了抗过氧化 损伤的作用,这可能是本方防治A D 的机制之一。但其具体 作用机制还有待于进一步研究。 参考文献1 【l 】1 史宏,张静,杨继峰,等茵陈五苓散提高痴呆小鼠脑组织抗氧化能力的 实验研究广西中医药,2 0 0 9 ,3 2 ( 1 ) :5 4 - 5 6 f 2 1 张志锋,李琳,高颖,等G I , P - 1 对链尿佐菌素诱导的痴呆大鼠在M o r r i s 水迷宫中行为学的保护作用中国现代医生,2 0
20、1 0 A 8 ( 7 ) :7 8 ,1 5 f 3 1 3 陈云波,王奇,罗荣敬,等不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因 子表达的影响们时珍国医国药,2 0 0 9 ,2 0 ( 1 1 ) :2 6 8 8 - 2 6 9 0 4 1 林茂,万章,王春梅白藜芦醇对阿尔茨海默病小鼠记忆和抗氧化能力 的影响叨现代中西医结合杂志,2 0 0 9 ,1 8 ( 5 ) :4 8 4 - - 4 8 6 f 5 1 安耀荣,朱向东,王燕抗衰益智胶囊对实验性老年痴呆病大鼠脑组织 中S O D 、C A T 活性及M D A 含量的影响m 中医研究,2 0 0 9 ,2 2 ( 6 ) :1 3 1
21、 5 【6 1 吴红彦,乇彩霞黑逍遥散对A D 小鼠学习记忆及抗氧化能力的影响 f J l 甘肃中医学院学报,2 0 1 0 ,2 7 ( 1 ) :9 1 1 【7 1 陆盈盈,高良才,袁崇刚D 一半乳糖致老年性痴呆模型的评价和海马脑 区甘丙肽表达研究 J 】冲国神经免疫学和神经病学杂志, 2 0 0 7 ,1 4 ( 4 ) :1 9 1 【8 】刘萍,丁玉琴,王爱梅,等六味地黄汤对D 一半乳糖致衰老小鼠运动能 力的影响m 中国医药导报2 0 0 8 ,5 ( 1 1 ) :1 6 - - 1 8 ( 收稿日期:2 0 1 0 - 0 6 - 2 2 ) 本刊实验研究栏目介绍 刊登以实验为手段研究医学、药学领域的热点、前沿问题或介绍最新研究成果的文章。要求方法具有可行性、稳定性、可鉴性。: 来稿请寄:北京市朝阳区通惠家园惠润园5 - - 3 - 6 0 2 ( * 当代医药杂恚社挪政编码:1 0 0 0 2 5 : j 投稿热线:0 1 0 5 9 6 7 9 0 7 6 5 9 6 7 9 0 7 7 传真:0 1 0 - 5 9 6 7 9 0 5 6 投稿信箱:z g d d y y 1 6 , 3 c o r n: 。,。一。一。一。一。,。一。,。一。一。么 C H I N AM O D E R NM E D I C I N E 中国当代医药1 5 万方数据
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